HPLC法同时测定布洛芬口服液体制剂中布洛芬、苯甲酸钠的含量

李海燕，刘治安，莫炫永，尹庆和，廖戈莹（.中山大学附属东华医院药学部，广东 东莞 530；.东莞市国药质量检测中心，广东 东莞 5300）

布洛芬口服液体制剂是临床常用的解热镇痛药，适用于急性上呼吸道感染等引起的小儿发热，也可用于缓解儿童轻至中度疼痛，如头痛、关节痛、偏头痛、牙痛、肌肉痛、神经痛、痛经等症。其处方中还含有防腐剂苯甲酸钠，它在食品和药品中可作为防腐剂，但过量摄入会对人体产生一定的毒性，尤其对于儿童更需要注意。不同剂型的布洛芬口服液体制剂所含的苯甲酸钠不同。高效液相色谱（HPLC）法是测定苯甲酸钠的常见方法[1-3]。目前，HPLC法同时测定布洛芬口服液体制剂中布洛芬、苯甲酸钠含量的方法尚未见报道。笔者在查阅文献的基础上建立了HPLC法同时测定布洛芬口服液体制剂中布洛芬、苯甲酸钠含量的方法，方法操作简单，结果可靠，重复性好，可为布洛芬口服液体制剂的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200型RRLC高分离度快速HPLC仪，包括G1314B VWD SL紫外检测器、G1312B Bin Pump SL型二元泵、G1316B TCC SL型柱温箱、G1329B ALS SL型标准自动进样器（美国安捷伦科技有限公司）；KQ5200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

布洛芬对照品（使用前不需干燥处理，中国食品药品检定研究院，批号:100179-201105）；苯甲酸钠对照品（中国食品药品检定研究院，批号:100433-200301）；乙腈、甲醇为色谱纯（德国默克公司）；水（屈臣氏蒸馏水经0.2 μm微孔滤膜过滤）；十二烷基磺酸钠（西格玛奥德里奇（上海）贸易有限公司，含量≥99%，批号:106437）；样品为上市的布洛芬口服液体制剂（共20种规格，包括了糖浆剂、口服液、滴剂、口服混悬剂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用外标法测定。色谱柱:Waters XTerra®MS C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流动相:乙腈-0.5%十二烷基磺酸钠-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1（流动相在使用前需经0.2 μm微孔滤膜滤过）；流速:1mL·min－1；检测波长:230 nm；进样量:10μL；柱温:30℃。以保留时间定性，峰面积定量。理论板数以苯甲酸钠计可达4000以上；样品中苯甲酸钠峰与布洛芬峰及其他峰能够达到分离度＞2，保留时间苯甲酸钠为9.5min，布洛芬为11.4min，结果样品中的其他组分对苯甲酸钠和布洛芬的含量测定无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.样品；B.苯甲酸钠对照品；C.布洛芬对照品；1.苯甲酸钠；2.布洛芬Fig 1 HPLC chromatogramsA.sample；B.sodium benzoate control；C.ibuprofen control；1.sodium benzoate；2.ibuprofen

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取苯甲酸钠对照品10.13mg，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成苯甲酸钠浓度为101.3mg·L－1的对照品溶液。精密称取布洛芬对照品12.52mg，置于25mL棕色容量瓶中，加流动相适量超声10min并稀释至刻度，摇匀，制成布洛芬浓度为500.8mg·L－1的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密量取样品适量，置于100mL棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得含布洛芬浓度为0.5mg·L－1的供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例取不含布洛芬和苯甲酸钠的其他成分，制成阴性样品，按“2.2.2”项下方法制备得阴性对照溶液。

2.3 专属性考察

按处方量的比例称取辅料，依“2.2.2”项下方法制备，照“2.1”项下色谱条件测定。结果，在布洛芬、苯甲酸钠主峰处，辅料不干扰结果的测定。

2.4 线性关系考察

精密称取布洛芬对照品适量，加流动相溶解并稀释制成浓度为每1mL中含布洛芬1.547mg的标准贮备溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件测定。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程A＝1650096C+77979（r＝0.9998）。结果表明，布洛芬检测浓度在154.7～1829.0mg·L－1范围内与其峰面积积分值线性关系良好。

精密称取苯甲酸钠对照品适量，加水溶解并稀释制成浓度为每1mL中含苯甲酸钠1.031mg的标准贮备溶液。再精密量取1、2、3、4、5、6、7mL，置于 25mL容量瓶中，加水稀释至刻度，按“2.1”项下色谱条件测定。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程A＝1120056C+61979（r＝0.9996）。结果表明，苯甲酸钠检测浓度在41.24～288.6mg·L－1范围内与其峰面积积分值线性关系良好。

