陕产中药铁筷子质量标准研究

王月茹 赵 涛 卢 露 谢 伟 王西芳 陕西国际商贸学院医药学院（咸阳 712046）

铁筷子，别名黑毛七、见春花、九百棒，经考诸历代本草文献认为中药铁筷子主要有两种：毛茛科植物铁筷子和腊梅科植物腊梅根，陕西生长的中药铁筷子为毛茛科植物铁筷子的干燥根及根茎，其主要功效有清热解毒，活血散瘀，消肿止痛。主治：膀胱炎、尿道炎、疮疖肿毒、跌打损伤、劳伤。为了能有效控制陕产中药铁筷子的质量，本文中采用定性和定量实验法对其进行了质量标准的研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪，Empower色谱工作站，2996二极管阵列检测器；SB3200DT超声波清洗机；梅特勒电子天平。

1.2 试药 葡萄糖对照品、甘露糖对照品、薯蓣皂苷元对照品（中国药品生物制品检定所提供），甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂均为分析纯。铁筷子药材，分别购于陕西太白、周至、汉中等草药店，部分药材采自陕西秦岭山区。

2 方法与结果

2.1 薄层层析定性鉴别［1～3］

2.1.1 铁筷子多糖TLC鉴别对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖、甘露糖对照品各5mg，溶入少量50%乙醇中，移入10mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，制成浓度为0.5mg／mL的对照品溶液。

铁筷子多糖供试品溶液的制备：称取铁筷子药粉2g，于100mL锥形瓶中，加入95%乙醇50mL，连接回流装置，加热回流2h，取出，放冷至室温，滤过，弃去滤液，残渣和滤纸同时移至锥形瓶中，加入50mL蒸馏水，加热回流2h，取出，放冷至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加50%乙醇1mL溶解，即得。

薄层条件：将硅胶GF254湿法制板，110℃活化30min后使用。供试品点样量为10μl，对照品点样量为5μl，以乙酸乙酯－乙酸－甲醇－水（13∶3∶5∶2）的混合溶液为展开剂，将硅胶G板放置于层析缸中饱和10min后展开，当溶剂前沿线约至12cm左右时，取出，晾干，先用苯胺－邻苯二甲酸显色，105℃干燥数分钟，使其斑点清晰，显色稳定；再用α－萘酚试液显色，于105℃加热至斑点清晰，于紫外光灯（365nm）下检视。结果：在与对照品相应的位置上，显相同颜色的浅黄色和蓝紫色斑点。

2.1.2 铁筷子皂苷元TLC鉴别

薯蓣皂苷元对照品溶液的制备：精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

供试品样液的制备：称取铁筷子药材粉末约4g于100mL锥形瓶中，加（30～60℃）石油醚50mL，超声处理30min，滤过，弃去滤液，残渣和滤纸同时移至锥形瓶中，加入50mL乙醇，加热回流2h，取出，放冷至室温，滤过，滤液蒸干，残渣加3mol／L的盐酸20mL进行酸水解（温度为70℃），水解液依次用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿层，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，摇匀，即得。

薄层条件：将硅胶GF254湿法制板，110℃活化30min后使用。供试品点样量为15μl，对照品点样量为10μl，以氯仿－甲醇（10∶1）混合溶液为展开剂，将硅胶G板置于层析缸中饱和10min后展开，当溶剂前沿线约至12cm左右时，取出，晾干，用10%硫酸乙醇液显色，于105℃加热至斑点清晰，于自然灯光和紫外光灯（365nm）下检视。结果：在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 含量测定［4］

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验：用Waters 2695高效液相色谱仪，2996PDA检测器，Empower色谱工作站进行3D扫描，以确定最优的色谱条件为：色谱柱 Akasil－C18ODS柱（5μm，250mm×4.6mm）；流速：1.0mL／min；柱温：25℃；检测波长：203nm；流动相：（乙腈∶水＝85∶15）。

2.2.2 对照品溶液的制备：精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.5mg溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备：精密称取铁筷子药材粉末适量，加10倍量75%乙醇，浸泡0.5h后，超声处理30min，滤过，收集滤液，水浴蒸干，用3mol／L的盐酸20mL进行酸水解（温度为70℃），水解液分别用30mL、20mL、20mL氯仿萃取三次，合并氯仿层，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容，摇匀，即得。

2.2.4 标准曲线的绘制：精密称取薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇制成每1mL含薯蓣皂苷元0.05mg的高浓度标品溶液；再将高标液取1mL稀释5倍，制成每1mL含薯蓣皂苷元0.01mg的低浓度标品溶液，分别取高标液（5，10，20μL）和低标液（5，10，20μL）注入高效液相色谱仪中，在上述的色谱条件下进行分析，以峰面积A为纵坐标，薯蓣皂苷元含量C（μg）为横坐标绘制标准曲线。计算得回归方程为：A＝2010115C－38918，相关系数r＝0.9999，结果表明，薯蓣皂苷元在0.051～1.02μg范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验：精密称取铁筷子药粉适量，按供试品溶液的方法制备样品溶液，并依据上述色谱条件，吸取该样品溶液10μl，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD为1.89%，表明本方法精密度良好。

2.2.6 重复性试验：取本品适量，共6份，照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，分别精密取10μl进样，在上述色谱条件下测得样品，RSD为3.96%，表明此方法重复性良好。

2.2.7 加样回收率试验：采取加样回收法，取一定量已知含量的样品6份，分别精密加入薯蓣皂苷元对照品适量，照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定含量，计算回收率为99.32%，RSD为3.15%。结果表明，本方法回收率良好。

2.2.8 稳定性试验：精密取本品适量，照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，间隔4h进样，记录峰面积，共测定4次，RSD为2.33%。结果表明，供试品在12h内稳定性良好。

2.2.9 样品的含量测定：将样1，样2，样3，样4，样5，样6，照“2.2.3”项下的方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定，其中含铁筷子皂苷的最高含量为0.0036%，最低为0.0028%，平均含量为0.0032%，考虑到药材的来源差异，以及实验误差、储藏等因素，故暂定陕产铁筷子药材中含甾体皂苷不得少于0.003%。

3 讨 论 目前国内外对铁筷子药材的化学成分研究较多，但成分含量测定多停留在多糖上，且均采用紫外－可见分光光度法测定，该方法存在准确性差，误差大等缺陷，较难以控制该药材的质量。曾在实验中尝试用高效液相色谱法，采用蒸发光检测器进行多糖的含量测定，但实验过程中发现此方法稳定性差，分离度低等缺陷。然而，铁筷子甾体皂苷又是另一热点活性成分，具有较强的生理活性，目前国内尚无铁筷子皂苷类成分的标准对照品，故实验中选择了结构与铁筷子皂苷类成分相似的薯蓣皂苷元为对照品，虽然测量结果会稍有出入，但由于二者的基本骨架结构相似，故在暂无标准品的情况下，仍不失为一种较佳的选择。

在酸水解铁筷子皂苷成苷元的实验中，发现随着水解温度的升高，样液的颜色会显著加深；样品液在存放的过程中，溶液颜色也会随时间发生很大的变化，然而皂苷元的含量并未随之变化，这一点在今后的实验中应再做进一步研究。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2010.

［2］王冬梅.安宫消瘤胶囊质量标准的研究［J］.中药材，2008；31（12）：1911.

［3］杨 健，苗 芳，赵 伟，等.正交设计优选铁筷子甾体［J］.中药材，1991，14（3）：20－21.

［4］曾 里，夏之宁.超声波和微波对中药提取的促进和影响［J］.化学研究与应用，2002，14（3）：245－249.