血清可溶性B7-H4在非小细胞肺癌患者中的表达及临床意义

张 波，买买提·吐尔逊木明，庞作良*

(1新疆医科大学附属肿瘤医院，乌鲁木齐830011;2新疆医科大学研究生院)

肿瘤在发生发展进程中会产生一些正常细胞不存在的新的抗原标记物，机体免疫系统通过对这些肿瘤抗原的识别而对肿瘤细胞进行杀伤与监视，即机体对肿瘤的免疫。T细胞介导的细胞免疫在人体抗肿瘤免疫效应中起重要作用，而T细胞活化需要双重信号的激活，即抗原提呈细胞(APC)上的抗原肽MHC与T细胞上的TCR-CD3复合体结合，提供T细胞活化的特异性抗原刺激信号，即第一信号;以及APC上的B7家族分子与T细胞上的CD28家族分子相互识别，为T细胞活化提供共信号，即第二信号［1］。B7-H4是新近发现的B7家族成员［2～4］，免疫组化及RT-PCR分析显示，B7-H4在卵巢癌等［5～8］一些肿瘤组织高表达，推测B7同源体4(B7-H4)具有减弱抗肿瘤免疫应答的作用。国内对于血清可溶性B7-H4(sB7-H4)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的研究鲜有报道。本研究应用ELISA法检测NSCLC患者血清中B7-H4的表达水平，并探讨其在NSCLC中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 从2010年10月～2011年8月收集新疆医科大学附属肿瘤医院胸外科住院患者，男30例、女21例，年龄60.88±8.50(41～79)岁，汉族39例、维吾尔族12例，有淋巴结转移16例、无淋巴结转移35例，病理分类为鳞癌26例、腺癌22例、其他类型3例(包含大细胞癌、肉瘤样癌)，组织分化为高分化6例、中分化34例、低分化11例，TNM分期(2009)Ⅰ期25例、Ⅱ期12例、Ⅲ期14例，均经术后常规病理诊断确诊。选取同期住院的肺部良性疾病(BPD)患者40例，包含结核、肺囊肿、错构瘤、炎性假瘤、支气管扩张、硬化性血管瘤等，男21例、女19例，年龄 52.95±12.36(28～77)岁。所有NSCLC患者行肺癌根治性手术治疗，并除外与自身免疫相关的疾病，标本采集前未行放疗、化疗及免疫治疗等相关肿瘤治疗。

1.2 实验材料 B7-H4 ELISA检测试剂盒，购于北京永辉生物科技有限公司。德国罗氏公司电化学发光免疫分析仪Cobas6000及罗氏公司提供的配套CA125、CEA检验试剂盒。

1.3 检测方法 所有NSCLC和BPD患者入院后第1天及NSCLC患者手术后第2天早晨空腹采集静脉血5 mL，3 000 r/min离心10 min，分离血清后置－70℃冻存待测，实验步骤严格按照试剂盒说明书操作，CA125、CEA检测由新疆医科大学附属肿瘤医院检验科完成。

1.4 统计学方法 采用Excel建立电子数据库，运用SPSS16.0进行t检验、F检验和Spearman相关性分析，计量资料以s表示，以P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清sB7-H4水平 NSCLC、BPD患者血清sB7-H4水平分别为(49.78±13.46)、(17.34± 9.39)μg/L(P＜0.01)。

2.2 血清sB7-H4与NSCLC临床病理参数的关系见表1。

表1 血清sB7-H4与NSCLC临床病理参数的关系(s)

表1 血清sB7-H4与NSCLC临床病理参数的关系(s)

临床病理参数 n sB7-H4(μg/L)P性别男30 48.32±11.41 ＞0.05女21 49.54±9.49民族汉39 49.73±9.57 ＞0.05维吾尔 12 49.62±10.45年龄(岁)≤60 25 48.02±8.57 ＞0.05＞60 26 50.82±9.48吸烟是26 49.62±10.61 ＞0.05否25 49.01±9.47肿块直径(cm)≥5 13 49.33±14.23 ＞0.05＜5 38 49.90±10.52病理类型腺癌 22 51.48±9.01鳞癌 26 47.76±11.72 ＞0.05其他 3 48.81±6.31组织分化高6 46.47±12.82中34 48.83±8.46 ＜0.05低11 51.63±9.27 TNM分期Ⅰ25 42.08±8.62Ⅱ12 49.62±9.73 ＜0.05Ⅲ14 52.46±10.63淋巴结转移有16 51.51±9.52 ＜0.05无35 48.72±8.63

2.3 NSCLC患者手术前后血清sB7-H4水平的变化 NSCLC患者手术前、后血清sB7-H4水平分别为(49.78±13.46)、(38.35±8.36)μg/L(P＜0.05)。

2.4 NSCLC患者血清sB7-H4水平与CA125、CEA相关性 将 NSCLC血清 sB7-H4表达水平与CA125、CEA水平进行Spearman相关分析，结果显示sB7-H4水平与CA125、CEA水平均呈正相关(r =0.717、0.586，P均＜0.05)。

