虫类中药蛴螬的酚性成分

王 静，晏永明，谭 睿，程永现*

1西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031，2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 650204

虫类中药蛴螬的酚性成分

王 静1，2，晏永明2，谭 睿1*，程永现2*

1西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031，2中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 650204

从虫类中药蛴螬的乙酸乙酯提取物中分离得到6个化合物，其结构经波谱鉴定为3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(1)，水杨酸(2)，对羟基苯甲酸(3)，香草酸(4)，对羟基苯丙酸(5)和对羟基苯丙酸甲酯(6)。化合物1～6均为首次从该种动物药中分离得到。

虫类中药;蛴螬;金龟子科;酚性成分

蛴螬为节肢动物门昆虫纲鞘翅目金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子Holotrichia diomphalia Bates等同属近缘昆虫的干燥幼体［1］，又称地蚕、白地蚕、应条、乳齐、土蚕、白土蚕、大头虫、老母虫、核桃虫等。具有破血逐淤，明目退翳的功效，对妇女经闭、癥瘕尤著，外用可治丹毒、痈疽、痔漏、跌打损伤等［2］。蛴螬治疗目疾，自《神农本草经》即有记载。临床上将蛴螬制成滴眼液，用于治疗白内障、眼角膜翳等有较好的疗效［3］。现代药理研究证明蛴螬具有抗肿瘤、保肝、抗菌等作用［4］，如蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌Hela细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用［5］，韩国学者Oh WY等以水飞蓟素作阳性对照，发现蛴螬的保肝作用要强于水飞蓟素，在一定程度上可降低对肝脏细胞的损害［6］。

有关蛴螬化学成分，国内外研究相对较少，主要有脂肪酸类［7，8］，阳长明等对蛴螬化学成分进行了预试表明其主要含有氨基酸、多肽或蛋白质、糖类、生物碱、有机酸盐、甾体化合物等［9］。王玉亮等通过GC-MS分析了蛴螬石油醚提取物的化学成分，主要为挥发油类，如反油酸、十六酸，硬脂酸等［10］。此外，国外学者报道了蛴螬含有两种酚氧化酶原(Propo-Ⅰ和 Propo-Ⅱ)和三种酚氧化酶原活化因子(PPAF-Ⅰ、PPAF-Ⅱ和PPAF-Ⅲ)［4］。我们为了揭示蛴螬药用的化学物质基础，从中寻找有生物活性及药用前景的天然产物，对该中药进行了研究，从其乙酸乙酯提取物中分离得到6个化合物，经波谱学方法鉴定其结构为3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸，水杨酸，对羟基苯甲酸，香草酸，对羟基苯丙酸和对羟基苯丙酸甲酯。

1 仪器与材料

核磁共振波谱用Bruker AM-400核磁共振仪测定，TMS作为内标。薄层层析硅胶GF254和柱层析硅胶(200～300目)均为青岛海洋化工厂产品;Sephadex LH-20和反相硅胶RP-18分别为Pharmacia公司和日本Daiso公司生产。

2 提取与分离

蛴螬(18 kg)购自安徽省亳州药材交易中心，经湖南中医药大学中药鉴定教研室周小江副教授鉴定为朝鲜黑金龟子(Holotrichia diomphalia Bates)的干燥幼虫，将药材粉碎后用95%乙醇冷浸提取三次，每次3 d，减压回收溶剂得浸膏2 kg，加水混悬，以乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取物55 g经硅胶柱层析(600 g，氯仿∶甲醇10∶0～1∶1)，分为四段Fr.1-Fr.4。Fr2和Fr.3分别进行反复硅胶柱层析、反相柱层析和Sephadex LH-20柱层析得化合物1(21 mg)、3 (40 mg)、4(5 mg)和5(32 mg)。Fr.2-2经Sephadex LH-20(甲醇)柱色谱和反相RP-18(甲醇-水:30%、40%、50%、60%)洗脱后在甲醇中反复重结晶，得化合物2(70 mg)。Fr.3-4经反相柱层析和Sephadex LH-20柱层析后，硅胶制备薄层(石油醚∶丙酮2∶1)纯化得化合物6(20 mg)。

3 结构鉴定

3，5-二甲氧基-4-羟基苯甲酸(1) 白色固体;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.32(2H，s，H-2，6)，3.87(6H，s，2×OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:122.1(s，C-1)，108.2(d，C-2，6)，148.8(s，C-3，5)，141.6(s，C-4)，170.2(s，COOH)，56.7(q，OCH3)。以上数据与文献数值相符［11］。

水杨酸(2) 无色针状结晶;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6.82(1H，dd，J=8.0，1.7 Hz，H-3)，7.39(1H，d，J=1.7 Hz，H-4)，6.87(1H，brd，J=7.6 Hz，H-5)，7.81(1H，brd，J=7.6 Hz，H-6);13C NMR (CD3OD，100 MHz)δ:113.9(s，C-1)，163.2(s，C-2)，118.1(d，C-3)，136.6(d，C-4)，120.1(d，C-5)，131.6(d，C-6)，173.6(s，COOH)。以上数值与文献数值相符［11］。

对羟基苯甲酸(3) 白色固体;1H NMR (CD3COCD3，400 MHz)δ:7.93(2H，brd，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.92(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，7.44 (1H，brs，OH);13C NMR(CD3COCD3，100 MHz)δ: 122.4(s，C-1)，132.8(d，C-2，6)，116.0(d，C-3，5)，162.7(s，C-4)，168.6(s，COOH)。以上数值与文献数值相符［12］。

