HPLC法测定跳骨片中血竭素的含量

邱晓晖刘华英黄汉伟

HPLC法测定跳骨片中血竭素的含量

邱晓晖1刘华英2黄汉伟2

目的建立HPLC法测定跳骨片中血竭素含量的方法。方法采用反相C18柱，乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（35:45），用磷酸调PH值为3.14为流动相，检测波长：440nm，流速：1.0ml/min。结果血竭素进样量在0.13945～0.41835g范围内，呈良好的线性关系（r=0.9999），平均回收率为99.69%。结论采用HPLC法测定跳骨片中血竭素含量具有灵敏度好，而且准确，简便，合理可行。

HPLC；血本竭素；含量测定

血竭是跳骨片处方中的主要组分，其所含的血竭素具有活血化瘀、祛腐生肌、消炎镇痛、止血敛疮、软坚散结的作用，为处方中的重要活性成分，我们通过查阅有关文献[1-3]，采用流动相的优化法，进行大量的实验，建立了高效液相色谱法测定本品中血竭素含量的方法，并对色谱条件进行方法学研究，可以达到基本分离，灵敏度好，且具准确性。

1 仪器与试药

仪器：岛津高效液相色谱仪。试剂：乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、磷酸二氢钠、磷酸等，其他试剂均为分析纯。对照品：血竭素高氯酸盐为中国药品生物制品检定所提供（供含量测定用），使用前置干燥器中干燥至恒重。样品：跳骨片（批号060801、060802、060803）均为自制。

2 方法与结果

2.1色谱条件色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Chromasil C18250×4.6mm 5u）流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（35:45），用磷酸调PH值为 3.14为流动相；检测波长：440nm，流速：1.0ml/min，柱温：40℃。

2.2阴性干扰试验对照品溶液的制备：精密称取血竭素高氯酸盐对照品20mg置10ml棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液超声2min溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取该液1ml置25ml棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取1.5g，精密称定，置25ml棕色量瓶中加 3%磷酸甲醇溶液振摇 3min溶解并定容，用微孔滤膜（0.45um）滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

阴性溶液的制备：按处方量称取不含血竭的各味药材，照跳骨片制备方法制得阴性样品，称取适量，同供试品方法制备，即得。

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果，在选定的色谱条件下，血竭素高氯酸盐对照品(含血竭素72.62%)主峰保留时间为18.296，样品溶液主峰保留时间为18.286，而阴性溶液色谱图中，与对照品峰保留时间相同的位置，无任何峰出现，试验结果表明阴性不干扰本品中血竭素的含量测定。

2.3线性试验精密称取血竭素高氯酸盐对照品（含血竭素 72.62%）适量，加甲醇制成每 1ml含27.89µg的溶液。在选定的色谱条件下，精密吸取上述对照品溶液 5μl、8μl、10μl、12μl、15μl分别注入液相色谱仪，记录色谱图。测定结果见表1及附图。

表1 血竭素线性试验结果

以血竭素的进样量为自变量，以对应的峰面积（A）为因变量进行线性回归，线性关系如图1所示，线性方程为：y=6E+06X+7718.8，相关系数：R2=0.9999。试验结果表明：血竭素进样量在0.13945g～0.41835g范围内，呈良好的线性关系。

图1 血竭素标准曲线图

2.4稳定性试验取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取 1.5g，精密称定，置 25ml棕色量瓶中加3%磷酸甲醇溶液振摇3min溶解并定容，用微孔滤膜（0.45um）滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。分别于0h、2h、4h、8h、12h精密吸取供试品溶液10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。血竭素峰面积值的RSD为1.72%，说明供试品溶液在12h内稳定。

2.5重复性试验取本品50片，除去糖衣，精密称定，研细，取 1.5g，精密称定，置 25ml棕色量瓶中加3%磷酸甲醇溶液振摇3min溶解并定容，用微孔滤膜（0.45um）滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取血竭素高氯酸盐对照品17.87mg置10ml棕色量瓶中加3%磷酸甲醇溶液超声 2min溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取该液1ml置25ml棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

分别吸取对照品溶液和各供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，测得峰面积值并计算含量，RSD为1.06%，重现性好。

2.6回收率试验采用加样回收法测定。精密称取血竭素高氯酸盐对照品（含血竭素72.62%）16.26mg置10ml棕色量瓶中加3%磷酸甲醇溶液超声2min溶解，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取该液1ml置25ml棕色量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

另精密称取血竭素高氯酸盐对照品（含血竭素72.62%)13.69mg置100ml棕色量瓶中，加适量3%磷酸甲醇溶液超声 2min溶解后，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为标准加样储备液。

取本品50片，除去包衣，研细（由重复性试验可知每克药粉含血竭素的量为 0.5158mg），称取量分别为 1#0.52521g、2#0.52158g、3#0.52062g、4#0.80199g、5#0.71078g、6#0.75803g、7#1.03302g、8#1.12115g、9#1.09013g，分置25ml棕色量瓶中依次对应加入对照储备液4ml（1#-3#）、5ml（4#-6#）、6ml（7#-9#）后，加3%磷酸甲醇溶液振摇3min溶解并定容，用微孔滤膜（0.45um）滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。在选定的色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。平均回收率为99.69%，RSD为1.06%，本品具有较好的回收率。结果见表2。

表2 血竭素回收率测定结果

2.7样品测定根据以上的测定方法测定了3批样品，结果见表3。

表3 样品测定结果

3 讨论

血竭素的HPLC测定法的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（35:45），用磷酸调PH值为3.14为流动相；检测波长为 440nm；柱温：40℃，理论板数按血竭素峰计算应不低于2500。用此色谱条件采用HPLC法测定跳骨片中的血竭素的含量灵敏度好，准确性高。

[1]郭素华,潘馨.跳骨片质量控制方法研究[J].中国药学杂志,2001,1(36).

[2]尤献民,邹桂欣,王树实,等.HPLC法测定胃溃疡胶囊中血竭素的含量[J].中国中医药信息杂志,2003,4(10).

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部[M].北京:化学工业出版社,2005.

1 湖南中医药大学附属第一医院药剂科，湖南长沙 410007

2 成都百事达医药科技有限公司，四川成都 610000