2.5 精密度试验

分别取“2.4”项下布洛芬和苯甲酸钠的标准溶液适量，连续进样6次，测定峰面积。结果，布洛芬、苯甲酸钠RSD分别为0.16%、0.55%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批号的样品适量，共6份，按“2.1”项下色谱条件测定含量。结果，布洛芬、苯甲酸钠RSD分别为0.33%、0.54%，表明方法重复性良好。

2.7 稳定性试验

取布洛芬口服溶液制剂1瓶，加流动相制成每1mL中约含布洛芬0.5mg的溶液，室温下放置，分别于0、2、4、6、8 h取样，按“2.1”项下色谱条件进样分析。结果，布洛芬、苯甲酸钠的RSD分别为0.44%和0.79%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.8 加样回收率试验

分别配制3份样品，加入一定量的低、中、高浓度对照品溶液，置于100mL容量瓶中，加流动相适量，充分振摇，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过。精密量取续滤液5mL，置于10mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μL，按“2.1”项下色谱条件进样分析。结果，本品中2种成分的平均加样回收率分别为99.40%、100.01%、100.54%（RSD%＝0.10%、0.28%、0.12%）和98.97%、99.03%、100.61%（RSD＝0.17%、0.12%、0.18%），详见表1。

2.9 样品含量测定

按“2.1”项下色谱条件测定20批样品含量，结果本品20批含量测定均符合要求，苯甲酸钠百分量在0.07%～0.30%的范围内，详见表2。

表1 加样回收率试验结果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 讨论

解热镇痛药口服液体制剂上市品种很多，大多含有布洛芬，且大多数试验都是只测定其中的1种或多种主要成分，有紫外分光光度法[4]，以HPLC法居多[5-8]。苯甲酸钠在2010年版《中国药典》（二部）[9]中有收载，含量测定采用双相滴定法，操作比较烦琐，且取样量大。本品中苯甲酸钠含量较低，采用双相滴定法干扰较大，结果易出现误差。但是，对于其中的布洛芬及苯甲酸钠的同时检测暂未有报道。笔者采用HPLC法同时测定布洛芬口服液体制剂中布洛芬与防腐剂苯甲酸钠的含量，操作简单，结果可靠，专属性强，可为控制布洛芬口服液体制剂的质量提供重要依据。

由布洛芬、苯甲酸钠的紫外吸收图谱可知，2种成分在210、262 nm波长左右都有吸收，在210 nm波长处吸收度较高，但210 nm波长靠近末尾吸收，许多物质在此都有吸收，容易产生干扰，故选择230 nm波长作为含量的检测波长。布洛芬不溶于水，苯甲酸钠为水溶性物质，笔者采用了甲醇-水系统，按照不同配比的流动相溶解。为增加布洛芬溶解性及减少其他杂质包括溶剂峰的干扰，最终确定以乙腈-0.5%十二烷基磺酸钠-磷酸（V/V/V）＝520∶480∶1为流动相。

虽然本次检测的苯甲酸钠百分量（0.07%～0.30%）都在国家允许范围内，但是同一制剂不同厂家相差较大。而其对于儿童的含量是否在允许范围内还值得商榷。建议国家有关部门针对同一制剂将苯甲酸钠含量标准具体量化并列为检测项目。

[1]关倩明.头孢泊肟酯口服干混悬剂中苯甲酸钠的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2005，36（1）:35.

[2]陈文秋，王贵华，李 田，等.银黄口服液中苯甲酸钠和羟苯乙酯的定量分析[J].中国药业，2005，14（9）:56.

[3]毛桂福.反相高效液相色谱法测定呋喃西林溶液中2组分的含量[J].中国药房，2005，16（8）:622.

[4]王 平，肖昌录，袁训贤.布洛芬缓释片的制备及其体外释放度考察[J].中国药房，2011，22（9）:829.

[5]柏学敏，文丽丽，尹传明.紫外分光光度法测定布洛芬片含量[J].黑龙江医药，2007，20（1）:4.

[6]赵 烨，陈 云，李小敏.HPLC法同时测定复方锌布颗粒中马来酸氯苯那敏和布洛芬的含量[J].江苏药学与临床研究，2006，14（5）:307.

[7]欧阳春.反相高效液相色谱法测定布洛芬混悬液中布洛芬含量[J].中国药业，2005，14（2）:41.

[8]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:120-121.

[9]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京:中国医药科技出版社，2010:1201-1202.