大叶钩藤有效成分的分离

张秋翠 郭劲松



大叶钩藤有效成分的分离

张秋翠 郭劲松

（中国中医科学院广安门医院南区，北京 102618）

大叶钩藤（ncaria macrophylla Wall）为茜草科（Rubiaceae）钩藤属植物，本课题目的在于对大叶钩藤的70%乙醇提取物，依次分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。氯仿部位分离得到了2个三萜类化合物，对它们的结构通过核磁共振和质谱等进行了鉴定。本课题对钩藤属大叶钩藤的提取液，减压浓缩至无醇味，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，取氯仿提取物进行化学成分的系统分离，从中得到化合物1和2，经NMR和MS等数据鉴定他们的结构。两个单体化合物的化学结构被分别鉴定为熊果酸和齐墩果酸。为进一步研究大叶钩藤的药理活性和药材质量提供了物质基础。

大叶钩藤；氯仿；提取；化学结构

大叶钩藤（Uncaria macrophylla Wall）为茜草科钩藤属植物，带钩的茎枝入药。大叶钩藤中含有生物碱、三萜类、黄酮类等化合物，具有诸多的药理活性。现临床多用于治疗头晕目眩、惊痫抽搐、全身麻木等心血管和神经系统疾病，且已成为治疗高血压常用药物。

笔者查阅文献后发现，大多文献对钩藤的鉴别方法仅有性状鉴别和一般鉴别，没有含量测定和薄层鉴定，而2010版《中国药典》也仅有钩藤药材的性状鉴别和生物碱的沉淀反应鉴定。对于不同种钩藤药材，也主要是基于药材的性状、显微特征以及薄层色谱鉴别，但性状和显微特征鉴别困难，而且主观性较强，需要具有长期实践经验的专业人员完成。可见对于钩藤化学成分、质量标准的深入研究，完善钩藤的质量控制方法十分必要。本课题目的在于对钩藤的氯仿提取物进行了化学成分的系统分离，将分离得到的单体化合物进行理化性质测定并结合NMR及MS等波谱数据鉴定其化学成分，从而完善钩藤的定量质量标准，并为其药理活性研究提供化学活性物质基础。

1 资料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 仪器 色谱柱（北京玻璃仪器厂），Bruker AV Ⅲ 600型核磁共振波谱仪，LTQ-Obitrap XL液相质谱仪，RE-52AA型旋转蒸发仪及恒温水浴锅（上海亚荣生化仪器厂），ZFI型三用紫外分析仪。

1.1.2 材料 薄层色谱硅胶预制板（烟台市化学工业研究所），柱层层析硅胶（100～200目，青岛海洋化工厂分厂），大叶钩藤药材（产地：广西），乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇，均为分析纯，纯化水。

1.2 提取与分离 大叶钩藤带钩茎枝药材用70%乙醇加热回流提取3次，每次3h，减压回收溶剂的得浸膏。浸膏加少量水混悬后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。回收溶剂，得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物。

将氯仿提取物用氯仿和适量甲醇溶解，加入1.5倍量的硅胶拌样，减压干燥，过100目筛得样品[1]。

用氯仿和30倍量的硅胶湿法装柱，静置24h，加入样品，以氯仿-甲醇（100:1～10:1）梯度洗脱，每500ml溶剂收集1次，减压浓缩，进行TLC跟踪检查并合并相似组分。

将相似组分加入硅胶拌样，硅胶反复柱层析，氯仿-甲醇梯度洗脱纯化，得到化合物1和2。

提取分离流程图如下。

2 结果

将分离得到的两个化合物用核磁共振仪和质谱仪进行结构鉴定，结果如下：

化合物1 熊果酸（ursolic acid），ESI-MS m/z : 479[M + Na]+，分子质量为 456。

1HNMR（Pyridine-d5）δ：0.95（3H，d，J=6.6Hz，-CH3），1.00（3H，d，J=6.6Hz，-CH3），0.90（3H，s，-CH3），1.02（3H，s，-CH3），1.05（3H，s，-CH3），1.23（3H，s，-CH3），1.24（3H，s，-CH3），2.36（1H，d，J=11.4Hz，H-18），3.45（1H，dd，J=5.4，11.4Hz，H-3α），5.49（1H，t-like，H-12）。

