鼻咽癌血清或血浆标志物研究进展

周 丹综述，何进才审校

(广州中医药大学深圳附属医院 深圳市中医院检验科，广东 深圳 518033)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)是发病率居首位的头颈部恶性肿瘤，具有高度的侵袭性和转移性，好发于中国南部，特别是广东为世界发病率最高的地区。大多数文献研究认为其发病与遗传易感性、EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)慢性感染及环境暴露等相关，国际癌症研究中心1999年对致癌因子的分类标准中，EB病毒已经被明确列为人类致癌(尤其是鼻咽癌)因子之一[1]。目前最新研究还显示miRNA与鼻咽癌亦存在紧密关联。由于鼻咽部解剖位置隐蔽，鼻咽癌临床表现复杂多变，早期症状不典型，极易漏诊。因此，寻找高度敏感而特异的血清或血浆标志物，对于提高鼻咽癌的诊治水平具有重要临床意义。本文就近年来鼻咽癌血清或血浆标志物应用研究进展做一综述。

1 与鼻咽癌相关的基因及其表达产物

鼻咽癌是一种多基因遗传性疾病，其发生可能涉及多个细胞分裂、分化和凋亡相关的转导通路的中断，是癌基因、抑癌基因和调控基因等综合作用的过程，同时还与遗传和环境因素相关。研究已经证实鼻咽癌的发生与多个基因的表达改变有关，如 c-myc、MDM2、p53、Ha-ras在鼻咽癌患者鼻咽部组织中高表达[2]。国外有文献报道，c-myc和bcl-2蛋白可作为反映鼻咽癌放疗效果和判断预后的标志物[3]。崔晓波等[4]在鼻咽癌相关肿瘤抗原基因筛选及鉴定研究中提到，通过筛选、鉴定所获得的15个阳性克隆中，包括MAGE基因、CREM基因、β-2微球蛋白、核糖体蛋白等已知基因或EST，这些基因的表达及其表达产物与肿瘤的发生、发展有着密切的关系，同时特别指出鼻咽癌患者中NPC-14、NPC-18表达抗体阳性率较高，表明这些基因表达产物具有较高的肿瘤特异性，有可能作为诊断鼻咽癌的血清分子标志物。国内有资料列举了可能与鼻咽癌相关的癌基因(TX、NAG23/FBXO30、NAG18、c-erbB-2、met、bcl-2、Her2) 和抑癌基因 (NP9、ING1、FHIT、UBAP1、NGX6、NAG7、P35、P16、Rb)[5]，这些基因及其表达产物均可能成为鼻咽癌标志物，有待我们进一步研究。

2 与EB病毒相关的鼻咽癌标志物

自从1966年Old等首次用免疫扩散试验证明EB病毒和鼻咽癌的血清学有关以来，国内外对EB病毒作了大量研究。EB病毒及其基因表达的相关抗原和抗体以及重组的EB病毒抗原成为研究鼻咽癌病因和相关血清标志物的重要研究方向。

2.1 针对EB病毒抗原的特异性抗体检测

EB病毒基因表达的蛋白比较复杂，在潜伏期病毒不进行复制，细胞主要合成核心抗原(EB virus associated nuclear antigen,EBNA)和潜伏膜蛋白(latent membrane protein，LMP)，在裂解期病毒基因完全表达，细胞主要合成早期膜抗原、早期细胞内抗原(early intracellular antigen，EA)，衣壳抗原(EB virus capsid antigen，VCA)。在临床上和前瞻性流行病学调查中，用血清学方法检测EB病毒特异性抗体，是早期发现鼻咽癌病人的重要手段。

2.1.1 临床常用的EB病毒血清抗体

目前已广泛用于临床的有血清VCA-IgA、VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgA、EA-IgG、EBNA-I-gA、EBNA-IgG等抗体的检测。周鹰[6]等在血清EB病毒抗体检测对鼻咽癌的临床诊断价值研究中报道，3562例就诊患者中，确证鼻咽癌患者(试验组)145例，检测VCA-IgA阳性率达91.0%，3507例非鼻咽癌患者 (对照组)中VCA-IgA检测阳性率为18.9%，说明VCA-IgA检测具有较高灵敏度，但仍有一部分鼻咽癌患者表现为阴性，如在分化好的鳞状细胞癌患者中VCA-IgA并不表现为阳性，而在部分VCA-IgA阳性的患者并不表现为鼻咽癌，可见单独一项指标的检测不宜作为鼻咽癌的诊断指标。EA-IgA，EA-IgG抗体的灵敏度低于VCAIgA，但特异度高于VCA-IgA，三项指标的联合测定能够有效地降低漏诊率和误诊率，对于其中任意两项阳性的患者成为高危人群，医师应高度重视。

