和胃安神方对失眠大鼠血浆及下丘脑食欲素 A的影响

黎发根 李绍旦 杨明会 周建平 曹科 刘毅

随着生活、工作节奏的加快以及各种社会压力的增大，失眠发生率逐渐上升，已经成为现代社会的流行病，严重影响人们的生活和工作。失眠发生的机制目前尚不完全清楚，有研究认为orexin A是参与机体睡眠-觉醒调节的重要物质之一[1]。本研究应用失眠大鼠模型，通过观察其血浆及下丘脑食欲素A(orexin A)的变化，来探讨和胃安神方治疗失眠症的可能疗效机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

健康清洁级wistar雄性大鼠30只，体重(200±20)g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供(医学动物合格证SCXK京2012-0001)。将大鼠按随机数字表法分为3组，即正常对照组(正常组)、失眠模型组(模型组)及和胃安神方组(中药组)，每组10只。

1.2 主要试剂与药物

对氯苯丙氨酸(PCPA)购自美国Sigma公司(C6506)；orexin A放射免疫试剂盒购自美国phoenix公司。中药和胃安神方由半夏10 g、薏苡仁15 g、陈皮15 g、茯苓15 g、石菖蒲10 g、合欢皮10 g、炒枣仁15 g、夜交藤15 g组成，所有饮片均经解放军总医院中药房提供并鉴定。将上述诸药按传统煎药法获取汤剂，以恒温水浴锅浓缩成分别含生药1.75 g/ml的药液，玻璃瓶密闭盛装，4 ℃冰箱保存备用。

1.3 动物造模及给药

采用目前公认的PCPA失眠模型。除正常对照组外，其余各组大鼠参照文献[2]并结合预实验结果,按300 mg/kg体质量以10 ml/kg体积腹腔注射PCPA，于每天上午8:00～8:30进行，每天1次，连续2天。于第1次腹腔注射28～30小时后，动物出现昼夜节律消失，白天也活动不停，整体观察与正常对照组有明显不同，表明模型复制成功[3]。于第3天开始每天上午8:00灌胃给药，中药组大鼠给予10 ml/kg体积1.75 g/ml中药水煎液(17.5 g/kg生药)；正常组和模型组给予同体积的生理盐水，每天1次，连续灌胃6天。

1.4 实验指标检测

参考文献[4]方法，于末次给药后24小时，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉各组大鼠，心脏采血3 ml，加入抑肽酶40 μl，3500 r/min低温离心5分钟，分离血浆，于-20 ℃保存待测。采血后立即将大鼠脱颈处死，断头取脑，分离下丘脑，充分匀浆后4000 r/min低温离心10分钟，取上清液于-20 ℃保存待测。用放射免疫法检测orexin A的含量，具体操作严格参照orexin A放射免疫试剂盒说明书进行。

1.5 统计学处理

2 结果

模型组大鼠血浆及下丘脑orexin A含量较正常组显著升高，差异具有统计学意义(P<0.01)；中药组大鼠血浆及下丘脑orexin A含量明显低于模型组，差异具有统计学意义(P<0.01)。中药组与正常组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组大鼠血浆及下丘脑组织orexin A含量比较

注：与正常组比较，aP<0.01；与模型组比较，bP<0.01.

3 讨论

失眠是一种常见的睡眠障碍性疾病，其发生率高，长期的失眠会严重影响人们的身心健康[5-6]。笔者认为当前导致失眠最主要的直接因素就是现代生活方式改变和饮食结构习惯变化，这些变化导致人体脾胃、肠道的消化功能紊乱，意即众多原发性失眠者多存在“胃不和”。针对原发性失眠者的“胃不和”，笔者采用和胃安神方以治之。前期的临床研究证实其对失眠症的治疗效果良好[6-7]，但其疗效机制尚不明确。

Orexin(又名hypocretin)是一种由下丘脑外侧区合成和分泌的具有促进摄食作用的小分子神经多肽[8-9]，食欲素A和食欲素B是它的两个单体。目前研究认为orexin A是参与机体睡眠-觉醒调节的重要物质[1]。Piper等[10]在大鼠的脑室内注射食欲素A，通过记录大鼠的脑电图和肌电图观察大鼠的睡眠和觉醒周期变化，发现大鼠的觉醒时间与剂量相关，证明了食欲素的睡眠调节作用。Terao等[11]发现大鼠随着睡眠剥夺时间的延续，食欲素原mRNA的表达越来越高，认为觉醒状态可能需要高水平的食欲素维持。更有新近研究表明[12]，通过透光基因技术反复刺激自由活动小鼠orexin神经元，可以增加快速眼动或非快速眼动睡眠到觉醒的转换次数，这说明食欲素可能在睡眠-觉醒的调节中起到一种类似“开关”的作用。

本研究采用广泛应用的对氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射诱导的失眠大鼠模型，其结果显示，模型组大鼠血浆及下丘脑中orexin A的含量显著增加，中药组大鼠经和胃安神方治疗后，其血浆及下丘脑中orexin A的含量明显低于模型组(P<0.01)，且大鼠睡眠节律得以恢复。结果提示，对orexin A的调节作用很可能是和胃安神方治疗失眠的内在机制之一。

另有研究发现[13-14]，orexin除了主要分布于中枢神经系统的下丘脑外，还广泛分布于包括胃肠系统的外周组织。orexin在促进食欲的同时，还能通过中枢和外周途径调节胃肠运动和消化液的分泌。本实验对血浆食欲素A的测定也证实了外周食欲素系统的存在。这说明食欲素同时存在于胃肠道和神经中枢，具有调节胃肠功能以及作为神经递质调节睡眠的双重作用，这与和胃安神方具有和胃与安神的功效有着相通之处，由此推测食欲素可能是“胃不和”与“卧不安”两者之间的生物物质基础之一，至于食欲素是如何发挥胃肠功能和睡眠之间的协调作用，还须进一步研究和探索。

参考文献

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