李丹 韩晶
摘 要:目的:采用薄层色谱法和高效液相色谱法对抑亢丸中芍药苷进行质量控制。薄层色谱法对芍药苷进行了定性分析,结果清晰明显,阴性对照无干扰;高效液相色谱法对芍药苷进行了定量分析,结果芍药苷在0.0687~0.6870?g范围内线性关系良好,相关系数r=0.9999,平均回收率(n=6)为99.97%,RSD为1.09%,证明此测定方法专属性强,重现性好,简便,快速。可用于抑亢丸中芍药苷的质量控制。
关键词:抑亢丸 芍药苷 薄层色谱法 高效液相色谱法 质量控制
中图分类号:R927 文献标识码:A 文章编号:1674-098X(2012)12(a)-0-02
抑亢丸由羚羊角、白芍、天竺黄、桑椹、延胡索(醋炙)、青皮(醋炙)、香附、玄参、石决明、黄精、黄药子、天冬、女贞子、地黄等十四味药材组成,具有育阴潜阳,豁痰散结,降逆和中等功效,用于瘿病(甲状腺机能亢进)引起的突眼,多汗心烦,心悸怔忡,口渴,多食,肌体消瘦,四肢震颤等[1]。抑亢丸方中主要成分白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lacti flora Pall.的干燥根[2]。本实验采用薄层色谱法和高效液相色谱法对白芍中芍药苷进行了质量控制,方法易于操作,结果准确,重现性良好。
1 薄层色谱法
1.1 仪器设备与试剂试药
烘箱;硅胶G薄层板;芍药苷对照品(由中国食品药品检定研究院提供)批号:110736-200526;抑亢丸样品由生产企业提供;水为纯化水,其他试剂均为分析纯。
1.2 实验方法与实验结果
取本品水蜜丸15 g,研细;或取小蜜丸15 g或大蜜丸2丸,剪碎,加水10 mL使溶散,加水饱和正丁醇50 mL,加热回流1 h,滤过,滤液用正丁醇饱和的水40 mL洗涤,正丁醇层蒸干,残渣加少量甲醇溶解,拌入少许中性氧化铝,水浴上拌匀干燥,装入一预先填好的中性氧化铝小柱(100~200目,3 g,内径1~1.5 cm)上,用乙酸乙酯-甲醇(1∶1)混合溶液40 mL洗涤,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加乙醇制成每1 mL含1 mg溶液,作为对照品溶液。再取除白芍外的全部样品成分,同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验,吸取上述两种溶液各10 ?1,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。阴性对照无干扰。
2 高效液相色谱法
2.1 仪器设备与试剂试药
日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪;芍药苷对照品(由中国食品药品检定研究院提供)批号:110736-200526;抑亢丸样品由生产企业提供;乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。
2.2 实验方法与实验结果
2.2.1 色谱条件
色谱柱:kromasil C18(4.6×250 mm,5 ?m);流动相:乙腈-水(13:87);流速:0.7 mL/min;柱温:40 ℃;检测波长:230 nm;理论板数按芍药苷峰计算应不低于6000。
2.2.2 溶液制备
2.2.2.1 对照品溶液。精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含60 ?g的溶液,即得。
2.2.2.2 供试品溶液。取本品小蜜丸或重量差异项下的大蜜丸,剪碎,取约3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理30 min,使溶散,取出,放至室温,称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 专属性试验
按照处方制备不含白芍的抑亢丸阴性对照样品,按“2.2.2.2”项下方法制备阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,依法进行测定。结果,阴性样品色谱在与芍药苷峰相应的保留时间附近无干扰峰检出,表明抑亢丸中其他药味及辅料等对本方法测定无干扰。
2.2.4 线性关系考察
精密称取芍药苷对照品适量,加稀乙醇制成每1 mL含68.70 ?g的溶液,分别精密吸取1、2、4、6、8、10 ?l进样测定,以对照品进样量为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,回归方程为y=1522250.28x+127.26(r=0.9999),表明芍药苷在0.0687-0.6870 ?g范围内与峰面积值成良好线性关系。
2.2.5 精密度试验
取同一批样品,依“2.2.2.2”项下方法制成供试品溶液。精密吸取供试品溶液10 ?l,注入液相色谱仪,重复6次,测定其色谱峰面积值,结果样品含量的RSD为0.04%,结果表明本实验所用色谱仪精密性较良好。
2.2.6 稳定性试验
取同一批样品,依法“2.2.2.2”项下方法制成供试品溶液。按“2.2.1”项下色谱条件,分别在0,2,4,8,12、24 h进样,测定峰面积,其芍药苷的RSD为0.20%,结果表明24 h内供试品溶液中芍药苷的含量基本稳定。
2.2.7 重复性试验
取取同一批样品,按“2.2.2.2”项下方法平行制备6份,按“2.2.1”项下色谱条件进行测定,计算其含量,结果芍药苷的平均含量为0.4762 mg/g,RSD为1.54%,结果表明本法具良好的重复性。
2.2.8 回收率试验
精密称取含量已知的供试品(批号:061202)约1.5 g,共6份,分别精密加入对照品溶液(0.01619 mg/mL)50 mL,按“2.2.2.2”项下方法制备供试品溶液,依该法测定,计算其回收率,结果见表1。
如表1所示,测得芍药苷的平均回收率为99.97%,RSD=1.09%。结果表明本法回收率较好,准确度较高。
3 讨论
3.1 测定波长的选择
取芍药苷对照品的稀乙醇溶液,经UV-2550紫外分光光度计在200~300 nm范围内进行扫描,结果芍药苷在231 nm波长处有最大吸收,并参照中国药典2010年版一部白芍项下,选择230 nm作为测定波长。
3.2 柱的选择及柱效的考察
实验中考察了Gracesmart HP C18(4.6×250 mm,5 ?m)色谱柱、VP-ODS C18(4.6×150 mm,5 ?m)色谱柱及kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 ?m)色谱柱,结果kromasil C18的柱子分离度较好,理论塔板数大于10000,所以使用kromasil C18柱进行本次实验,暂定柱效应不低于6000。
3.3 《中国药典》2010年版一部白芍的含量最低限度为1.6%
大蜜丸制造处方中白芍的投料量为18.8 g,制成量为55丸,按100%提取率计,每丸含量应不得少于5.47 mg,本品制法中白芍为粉末入药,考虑到生产工艺的波动,暂时按80%提取率计算,本品大蜜丸每丸含白芍以芍药苷计不得少于4.40 mg;小蜜丸制造处方中白芍的投料量为18.8 g,制成量为2500丸,每丸重约0.15 g,即制成量约为375 g,按100%提取率计,每克含量应不得少于0.80 mg,本品制法中白芍为粉末入药,考虑到生产工艺的波动,暂时按80%提取率计算,本品小蜜丸每克含白芍以芍药苷计不得少于0.64 mg;浓缩水蜜丸制造处方中白芍的投料量为18.8 g,制成量为1500丸,每25丸重5 g,即制成量为300 g,按100%提取率计,每克含量应不得少于1.00 mg,本品制法中白芍为粉末入药,考虑到生产工艺的波动,暂时按70%提取率计算,本品浓缩水蜜丸每克含白芍以芍药苷计不得少于0.70 mg。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第三册
[2] 中国药典2010年版一部.