RP-HPLC法测定天王补心丸中梓醇的含量

杨仕林，李小刚，谢云（.湖北阳新县人民医院，湖北 阳新 43500；.湖北中医药大学，武汉 430064）

天王补心丸是2010年版《中国药典》（一部）收录的中药制剂，以丹参、当归、党参、茯苓、五味子、地黄、酸枣仁（炒）等中药为原料，经粉碎成细粉，过筛，混匀，泛丸，干燥而得，具有滋阴养血、补心安神之功效，用于心阴不足、心悸健忘、失眠多梦、大便干燥等。在其药品标准中仅对五味子醇甲进行了含量测定[1]，国内有文献报道该制剂中其他药材主要成分的定量测定方法，如丹参素、酸枣仁皂苷A、丹酚酸B[2-4]，但对该制剂中地黄的主要成分梓醇的含量测定方法未见报道。为此，笔者采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定天王补心丸中梓醇的含量。

1 仪器与试药

LC-10A型HPLC仪（日本岛津公司）；BS124S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

梓醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号:808-9301）；天王补心丸（上海和黄药业有限公司，规格:9 g，批号:A090606、A091003、A091108）；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent-ZORBX SB-C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液（V/V）＝1∶99；流速:1.0mL·min－1；检测波长:210 nm；柱温40 ℃；进样量:20μL。在此色谱条件下，梓醇与相邻峰的分离度均＞1.5，理论板数按梓醇峰计算为7300。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.梓醇Fig 1 HPLC chromatogramA.reference substance；B.the test；C.negative control；1.catalpol

2.2.1 对照品溶液的制备 取梓醇对照品适量，精密称定，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成相当于梓醇浓度为200.4μg·mL－1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取天王补心丸10粒，研细，取约4.5 g，精密称定，加甲醇50mL，称定重量，置水浴上加热回流1.5 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，浓缩至近干，残渣用流动相溶解，转移至10mL容量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm的滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按天王补心丸处方配比及制备工艺，取除地黄外的其他药材，制得阴性样品，再按“2.2.2”项下方法制得阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

取梓醇对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件，分别精密量取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10mL，置于100mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液。精密吸取系列对照品溶液各20μL，注入HPLC仪。以梓醇浓度（X，μg·mL－1）为横坐标，其峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程A＝3821.4X－832.7（r＝0.9993）。结果表明，梓醇检测浓度在2.004～20.046μg·mL－1范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

取同一份梓醇对照品溶液（浓度为10.02μg·mL－1）适量，精密吸取20μL，按“2.1”项下色谱条件，注入HPLC仪，重复进样5次，测定峰面积。结果，RSD＝0.7%，表明该法的精密度良好。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液适量，分别于1、2、4、6、8 h测定梓醇的峰面积。结果，峰面积测定值基本不变，RSD＝1.4%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.6 重复性试验

精密称取同一样品（批号:A090606）适量，按“2.2.2”项下方法平行制备5份供试品溶液，依“2.1”项下色谱条件测定峰面积。结果，样品中每丸梓醇的平均含量为1.1mg，RSD＝1.7%，表明该方法具有较好的重复性。

2.7 加样回收率试验

取已测含量的天王补心丸适量（批号:A090606），研细，取2.5 g，精密称定，分别精密加入梓醇对照品溶液（浓度为50.1μg·mL－1）4.0、5.0、6.0mL，加甲醇至 50mL，称定重量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

2.8 样品含量测定

取3批样品（批号:A090606、A091003、A091108）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取20μL，注入HPLC仪，记录峰面积。另取梓醇对照品溶液（浓度为10.02μg·mL－1）适量，依“2.1”项下色谱条件测定，按外标法以峰面积计算天王补心丸样品中梓醇的含量。结果，3批样品中每丸梓醇的平均含量分别为1.1、0.98、0.98mg。

3 讨论

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

3.1 色谱条件的优化

梓醇的最大吸收波长为210 nm，故选择210 nm波长作为检测波长。考虑到甲醇溶剂的末端吸收，试验仅选择了乙腈作为强溶剂。同时，比较了2种流动相乙腈-0.1%磷酸溶液（V/V）＝1∶99和乙腈-水（V/V）＝1∶99，结果前者的分离效果较佳，峰形对称，干扰较少。虽然在8min后还有许多极性较小的物质出峰，但对本试验未见影响。

3.2 提取方式

笔者考察了加热回流提取、超声提取2种方式，结果前者提取率较后者高出近20%。此外，还对加热回流的时间和次数进行了研究，结果加热回流提取1次、时间1.5 h即可基本提尽样品中的梓醇。

综上所述，本文建立的方法简便、准确、重复性好，加样回收率符合要求，可用于天王补心丸的质量控制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:515.

[2]何新荣，刘 萍，孙 艳.HPLC-ELSD测定天王补心丸中酸枣仁皂苷A的含量[J].中国医院用药评价与分析，2011，11（10）:910.

[3]孙 裕，王莲萍，杨玉华.HPLC法测定天王补心丸（浓缩丸）中丹酚酸B的含量[J].卫生职业教育，2010，28（2）:91.

[4]杨 芳.RP-HPLC法测定天王补心丸中丹参素含量的研究[J].实用中医内科杂志，2008，22（6）:105.