HPLC测定益肝颗粒中五味子甲素的质量浓度

杨大宇，李洪阳，邹海曼，王 磊，刘 懿，李彦冰

(黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨 150040)

益肝颗粒是由丹参、五味子等中药制备而成的纯中药制剂.制剂经试验研究和临床验证，具有活血止痛，凉血舒肝，清热燥湿，益气补虚功效.临床上主要用于急、慢性乙型肝炎、乙肝转阴等疾病，具有良好疗效.其中五味子具有保肝，降低转氨酶等作用，五味子所含的五味子甲素也是益肝颗粒的有效成分［1－3］，本文采用高效液相色谱法［4－5］测定了五味子甲素的质量浓度，以控制益肝颗粒的质量.

1 仪器与试药

1.1 仪器

戴安Ultimate3000高效液相色谱仪(VWD－3400紫外检测器、WPS－3000自动进样器、TCC－3x00柱温箱、LPG－3x00泵、Chromeleon色谱工作站);KQ－250E型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司);电子分析天平(AB204－N，梅特勒－托利多仪器上海有限公司);Millinnium32旋转蒸发仪RE－52AA(上海亚荣生化仪器厂).

1.2 试药

药材(购自哈药集团世一堂饮片厂);实验用水系重蒸水;甲醇为色谱纯;五味子甲素对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为0764－9804;其他试剂为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:依利特SinoChrom ODS－BP(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇－水(87∶13);检测波长为254 nm;柱温:25℃;流速为1.0mL/min;进样量10μL.在此色谱条件下，五味子甲素峰与其他峰分离明显.五味子甲素保留时间约为8.1min，在该色谱条件下阴性无干扰.对照品、样品、阴性对照品色谱图，见图1.

图1 HPLC色谱图

2.2 试液配制

2.2.1 对照品溶液的制备

称取五味子甲素对照品10.00mg置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;量取5.0mL加入到10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得.

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取样品1 g，加入50mL甲醇，250 W，40 kHz超声30min，冷却至室温，用甲醇补足损失的质量，过0.22 μm的微孔滤膜，即得.

2.2.3 阴性供试品溶液

按照供试品溶液的配制方法，取处方中去除五味子药材制成空白对照品，作为阴性供试品溶液.

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系的考察

精密吸取五味子甲素对照品溶液(100μg/mL)2、4、6、8、10μL，依次注入液相色谱仪中，依次注入液相色谱仪中，记录峰面积.按上述色谱条件进行测定以五味子甲素进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线.五味子甲素回归方程为 Y=22.53X，r=0.9992.结果表明五味子甲素进样量在0.2～1.0μg范围内与峰面积线性关系良好.

2.3.2 精密度试验

精密吸取五味子甲素对照品溶液10μL，重复进样5次，峰面积值RSD为0.104%，结果表明，仪器精密度良好.

2.3.3 稳定性试验

按上述方法，取供试品溶液，精密吸取样品溶液10μL，每隔2 h进样1次，共进样6次，峰面积的RSD为1.67%，结果表明，样品中五味子甲素在10 h内基本稳定.

2.3.4 重复性试验

精密称取同一批样品 1.0 g，按照 2.2.2 项下平行制备5份供试品溶液，供试品分别进样10μL，对照品进样10μL进行质量浓度测定，结果RSD为1.19%，结果表明，该方法的重复性良好.

2.3.5 加样回收试验

精密称取已知含量的样品0.75 g，共9份，加入五味子甲素对照品溶液(40μg/mL)6.0、4.4、2.8mL，按样品供试品处理方法制备样品，以10μL进样.按2.2项下色谱条件测定，求得平均回收率为98.82%，(n=3)，见表1.

表1 加样回收试验结果

3 结语

药典中所收载的五味子所选择的定量指标成分为五味子醇甲，但本处方制剂中所选择的定量指标为五味子甲素，两者测定条件差异很大.本试验曾采用不同的流动系统，对甲醇－水系统不同比例进行试验，结果采用甲醇－水(87∶13)流动相系统时，所测得五味子甲素峰与其他组分峰能达到较好的分离.

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