香草酸(4) 白色固体;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.55(1H，brs，H-2)，6.83(1H，brd，J=8.2 Hz，H-5)，7.54(1H，brd，J=8.2 Hz，H-6)，3.89 (3H，s，OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ: 123.6(s，C-1)，113.8(d，C-2)，152.4(s，C-3)，148.6(s，C-4)，115.8(d，C-5)，125.2(d，C-6)，171.2(s，CO)，56.4(q，OCH3)。以上数值与文献数值相符［13］。

对羟基苯丙酸(5) 白色固体;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.01(2H，brd，J=8.2 Hz，H-2，6)，6.68(2H，brd，J=8.2 Hz，H-3，5)，2.79(2H，t，J=7.8 Hz，H-1')，2.49(2H，d，J=7.8 Hz，H-2');13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:133.4(s，C-1)，130.2(d，C-2，6)，116.2(d，C-3，5)，156.6(s，C-4)，38.3(t，C-1')，31.7(t，C-2')，178.4(s，C-3')。以上数值与文献数值相符［14］。

对羟基苯丙酸甲酯(6) 白色固体;1H NMR (CD3OD，400 MHz)δ:7.04(2H，brd，J=8.2 Hz，H-2，6)，6.77(2H，brd，J=8.2 Hz，H-3，5)，2.90(2H，t，J=7.8 Hz，H-1')，2.62(2H，d，J=7.8 Hz，H-2')，3.69(3H，s，OCH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ: 132.1(s，C-1)，129.3(d，C-2，6)，115.3(d，C-3，5)，154.4 (s，C-4)，36.1(t，C-1')，30.1(t，C-2')，174.1(s，C-3')，51.8(q，OCH3)。以上数值与文献数值相符［14］。

蛴螬临床上对眼部疾患和口腔溃疡有良效，本研究获得的水杨酸以及苯甲酸衍生物是否分别从抗炎和抗菌方面对上述疾病起作用，值得进一步研究。

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3 Yang CM(阳长明)，Hou SX(侯世祥).Study on preparation procedure of grub eye drops.Chin Trad Patent Med(中成药)，2001，23:235-237.

4 Dong QF(董庆风)，Zhang CX(张崇禧).The chemical constituents fromHolotrichia diomphaand its pharmacological research progress.J Pharmaceut Prac(药学实践杂志)，2008，26:14-16.

5 Li D(李丹)，Song LL(宋莲莲)，Yang WS(杨万山).Inducing apoptosis effects and mechanism on hela human cervical carcinoma cells by grub extract.Cancer Res Prev Treat(肿瘤防治研究)，2008，35:91-494.

6 Oh WY，Pyo S，Lee KR，et al.Effect ofHolotrichia diomphalialarvae on liver fibrosis and hepatotoxicity in rats.J Ethnopharmacol，2003，87(2-3):175.

7 Dong QF，Wang JL，Zhang SF，et al.Chemical constituents of the petroleum ether extract ofHolotrichia diomphalialarvae.Chem Nat Compds，2009，45:79-80.

8 Dong QF，Zhang SF，Wang YL，et al.The fat-soluble constituents ofHolotrichia diomphalialarvae.Chem Nat Compds，2009，45:530-531.

9 Yang CM(阳长明)，Hou SX(侯世祥)，Wang XC(王新春)，et al.Chemical constituents of grub and grub eye drops.J Chin Med Mat(中药材)，2000，23:769-771.

10 Wang YL(王玉亮)，Dong QF(董庆峰)，Zhang L(张磊)，et al.Chemical constituents inHolotrichia diomphaliaby GCMS.Central South Pharmacy(中南药学)，2007，5:522-524.11 Jia L(贾陆).Study on chemical constituents ofUrena lobataL.Ⅱ.Phenolic acid constituents.Chin J Pharm(中国医药工业杂志)，2009，40:746-749.

12 Giang PM，Son PT，Matsunami K，Otsuka H.New megastigmane glucosides fromExcoecaria cochinchinensisLour.var.cochinchinensis.Chem Pharm Bull，2005，12:1600-1603.

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Phenolic Compounds from Holotrichia diomphalia Bates

WANG Jing1，2，YAN Yong-ming2，TAN Rui1*，CHENG Yong-xian2*

1Institute of Life Science and Engineering，Southwest JiaoTong University，Chengdu，610031;2State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China，Kunming Institute of Botany，Chinese Academy of Sciences，Kunming 650204，China

Six compounds were isolated from the ethyl acetate extract of a medicinal insect，Holotrichia diomphaliaBates.They were identified as 3，5-dimethoxy-4-hydroxylbenzoic acid(1)，salicylic acid(2)，4-hydroxybenzoic acid (3)，3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid(4)，4-hydroxyphenylpropionic acid(5)，and 4-hydroxyphenylpropionic methyl ester(6)，by using spectroscopic methods.All these compounds were isolated from this species for the first time.

medicinal insects;Holotrichia diomphaliaBates;Scarabaeoidea;phenolic compounds

Q284.2

A

1001-6880(2012)05-0622-03

2010-11-04 接受日期:2011-03-22

云南省中青年学术技术带头人与后备人才基金项目(2007PY01-48);云南省科技强省中德国际合作项目(2009AC011)

*通讯作者 Tel:86-28-87600993，E-mail:ruirui_tan@yahoo.com.cn; yxcheng@mail.kib.ac.cn