HSVⅡ－DNA在生殖器疱疹检测中的应用价值分析

姚 鹏，李 芃

（华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院 皮肤科，湖北 武汉430014）

生殖器疱疹（GH）由单纯疱疹病毒（HSV）引起的性传播疾病，可通过胎盘及产道感染新生儿，导致流产及新生儿死亡，与宫颈癌的发生也相关。单纯疱疹病毒（HSV）分Ⅰ型（HSVⅠ）和Ⅱ型（HSVⅡ）。HSVⅡ是生殖器疱疹的主要病原体，90%的生殖器疱疹病例都是有HSVⅡ引起的。因此，HSVⅡ的检测对于临床生殖器疱疹的诊断具有重要意义。本文采用FQ－PCR技术检测生殖器疱疹患者的HSVⅡ－DNA，对该方法对于生殖器疱疹诊断的临床意义进行探讨，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2009年4月至2011年4月我院性病门诊收治的106例患者，依据其临床表现及血清抗HSV－2检测诊断初步诊断为GH。男69例，女37例，年龄18－67岁，平均年龄31.2岁。病程2天－4年，＜10天者59例，10天～30天者31例，＞30天者16例。患者均符合以下诊断标准［1］：①患者本人或配偶有不洁性接触史。②生殖器部位有典型簇集状水疱、脓疱或点状糜烂、溃疡、结痂等典型皮损或在生殖器部位出现红斑、丘疹、皲裂等非典型皮损。

1.2 方法

1.2.1标本采集用无菌棉签擦取皮损部位液体组织液或阴道分泌物，置0.5ml生理盐水中。另采集少量标本，立即浸入0.5ml病毒移送液内－70℃冰箱保存，备用。同时抽取患者静脉血2mL，离心，取血清备用。

1.2.2HSVⅡ检测 ①HSVⅡ－DNA的检测：参考邓念华等建立的实时PCR检测HSVⅡ的方法［2］，采用深圳匹基生物工程公司提供的试剂盒，在HSV－DNA聚合酶基因保守序列设计引物进行FQPCR检测，严格按照试剂盒说明书进行操作，采用全自动荧光定量分析仪。②HSVⅡ抗体检测：采用美国Trinity公司提供的HSVⅡ酶联免疫试剂盒，具体操作严格按照试剂盒说明书进行，采用美国Hyperion－MR公司的酶标仪检测血清样本中HSVⅡ抗体。③病毒培养［3］：取0.1ml含有所取临床标本的病毒移送液接种到已生长成片的Vero细胞中，于37℃吸附2h后加入维持液，37℃恒温培养，逐日观察细胞病变（CPE），若接种第3天无CPE出现，即收取0.1ml培养液转种于新制备的单层Vero细胞，继续观察，盲传3代没有典型CPE即可报告病毒分离阴性。

1.2.3FQ－PCR法和ELISA法的评价 以病毒培养法的检测结果为金标准，分别计算FQ－PCR法和ELISA法检测HSVⅡ病毒的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，并对以上两种方法进行评价。

1.3 统计学处理

采用SPSS13.0软件对数据进行统计学处理，组间比较采用χ2检验，P＜0.05表示有统计学差异。

2 结果

2.1 三种方法检测阳性率比较

106例患者中86例HSVⅡ病毒分离阳性，PCR检出HSVⅡ阳性75例，ELISA检出HSVⅡ阳性69例。结果见表1。

表1 三种方法检测HSV阳性率比较（n＝106）

2.2 FQ－PCR法和ELISA法的评价

以病毒培养检测的结果为金标准，计算FQPCR法和ELISA法检测HSVⅡ的灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值，对两种方法分别进行评价，结果见表2。

表2 对FQ－PCR法和ELISA法检测HSV的结果评价

3 讨论

单纯疱疹病毒Ⅱ（HSVⅡ）是一类严重危害人类健康、引起人类多种疾病的常见病原体，目前实验室的检测方法主要有［4］：病毒分离培养、免疫荧光检测（IFA法）、分子生物学检测（PCR法）、免疫印迹检测法（WB法）及抗体检测法（ELISA法），但仍以从水疱或皮损组织液中分离培养出HSV病毒作为“金标准”。但在临床诊断中，目前主要应用的是抗体检测法（ELISA 法）。

本文对FQ－PCR法和ELISA法检测HSVⅡ的灵敏度、特异度等进行了比较，通过本实验结果可看出：FQ－PCR法检测HSV病毒的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均高于ELISA法，特别是特异度和阴性预测值更显著。所以，目前临床常用的ELISA法虽相对较简单，但其灵敏度、特异度相比FQ－PCR技术却不够高。在病毒培养法中，只要有1～10个感染性HSV就可以检测出来，而ELISA法及PCR、IFA等方法则需要104～106个病毒颗粒才可以检出，因此病毒分离培养一直被当做是HSV检测的“金标准”。而作为“金标准”的病毒培养法检测周期长、操作复杂、影响因素多、条件要求高，而且对分离的病毒株也不容易分型，在临床检验上的应用也受到了限制。所以FQPCR技术在HSV病毒的检测上具有快速、灵敏、特异性强等优越性，对于生殖器疱疹的诊断具有重要意义，值得在临床推广应用。

［1］邵长庚，王千秋，编译.美国最新修订的性病诊断标准［M］.国外医学·皮肤病学分册，1998，24：41.

［2］邓念华，张德纯.实时PCR检测 HSV－2的方法学建立［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2006，26（4）：375.

［3］杨慧兰，杨 军，刘荣卿，等.ELISA法检测单纯疱疹病毒Ⅱ型特异性抗体的临床应用研究［J］.第三军医大学学报，2000，22（4）：383.

［4］姚建婷，晋安.HSV及其实验室检测研究进展［J］.安徽卫生职业技术学院学报，2010，9（1）：88.