13CNMR（Pyridine-d5）δ：39.5（C-1），28.5（C-2），78.5（C-3），39.8（C-4），56.2（C-5），19.2（C-6），34.0（C-7），40.4（C-8），48.4（C-9），37.7（C-10），25.3（C-11），126.0（C-12），139.7（C-13），42.9（C-14），29.1（C-15），24.3（C-16），48.4（C-17），53.9（C-18），39.9（C-19），39.8（C-20），31.5（C-21），37.8（C-22），29.2（C-23），17.0（C-24），16.1（C-25），17.9（C-26），24.0（C-27），180.2（C-28），17.8（C-29），21.8（C-30）。以上数据与文献报道的齐墩果酸一致。

化学结构如下：

化合物2 齐墩果酸（oleanane acid），ESI-MS m/z : 479[M + Na]+，分子质量为 456。

1HNMR（CDCl3）δ：0.77（3H，s，-CH3），0.78（3H，s，-CH3），0.906（3H，s，-CH3），0.914（3H，s，-CH3），0.93（3H，s，-CH3），0.99（3H，s，-CH3），1.14（3H，s，-CH3），2.82（1H，dd，H-5），2.82（1H，dd，H-5），3.21（1H，dd，H-3），5.29（1H，t，H-12）。

13CNMR（CDCl3）δ：38.6（C-1），27.4（C-2），79.2（C-3），39.0（C-4），55.4（C-5），18.5（C-6），32.9（C-7），39.5（C-8），47.8（C-9），37.3（C-10），23.2（C-11），122.9（C-12），143.8（C-13），41.9（C-14），27.9（C-15），23.6（C-16），46.7（C-17），41.3（C-18），46.1（C-19），30.9（C-20），34.0（C-21），32.6（C-22），28.3（C-23），15.7（C-24），15.5（C-25），17.3（C-26），26.1（C-27），181.5（C-28），33.2（C-29），23.8（C-30）。以上数据与文献报道的齐墩果酸一致。

化学结构如下：

3 讨论

3.1 钩藤中含有生物碱，游离生物碱易溶于有机溶剂。甲苯作为提取溶剂，其沸点高，浓缩困难，因此不被采用；乙醚沸点低，挥发性强，易燃易爆，不安全，最终也没被采用。而氯仿提取钩藤碱效果好，且价格适中，适合作为工业化提取的溶剂。

3.2 由于钩藤碱对热不稳定，而且在极性溶剂中又容易转化成异钩藤碱，因此实验过程中应注意将温度控制在60℃以下。

3.3 根据药理研究发现，齐墩果酸为五环三萜类化合物，具有保肝、降转氨酶、促进肝细胞再生、保护肝降酶、抗炎、强心利尿、抗肿瘤等功能，临床上用于治疗急性黄疸性肝炎，对慢性肝炎也有一定疗效。熊果酸为三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低高血糖等多种生物学效应。另外，大叶钩藤中还含有生物碱，其中钩藤碱和异钩藤碱有较强的降压作用，以及对心脏和中枢神经系统的影响等多种药理活性。钩藤总碱还有较强的逆转肿瘤细胞多药耐药的作用。因此，有必要对大叶钩藤进行开发性研究，使其发挥更大的作用，创造更大的价值。

[1] 杨君,宋纯清,胡之璧.大叶钩藤的化学成分研究[J].中国中药杂志,2000, 25(8):484-485.

[2] 鞠建华,周亮,林耕.枇杷叶中三帖酸类成分及其抗炎、镇咳活性研究[J].中国药学杂志,2003,38(10):752-757.

2011-12-01

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.02.106

1672-2779（2012）-02-0150-02

（本文校对：王治华 ）