2.1.2 抗EB病毒特异性胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(TK)抗体

TK是一种催化胸苷磷酸生成胸苷酸的酶，在DNA的合成调控中起重要作用。Connolly等[7]用ELISA法检测人血清中针对EB病毒编码TK的IgA抗体，证实此抗体是一个良好的鼻咽癌标志物，与VCA-IgA和EA-IgA相比，具有更高的检测灵敏度和相似或更高的特异性。

2.1.3 抗EB病毒编码的Z蛋白(Zebra)抗体和Rta蛋白抗体

Zebra蛋白是调节EB病毒从潜伏状态进入复制状态的关键蛋白质，Rta蛋白是EB病毒进入裂解复制状态必需的激活元件，研究表明二者在鼻咽癌发生发展中起重要作用。Dardari等[8]研究报道联合检测 Zebra–IgG、VCA-IgA、EA-IgA 等可早期诊断鼻咽癌，还发现大部分EA-IgA阴性者Zebra–IgG滴度很高，尤其是年轻患者，进而推测Zebra–IgG可作为年轻鼻咽癌患者的生物标记物。汤敏中等[9]在鼻咽癌高发区采用ELISA法对鼻咽癌新发病例进行血清中Zebra–IgG抗体检测，研究结果显示，鼻咽癌组(试验组)Zebra–IgG抗体检出率达92.7%，VCA-IgA抗体阳性及 EB病毒VCA-IgA抗体阴性两组非癌对照组中，Zebra–IgG阳性率分别为14.8%和2.0%，证实重组的Zebra–IgG抗体有良好的特异性和灵敏度，作为鼻咽癌血清学诊断指标有良好的应用前景。任军等[10]在以Rtac2/3为抗原用于鼻咽癌病人检测的初步研究中证实，抗Rta-IgG可以作为诊断鼻咽癌的标志物，其与Zebra抗体检测联合使用，可以进一步提高鼻咽癌筛选和诊断的特异性和灵敏度。

2.2 EB病毒DNA

近年来大量研究证实，EB病毒DNA是一种良好的鼻咽癌标志物，可广泛用于鼻咽癌早期诊断、临床分期、疗效监测、预后判断等各个方面。鼻咽癌患者血液循环中的EB病毒DNA是一种游离的DNA片断，并不是完整的病毒颗粒。Chan和Lo通过定量分析研究后发现约80%的这种DNA片断长度在180bp以内，通过检测血浆DNA水平来进行诊断鼻咽癌以及观察疗效明显优于外周血细胞中EB病毒DNA[11]。买世娟等[12]以BamH1W片段为模板进行检测，结果在鼻咽癌患者的血浆或血清中EB病毒DNA检出率为84.85%，明显高于健康人(10.34%)。血浆或血清EB病毒DNA检测方法的敏感度高于VCA-IgA(1:40)检测，特异性相同。血浆或血清EB病毒DNA和VCA-IgA(1:40)双阳性的正确率、阳性试验预测值和优势比单独血浆或血清EB病毒DNA或单独检测VCA-IgA高。曹素梅等[13]在血浆EB病毒游离DNA检测对检测鼻咽癌患者预后的意义的研究中证实，不同预后患者的血浆EBV-DNA含量中位数有显著性差异，预后越差者其EBA-DNA水平越高，而VCA-IgA、EAIgA的水平却未见有明显变化。国外也有报道血浆EBV-DNA诊断鼻咽癌的灵敏度和特异性分别为96%和93%，并可用于鼻咽癌分期、预测、复发和转移等检测。Leung[14]在163例鼻咽癌患者和178例正常人对照组中通过联合检测EB病毒DNA和VCA-IgA两种鼻咽癌血清标志物得出结论，单独检测EB病毒DNA和VCA-IgA的敏感性分别为95%和81%，而二者联合检测后敏感性达99%，并且在36例VCA-IgA检测阳性的正常人中，通过EB病毒DNA检测还鉴定出其中27例VCA-IgA为假阳性，由此可知，两种标志物联合检测大大提高了鼻咽癌筛查的准确性。

3 与鼻咽癌相关的微小RNA(micro RNA)

