日本血吸虫角化不良蛋白（DKC1）基因克隆与表达＊

马 盼 明珍平 刘 镕 赵琴平 钟沁萍 蒋明森 董惠芬

武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室，武汉430071；＃通讯作者

目的：本课题组前期的研究结果显示，在宿主因子作用下，日本血吸虫母胞蚴角化不良蛋白（DKC1）基因呈现差异表达。本研究克隆、表达DKC1基因，为后期研究日本血吸虫DKC1基因的功能奠定基础。方法：通过搜寻DKC1基因的完整开放阅读框（ORF），设计并合成引物，利用PCR技术扩增目的基因片段，双酶切，并将其与PET-28a（+）载体连接，转化入DH5a大肠杆菌，经PCR扩增并测序鉴定后，抽提重组质粒，再将其转化入表达菌BL21大肠杆菌中。PCR鉴定阳性重组克隆后，IPTG诱导表达，SDS-PAGE方法检测表达结果，收集、纯化重组蛋白。结果：通过设计上下游引物经PCR法扩增出约1 400bp的DNA片段；将DKC1与PET-28a（+）质粒分别作BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，二者经粘性末端连接并转化DH5a大肠杆菌，PCR筛选阳性重组克隆测序表明，DKC1具有一个长度为1 380bp的ORF，编码460个氨基酸，理论分子量为51kDa，提取的重组质粒PET-28a（+）-DKC1再转化入BL21，以PCR鉴定获得阳性克隆后，IPTG诱导重组菌，产物行SDS-PAGE，成功获得重组蛋白。结论：本研究成功克隆到DKC1基因，并成功构建了重组载体，筛选到重组体，表达获得重组蛋白，为鉴定其蛋白功能提供了条件。

＊国家自然科学基金（31000956）