3 讨论

B7-H4(又称 B7X和 B7sl)是2003年 Chen等［2～4］3个实验室利用生物信息学方法相继发现的B7家族新成员，主要在抗原特异性免疫反应中起抑制作用，其通过抑制CD+4和CD+8T细胞的增殖、细胞周期的进程及细胞因子IL-2、IFN-γ的产生来负性调控T细胞免疫应答。近来大量研究发现B7-H4在卵巢癌、乳腺癌、肾癌等［5～10］肿瘤组织中过度表达，提示B7-H4可能与肿瘤的发生有关。2006年Simon等［5］运用ELISA法在卵巢癌患者血清中首次证实了存在高表达的sB7-H4。本实验结果说明血清sB7-H4可能为 NSCLC诊断及预后提供新的依据。

本研究中血清sB7-H4在NSCLC组织中比在BPD组织中显著高表达，与张彩娣等研究相符合［11］，说明sB7-H4的表达水平增高可能通过负向调节T细胞免疫的方式加速癌细胞免疫逃逸，促进肿瘤在人体内生长，并抑制肿瘤细胞的凋亡，从而导致临床上肺癌的发生，提示sB7-H4可能为NSCLC新的具有特定诊断价值的肿瘤标记物，可用于鉴别良恶性肺部肿瘤，也说明编码血清sB7-H4蛋白的基因可能成为NSCLC的促进基因。

肿瘤细胞的分化程度是最重要的肿瘤恶性生物学特征，分化越差说明恶性程度越高，肿瘤患者的预后越差。本实验发现低分化肺癌患者血清sB7-H4的水平明显高于高中分化癌水平，钱韵等［12］的研究也表明了这一点，提示NSCLC患者血清中sB7-H4的过度表达可能通过下调APC的活性和加速T细胞凋亡来抑制肿瘤免疫系统的监控，从而促进肺癌细胞生长发展和恶性转化，使肿瘤细胞具有更大的恶性潜能。

本实验中有淋巴结转移的NSCLC血清sB7-H4显著高于无淋巴结转移的 NSCLC患者，与 Sun等［13］的研究结果相吻合，说明sB7-H4在NSCLC的转移中扮演重要角色。在实验过程中我们发现术后患者血清sB7-H4水平明显低于术前，可能是因为手术切除肿瘤组织后机体肿瘤负荷减轻，随即B7-H4表达减少，说明NSCLC患者血清sB7-H4水平与肺癌根治性手术治疗有关。此外本实验中NSCLC患者血清sB7-H4水平与CA125、CEA水平正相关，此现象提示三者有望成为联合检测NSCLC的有效指标。

综上所述，血清sB7-H4在NSCLC中高表达，可能通过抑制机体抗肿瘤免疫参与免疫逃逸，可能与NSCLC的发生、发展及转移有关。随着研究的深入，sB7-H4可望成为 NSCLC新的分子标记物和NSCLC免疫治疗的潜在靶点。

［1］Shin T，Kennedy G，Gorski K，et al.Cooperative B7-1/2(CD80/ CD86)and B7-DC costmiulation of CD+4T cells independent of the PD-1 receptor［J］.J Exp Med，2003，198(1):31-38.

［2］Chen L.Co-inhibitory molecules of the B7-CD28 family in the control of T-cell immunity［J］.Nature Rev Immunol，2004，4(5): 336-347.

［3］Sica GL，Choi IH，Zhu G，et al.B7-H4，a molecule of the B7 family，negatively regulates T cell immunity［J］.Immunity，2003，18 (6):849-861.

［4］葛惠心，畅继武.B7-1、GPI及其拼接在肿瘤免疫治疗中的应用进展［J］.山东医药，2006，46(29):78-79.

［5］Simon I，Zhuo S，Corral L，et al.B7-h4 is a novel membranebound protein and a candidate serum and tissue biomarker for ovarian cancer［J］.Cancer Res，2006，66(3):1570-1575.

［6］Simon I，Katasaros L，Riqault de la Lonqrais I，et al.B7-H4 is over-expressed in early stage ovarian cancer and is independent of CA125 expression［J］.Gynecol Oncol，2007，106(2):334-341.

［7］Kryczek I，Wei S，Zhu G，et al.Relationship between B7-H4，regulatory T cells，and patient outcome in human ovarian carcinoma［J］.Cancer Res，2007，67(18):8900-8905.

［8］孔凡荣，王黎明，戴淑真，等.B7-H4在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义［J］.山东医药，2008，48(46):32-33.

［9］Salceda S，Tang T，Kmet M，et al.The immunomodulatory protein B7-H4 is overexpressed in breast and ovarian cancers and promotes epithelial cell transformation［J］.Exp Cell Res，2005，6(1): 128-141.

［10］Thompson RH，Zang X，Lohse CM，et al.Serum-soluble B7x is elevated in renal cell carcinoma patients and is associated with advanced stage［J］.Cancer Res，2008，68(15):6054-6058.

［11］张彩娣，史建平，王凤鸣，等.负性协同刺激分子B7-H4在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义［J］.中国肿瘤生物治疗杂志，2009，16(6):633-636.

［12］钱韵，姚航平，沈玲，等.B7-H4在前列腺癌中的表达及其临床意义［J］.浙江大学学报(医学版)，2010，39(4):345-349.

［13］Sun Y，Wang Y，Zhao J，et al.B7-H3 and B7-H4 expression in non-small-cell lung cancer［J］.Lung Cancer，2006，53(2): 143-151.