陆继梅 孟建华 安 立 安红梅
石家庄市中医院 河北石家庄 050051
为了研究中医外科临床常用散剂的体外抗菌谱及抗菌力,通过对传统方、各医院的协议方检索,在52首方剂中出现的60味中药,运用临床药敏学检验学方法,对其体外抗菌作用进行细菌学研究。
本实验所用的各种中药材,均由本院中药房提供。培养基为水解酪蛋白琼脂;增菌液;菌株来源(标准质控菌株):绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌;药敏纸片,将化学分析滤纸以打孔机打制成直径5mm圆片,高压灭菌备用。
1.2.1 不易研成细末药材的制备及抑菌实验
主要为植物性药材。将单味中药粗粉碎后取药粉3g置试管内,加入蒸馏水浸入后至液体约3ml,经高压灭菌、离心沉淀后使每毫升药液含药量相当生药1g后备用。将菌株涂于M-H平板上,放入药敏纸片,纸片中心间隔距离大于24mm。每个药敏纸片滴入药液5μl,将培养皿放入35℃孵育箱中24h测抑菌环。
1.2.2 容易研成细末药材的制备及抑菌实验
主要为矿物性、脂性药材。将药物粉碎过200目细筛得粉剂,无菌处理。取散剂2mg压制成直径约5mm的圆片。将菌株涂于M-H平板上,放入药片,药片中心间隔距离大于24mm。放入35℃孵育箱中24h测抑菌环。
1.2.3 抑菌试验的结果判定
耐药:细菌正常生长,无抑制现象,以(-)表示。中介:在药敏纸片或药粉片下无菌生长,边缘为一抑菌环,其直径小于6mm,以(+)来表示。敏感:抑菌范围大于6mm,记录下其直径;实验中出现抑菌环大于24mm,且抑菌范围连成一片无法测量其抑菌环的以“>”表示。
1.2.4 MIC及MBC测定
单味中药及散剂的药物制备同前。将药物配制成3mg/ml原液,以倍比稀释法将其分别稀释成每毫升含药量1、0.5、0.25、0.125、0.0625mg,分装于无菌试管中,每管2ml,经6h培养的标准质控实验菌株悬液0.01ml,植入上述试管。置35℃孵育箱24h。结果判定:含中药量最少且无菌生长的稀释度为该药对试验菌的MIC。将无菌生长试管内的培养液再接种血琼脂培养基24h,无细菌生长的含药量最少的试管为该药对试验菌的MBC,用于中药体外抗菌作用的定量观察。
无明显拮抗现象出现,有明显协同的作用。轻粉、红粉、硼砂三种中药在两实验药片之间出现抑菌范围连片,形成不对称抑菌环。筛选的60味中药中有32种(53%)对实验的所有临床菌株均无抑菌作用。植物类中药抗菌谱窄、抗菌力低。矿物质类除轻粉、红粉、硼砂外,大多数抗菌谱窄、抗菌力低,甚至没有抗菌作用。
经过抑菌试验的初步筛选,针对试验中的抗菌作用强的红粉、轻粉、硼砂进行了标准菌株的MIC及MBC测定。三种药物抗菌谱广,未出现耐药,抗菌力强,但其MIC及MBC测定高于常用抗生素值,在10~100倍之间。
表1 不易研成细末中药对临床菌株的抑菌范围(单位:mm)
表2 容易研成细末中药对临床菌株的抑菌范围(单位:mm)
表3 红粉、轻粉、硼砂对标准质控菌株的MIC与MBC结果(单位:mg/ml)
表4 中医外科外用散剂对标准质控菌株的MIC与MBC结果(单位:mg/ml)
活血化瘀类药物抗菌谱广,抗菌作用弱;矿物质类药材中的龙骨、滑石、石膏无抗菌作用;清热解毒药物类抗菌谱窄,抗菌作用差。
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