淋巴结组织切片制作68例探讨

陕西省榆林市第二医院病理科（榆林719000） 李 萍

淋巴结皮质和髓质的细胞成分多，质脆易损，加之外周包有一层比较致密的结缔组织被膜。在常规制片中难度较大，如切片过厚，染色对比度差，组织易碎，各种试剂难以渗透，故而造成切片质量较差，给诊断带来困难甚至误诊。现将我们制作的68例切片报告如下。

材料和方法

1 材料选择 收集2007年3月至2011年12月我院临床手术切除的淋巴结组织68例，其中，锁骨上及颈部淋巴结活检标本12例，腹股沟淋巴结活检标本13例，腹腔肠系膜淋巴结活检标本21例，胃肠手术切除标本的区域淋巴结以及胆囊颈旁淋巴结各11例。

2 方 法 本制作步骤依次为：取材－固定－脱水－透明－浸蜡－包埋－切片－染色－封片。

2．1 取材：淋巴结的取材按常规进行，取材要求大小适宜，厚薄均匀，厚度最好在0．2cm左右，避免反复切修。在不破坏包膜的情况下，先将组织切开，切面向下固定。直径大于2cm的淋巴结从中间剖开，取其一半或中间最大径一片制作常规切片。尽量剥离干净淋巴结外膜周围的脂肪组织。

2．2 固定：临床送检的淋巴结组织及时浸入10%缓冲福尔马林溶液中固定6～12h。

2．3 脱水：淋巴结组织应从低浓度的70%乙醇脱水1h开始，逐步向80%乙醇脱水1h，95%乙醇1h，直至100%无水乙醇脱水1h。

2．4 透明：通常选用二甲苯做透明剂，透明过程应均在振荡器中进行，透明时间一般在20～30min之间，若在此时间内还不能透明，则需稍稍加温处理。

2．5 浸蜡：浸蜡石蜡熔点58℃～60℃之间，加以48℃ 熔点蜡和适量硬脂酸，浸蜡时间在4h左右。

2．6 包埋：石蜡温度60～62℃ 。

2．7 切片、染色。切片时使用坚硬锋利的一次性切片刀，厚度2～3μm，捞片水温控制在43℃左右，将切片置于70℃温箱中烤10min左右后，浸入松节脱蜡、梯度酒精处理、苏木素染色3min，经流水洗后，用盐酸酒精分化1min，再次经流水冲洗后，放入40℃温水中返蓝10min，最后采用伊红复染片刻，梯度酒精脱水，用二甲苯透明，中性树胶封片。

结 果

本研究所制68例淋巴结组织切片均为3～4μm的薄片，并连续成带，包膜完整，无破碎，切片染色均匀，胞核呈蓝紫色，胞浆呈鲜艳的红色，胞核着色适中，组织细胞核仁、核膜结构清晰，色彩对比度强，淋巴结皮质、髓质无挤压，组织无刀痕、破碎、重叠、过染。

讨 论

高质量的淋巴结组织切片应该是整个淋巴结的组织结构中，基本形态清晰可见，各层次分明，细胞核染成蓝色，细胞浆染成红色，且核浆对比染色鲜明。但在实际的工作中不少淋巴结的组织切片染色不能令人满意，有的切片偏厚，有的细胞核染色不良，模糊不清，部分切片出现“灰染”或“发白”现象，从而造成镜下诊断困难。淋巴结组织结构致密、细胞丰富，组织周围又有一层较致密的结缔组织包膜，因而在组织切片制作时，在脱水、透明、浸蜡乃至切片染色等各个环节方面都要做到精准细致。

1 取材、固定：取材时，把新鲜淋巴结组织周围的脂肪组织剔除，力争取得完整淋巴结组织，并用锋利的刀片将淋巴结组织沿其长轴剖开，取0．5～2．0cm厚的组织。由于淋巴结本身细胞成分非常丰富，组织质脆易损，刀钝容易使淋巴结内部结构受挤压。因此，取材刀必须锋利，以避免人为的机械挤压，导致显微镜下细胞结构的变化［1］。