微小RNA(micro RNA)是一种内源性非编码小RNA，调节细胞的分化、增殖和凋亡，影响疾病的发生发展。国内外已有多项研究表明，miRNA在患者血液和尿液等体液中有表达，与肿瘤等疾病有关，可能扮演着分子标志物的角色[15]。目前观点认为循环miRNA可能是来自于凋亡和坏死的细胞，细胞的主动释放，或者循环细胞的裂解。国内外大量实验研究表明，血清中miRNA比较稳定，血清中miRNA不但可以抵抗酶的消化，而且耐酸耐碱，更不受温度变化及留置时间的影响，比一般的蛋白更适宜作为肿瘤标志物，对肿瘤患者诊断具有较好的敏感性及特异性，加上取材的相对无创性，显示出了其作为肿瘤标志物的优势[16-17]。

罗鹏辉等[18]研究报道miR29c在鼻咽癌患者血清中低表达，可能与鼻咽癌的发生、发展和侵袭转移有关，在研究鼻咽癌的早期诊断、预后判断以及基因治疗方面可能具有重要价值。多项研究表明miR29c在鼻咽癌细胞中低表达，抑制VEGF、细胞外基质蛋白等表达，阻止鼻咽癌发生、发展和侵袭转移[19-21]。因此在鼻咽癌血浆或血清标志物的研究中，寻找和验证鼻咽癌特异性miRNA是我们努力的方向。此外，与肿瘤发生相关的一些糖类物质、糖蛋白、氨基酸及其代谢产物、细胞因子、细胞分化抗原等也被运用于鼻咽癌的辅助诊断。如血清唾液酸(SA)，有研究报道EBVCA-IgA联合SA检测，可明显提高鼻咽癌患者的阳性检出率，也可以作为鼻咽癌病情变化的动态监测指标[22-23]。又如骨桥蛋白(OPN)，其与鼻咽癌晚期转移密切相关，有望作为一种检测鼻咽癌发病和转移的标志物[24]。再如肿瘤相关物质群 (TSGF)、细胞角蛋白19的片段(Cyfra21-1)，可用于广谱肿瘤的筛查，但是这两项指标联合检测可明显提高鼻咽癌阳性检出率，也可用于评估鼻咽癌的预后和监测转移[25-27]。也有资料显示 CD10、CD80、CD86、CD138 等 CD 分子的表达与鼻咽癌的预后密切相关，有可能成为评价其预后和疗效的标志物[28-30]。

随着新方法、新技术的应用，不断地有新的鼻咽癌标志物被发现和运用，但是对于在不同临床分级和分期鼻咽癌如何选择合适的标志物还待我们去研究和总结，同时我们也可以看到单一的标志物检测存在不同程度的缺陷，选择几种合适的鼻咽癌标志物进行联合检测对于提高鼻咽癌的诊治水平十分必要。寻找更加敏感而特异的血清或血浆标志物，如miRNA可能也将是我们今后努力的方向。

[1]陈天游,范行良.EB病毒诊断学意义及其方法学进展[J].微生物学免疫学进展,2009,37(3):50-53.

[2]张宝新,吴 平.鼻咽癌标志物及其检测方法应用的研究进展.[J].广东医学院学报,2008,26(1):58-62.

[3]Yu Y,Dong W,Li X,et al.Significance of c-Myc and Bcl-2 protein expression in nasopharyngeal carcinoma[J].Arch Otolaryngol Head Neck Surg,2003,129(12):1322-1326.

[4]崔晓波,谢 可,梁传余，等.鼻咽癌相关肿瘤抗原基因的筛选及鉴定[J].四川大学学报(医学版),2005,36(6):800-803.

[5]黄文君.鼻咽癌相关候选基因的研究[J].实用癌症杂志,2005,20(2):219-221.

[6]周 鹰,朱 洪.血清EB病毒抗体检测对鼻咽癌的临床诊断价值[J].第四军医大学学报,2009,30(12):1102.

[7]Conolly Y,Littler E,Sun N,et al.Antibodies to Epstein-Barr virus thymidine kinase:a characteristic marker for the serological detection of nasopharyngeal carcinoma[J].Int JCancer,2001,91(5):692-697.

[8]Dardari R,HindererW,Lang D,et al.Antibody response to recombinant Epstein-Barr virus antigens in nasopharyngeal carcinoma patients:complementary test of ZEBRA protein and early antigens p54 and p138[J].JClin Microbiol,2001,39(9):3164-3170.

[9]汤敏中,郑裕明,蔡永林,等.ZEBRA/IgG抗体检测在鼻咽癌血清学诊断中的应用[J].肿瘤防治研究,2007,34(5):394.

