高效液相色谱法测定清热通淋丸中苦参碱和氧化苦参碱含量

杨献玲，翟宏宇

(吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033)

清热通淋丸是由爵床、苦参、白茅根、硼砂4味中药组成的复方制剂。具有清热、利湿、通淋的作用[1-2]。清热通淋丸现行标准为国家食品药品监督管理局标准YBZ05982009,原标准采用高效液相色谱法测定方中苦参碱的含量，未测氧化苦参碱的含量，因此本研究增加了氧化苦参碱含量的测定，并以苦参碱和氧化苦参碱的总和计算苦参含量品的含测指标更为合理[3-5]。

1 仪器与试药

仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪，Agilent 1200高效液相色谱仪，MILLI-Q纯水处理器，CQX-12型超声波清洗器。苦参碱对照品，购自中国药品生物制品检定所，批号为110805-200306，供含量测定用；氧化苦参碱对照品，购自中国药品生物制品检定所；批号为110780-200506，供含量测定用；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂为分析纯。清热通淋丸为通化博祥药业股份有限公司提供。缺苦参的阴性对照样品为自制。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取苦参碱对照品15 mg、氧化苦参碱对照品8 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取混合对照品溶液5 mL,置25 mL量瓶中，用磷酸盐缓冲液(pH 3.0)稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1 mL，精密加入三氯甲烷50 mL，密塞，称定重量，浸渍过夜，超声处理(功率250 W，频率50 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液25 mL,蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解后,加磷酸盐缓冲液(pH 3.0)稀释并转移至10 mL量瓶中，加磷酸盐缓冲液(pH 3.0)至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 标准曲线 精密称取苦参碱对照品适量,加流动相制成每1 mL含0.314 4 mg的溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9、11 μL测定，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果表明苦参碱进样量在0.314 4～3.458 μg范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。

以进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=110 2.1X+15.423，相关系数为r=1.000 0。

精密称取氧化苦参碱对照品适量，加流动相制成每1 mL含0.007 4 mg的溶液,分别精密吸取1、3、5、7、9、11 μL测定，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，结果表明苦参碱进样量在0.007 4～0.081 9 μg范围内，呈线性关系，符合外标法定量测定的要求。

以进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=110 6.6X+5.040 2，相关系数为r=0.999 2。

2.4 精密度试验 对同一分供试品溶液(批号：110401)，按正文拟定的色谱条件，连续测定6次，结果其苦参碱RSD为0.13%，氧化苦参碱RSD为2.76%，结果表明仪器的精密度良好。

2.5 稳定性试验 同一供试品溶液照正文方法,在0、2、4、6、8、10、12 h测定苦参碱和氧化苦参碱峰面积值，苦参碱峰面积RSD为0.58%，氧化苦参碱峰面积RSD为6.47%，结果表明：供试品溶液在12 h内，稳定性良好。

2.6 重复性试验 对清热通淋丸(批号:110401)样品，按正文拟订的方法独立测定6分，结果氧化苦参碱和苦参碱之和的平均含量为5.308 mg/g(RSD=%,n=6)，表明本法的重复性良好。

2.7 加样回收率试验 结果苦参碱平均回收率为99.01%，RSD=0.46%(n=6)符合定量分析的要求。氧化苦参碱平均回收率为97.91%，RSD=0.40%(n=6)符合定量分析的要求。

3 样品测定

取4批样品,按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液，按上述色谱条件操作，结果阴性对照无干扰。4批样品测定结果见表1。

表1 4批样品测定结果

4 讨论

本研究考察了样品以碱性三氯甲烷(三氯甲烷+浓氨试液)溶解后超声，回流,及溶解后静置过夜再超声，回流。结构表明静置过夜后的结果明显高于直接超声，回流，而且过夜后的超声，回流样品含量无明显差异，鉴于超声的方法更为简便，故选择样品以碱性三氯甲烷(三氯甲烷+浓氨试液)溶解，静置过夜后超声作为供试溶液的制备方法。

[1]刘莹,孟庆妍,翟宏宇.HPLC法同时测定复方苦参肠炎康片中苦参碱和氧化苦参碱的含量[J].长春中医药大学学报,2011,27(5):842-843.

[2]宋小莉.苦参主要有效成分作用于肝脏的药效学实验研究[J].吉林中医药,2010,30(6):526-527.

[3]徐国红.苦参治疗湿疹的药理作用研究[J].长春中医药大学学报,2010,26(5):781.

[4]张春丽,孙国英,黄超,等.青柏洁身洗液中苦参碱的含量测定方法比较研究[J].吉林中医药,2009,29(7):619-620.

[5]王琳,张羽,王晓明,等.舒心胶囊的生产工艺研究[J].长春中医药大学学报,2008,24(4):383.