淋巴结组织外包一层致密的结缔组织被膜，且细胞丰富致密、间质成分少，使得固定剂在短时间内很难浸透到组织内，因此合适取材剖开，取其一半或中间最大径一片后，立即投入10%福尔马林固定。若取材时组织标本已发生自溶而没有及时固定，会使组织的结构模糊不清，出现“灰染”和“发白”。若标本在取材之前已干枯，标本经切片染色后，在干枯区域也会造成成片的“灰染”或“发白”［2］。一般采用福尔马林固定液固定6～12h，如果固定液浓度过高或固定时间过长，就会使组织变硬，减弱了脱水剂对组织的渗透能力；如果浓度过低或时间过长，组织太软不易切片［3］。

2 脱水、透明、浸蜡、包埋：组织脱水就是将组织内存在的水分除去，由于淋巴结组织完整的被膜阻碍脱水剂的渗入，所以在选择脱水剂时，应该首选脱水能力较强的乙醇溶液，但尽量不用丙酮之类的强脱水剂，以减轻组织细胞的收缩程度［4］。淋巴结组织脱水应从低浓度的70%酒精直至100%酒精进行，每步一般在l～5h。如果脱水时间太短，就会使组织内的水分不易被置换出来，影响透明和浸蜡；如果脱水时间过长，会使组织变硬、变脆，减弱了透明剂对它的渗透能力。

透明剂通常用二甲苯，因为它透明力强，能使光线穿透组织，它既能与脱水剂相融，又能与石蜡混合。透明时间一般在20～30min，若在此时间内还不能透明，则需稍稍加温处理。

浸蜡是为了除去组织中的二甲苯，并能使石蜡浸透到组织内部，使组织有一定的硬度，有利于切片，浸蜡石蜡的熔点在58～60℃之间，加以48℃ 熔点蜡和适量硬脂酸，浸蜡时间在4h左右，若浸蜡时间过短，石蜡分子在组织内没有充分饱和，使组织与石蜡结构不严，给切片带来困难，若时间太长，则使组织变硬，同样不利于切片。蜡的熔点过高会导致组织内出现裂缝，或导致组织周围变硬而中心浸蜡效果不佳。

将浸好蜡的组织立即包埋于60～62℃的石蜡中。包埋时组织内外的蜡要保持溶解状态。镊子的温度要稍高于蜡温。夹取组织块将切面向下，放于包埋框内，并用镊子轻轻压平。

3 切片、染色：了能更好的显示淋巴结组织内部结构，切片时最好使用坚硬锋利的一次性切片刀、无“豁牙”，及时清除切片刀上的蜡屑，保持刀刃的清洁。进刀力度要均匀，以求切片的薄而完整，切片厚度在2～3μm之间，切片过厚，染片中容易掉片。也要准确掌握烤片的温度，过低容易掉片，过高影响染色。一般以70℃温箱30min。组织染色时要缩短苏木素染核和伊红染浆的时间，相应延长盐酸酒精分化和温水返蓝的时间，这样制出的淋巴结切片染色质才显示较好，胞浆和胞核对比分明，组织结构清晰。

［1］ 郭海渊．提高淋巴结组织切片质量的体会［J］．柳州医学，2011，24（3）：161－162．

［2］ 蔡琼珍．提高淋巴结组织切片质量的体会［J］．广东医学院学报，2005，23（6）：695－696．

［3］ 王 珏，张 健，朱礼国．影响淋巴结组织切片质量的处理方法［J］．郧阳医学院学报，2007，26（6）：122．

［4］ 吴 瑶，吴 鹏，潘晓蔚．等．高质量组织切片的制作要点与体会［J］．沈阳医学院学报，2004，6（3）：164－l65．