[10]任 军,张晓梅,张晓光,等.以Rtac2/3为抗原用于鼻咽癌病人检测的初步研究 [J].中华微生物学和免疫学杂志,2006,26(11):1057-1059.

[11]Chan KC,Lo YM.Clinical applications of plasma Epstein-Barr virus DNA analysis and protocols for the quantitative analysis of the size of circulating Epstein-Barr virus DNA[J].Methods Mol Biol,2006,336:111-121.

[12]Mai SJ,Zong YS,ZhangM,et al.Detection of Epstein2Barr virus DNA in plasma/serum:a useful serological indicator for diagnosis of nasopharyngeal carcinoma [J].Chinese Medical Journal 2002,115(12):1895-1897.

[13]曹素梅,闵华庆,高劲松,等.血浆EB病毒游离DNA检测对检测鼻咽癌患者预后的意义[J].癌症,2003,22(3):302-306.

[14]Leung SF,Tam JS,Chan AT,et al.Improved accuracy of detection of nasopharyngeal carcinoma by application of circulating Epstein-Barr virus DNA and anti-Epstein-Barr viral capsid antigen IgA antibody[J].Clin Chem,2004,50(2):339-345.

[15]Mitchell PS,Parkin RK,Kroh EM,et al.Circulating micro RNAs as stable blood-based markers for cancer detection[J].Proc Natl Acad Sci USA,2008,105(30):10513-10518．

[16]Chen X,Ba Y,Ma L,et al.Characterization of miRNAs in serum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases[J].Cell Res,2008,18(10):997-1006.

[17]Gilad S,Meiri E,Yogev Y,et al.Serum MicroRNAs Are Promising Novel Biomarkers[J].PLoSONE,2008(9):e3148.

[18]罗鹏辉,覃羽桃.miR29c在鼻咽癌患者血清中的表达及临床意义[J].广东医学,2011,32(2):205-207.

[19]SENGUPTA S,DEN BOON JA,CHEN IH,et al.M icroRNA29c is down-regulated in nasopharyngeal carcinomas,up-regulating mRNAs encoding extra cellular matrix proteins[J].ProcNatl Acad Sci U SA,2008,105(15):5874-5878.

[20]CHEN H C,CHEN G H,CHEN Y H,et al.MicroRNA deregulation and pathway alterations in nasoph aryngeal carcinoma[J].Br J Cancer,2009,100(6):1002-1011.

[21]王旭丹,杨惠玲,郭禹标,等.不同辐射抗拒鼻咽癌细胞微小RNA差异表达的研究[J].中国病理生理杂志,2007,23(6):1045-1048.

[22]蒋丽娜,戴利成,何建芳,等.联合检测血清唾液酸和EBVCA-IgA对鼻咽癌诊断及疗效监测的意义[J].中华实验和临床病毒学杂志,2006,20(2):30-32.

[23]张惠琴,周章保,范 陆,等.鼻咽癌患者血清唾液酸动态观察[J].中华耳鼻喉头颈外科杂志,2005,40(6):411-414.

[24]Wong TS,Kwong DL,Sham J,et al.Elevation of plasma osteopontin level in patients with undifferentiated nasopharyn-geal carcinoma[J].Eur JSOncol,2005,31(5):555-558.

[25]邱素芳,陈传本,陈 燕,等.恶性肿瘤特异生长因子(TSGF)对鼻咽癌患者的临床意义[J].癌症进展杂志,2006,4(2):176-178.

[26]Huang L,Hang W,Chen Y.Diagnostic value of combined detection of CYFRA21-1 and TSGF in nasopharyngeal carcinoma[J].Lin Chuang Er Bi Yan Hou Ke Za Zhi,2005,19(5):201-202.

[27]Jmal A,Boussen H,Abdennebi M,et al.Contribution of serum Cyfra 21-1 in nasopharyngeal carcinoma in Tunisia[J].Bull Cancer,2004,91(4):369-372.

[28]Braham H,Trimeche M,Ziadi S,et al.CD10 expression by fusiform stromal cells in nasopharyngeal carcinoma correlates with tumor progression[J].Virchows Arch,2006,449(2):220-224.

[29]Chang CS,Chang JH,Hsu NC,et al.Expression of CD80 and CD86 costimulatory molecules are potential markers for better survival in nasopharyngeal carcinoma[J].BMCCancer,2007,7:88.

[30]Chen C L,Ou D L.Expression of syndecan21(CD138)in nasopharyngeal carcinoma is correlated with advanced stage and poor prognosis[J].Hum Pathol,2006,37(10):1279-1285.