紫外分光光度法测定蛇鳞草根茎和叶中总黄烷醇苷的含量

钟希文，张文霞，曾聪彦，曾希娜（广州中医药大学附属中山市中医院，广东中山 528400）

紫外分光光度法测定蛇鳞草根茎和叶中总黄烷醇苷的含量

钟希文＊，张文霞，曾聪彦，曾希娜（广州中医药大学附属中山市中医院，广东中山 528400）

目的：建立测定蛇鳞草根茎和叶中总黄烷醇苷含量的方法。方法：以三羽新月蕨素A为对照品，采用紫外分光光度法，在280 nm波长处测定样品吸光度。结果：总黄烷醇苷的检测浓度在0.020～0.100mg·m L－1范围内与吸光度呈良好的线性关系（r＝0.999 5）；平均加样回收率为99.0%，RSD＝1.3%（n＝6）。结论：该方法简便、快速、准确，可用于蛇鳞草的质量控制。

蛇鳞草；紫外分光光度法；总黄烷醇苷；含量测定；三羽新月蕨素A

蛇鳞草为金星蕨科（Thelypteridaceae）新月蕨属（Abacopteris）三羽新月蕨Pronephrium triphyllum（Sw.）Holtt.的全草，在广东地区作为民间草药使用，具有清热解毒、消肿散瘀、化痰止咳等功效，主要用于治疗痈疮疖肿，毒蛇咬伤，湿疹，皮肤瘙痒，急、慢性气管炎等[1]。据文献报道，金星蕨科药用植物主要含有黄酮类化合物，其中黄烷-4-醇类化合物是该科植物的特征性成分[2～4]。至目前为止，日本学者从蛇鳞草中分出三羽新月蕨素A、B、C（TriphyllinsA、B、C）3个黄烷-4-醇类化合物[5]。笔者的前期药理实验表明，蛇鳞草全草水提液具有显著的抗炎镇痛[6]、镇咳祛痰[7]及一定的抑菌杀菌[8]作用；且在对其化学成分的研究中，从该植物中得到蛇鳞草苷A、Triphyllin A、6，7-二羟基香豆素、正丁基-β-D-吡喃果糖苷等化合物，其中Trphyllin A含量高达近5 g，为总黄烷醇苷的主要组成成分[9]。故本试验以Trphyllin A为指标，首次采用紫外分光光度法对蛇鳞草的根茎和叶中总黄烷醇苷的含量进行了测定，以期为蛇鳞草及其制剂的开发利用及质量控制提供依据。

1 仪器与试药

UV-2550紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；KQ3200E超声仪（昆明市超声仪器有限公司，频率：40 kHz，功率：120W）；BS-224S电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；电热恒温水浴锅（上海衡平仪器仪表厂）；东方-A直热式电热恒温干燥箱（广州东方电热干燥设备厂）。

蛇鳞草采自广东中山市五桂山，由广州中医药大学潘超美教授鉴定为金星蕨科植物三羽新月蕨P.triphyllum（Sw.） Holtt.的全草。Triphyllin A标准品由笔者分离制备，结构已由紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、电喷雾质谱（ESI-MS）和核磁共振（NMR）等波谱分析鉴定，纯度经高效液相色谱（HPLC）归一化法计算在98%以上；所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备

将干燥的蛇鳞草全草根茎、叶进行分离，粉碎成粗粉，备用。分别称取蛇鳞草根茎、叶的粗粉各约5 g，置索氏提取器中，加氯仿150m L，加热回流至提取液无色，弃去氯仿提取液。待氯仿挥干后，将粉末置于烘箱中60℃干燥3 h，取出，置于干燥器中，备用。取处理后的样品0.2 g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%乙醇10m L，称定重量，加热回流70 min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足失重，摇匀，滤过，滤液备用。重复上述操作3次，分别精密吸取3次续滤液各1 m L，置25m L容量瓶中，70%乙醇定容，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 标准品溶液的制备

精密称取于105℃干燥至恒重的Triphyllin A标准品10.0 mg，置于50m L容量瓶中，加入70%乙醇定容，超声溶解，摇匀，配成浓度为0.20mg·m L－1的标准品溶液，冷藏，备用。

2.3 检测波长的确定

将稀释至一定程度的标准品溶液和供试品溶液以70%乙醇为空白对照，在波长为200～400 nm范围内扫描。结果显示，供试品溶液和标准品溶液均在280 nm波长处有最大吸收（见图1），故确定检测波长为280 nm。

2.4 线性关系考察

图1 UV扫描图A.Triphyllin A对照品；B.供试品Fig 1 UV scan chromatogram sA.Triphyllin A control；B.samples

精密吸取标准品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0m L，分别置于10m L容量瓶中，加70%乙醇定容，摇匀，以70%乙醇为空白对照，于280 nm波长处测定吸光度。以浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为A＝6.955c+ 0.063 7（r＝0.999 5，n＝5）。结果表明，Triphyllin A的检测浓度在0.020～0.100mg·m L－1范围内与吸光度呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取标准品溶液适量，按上述色谱条件连续测定5次。结果，RSD＝0.33%（n＝5），表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

取5m L供试品溶液，置于25m L容量瓶中，70%乙醇定容。分别于0、1、2、4、8、12 h测定吸光度，计算药材中总黄烷醇苷的含量。结果，RSD＝1.7%（n＝6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

精密称取处理后的同一批次蛇鳞草样品0.2 g，共6份，分别按“2.1”项下方法制备供试品溶液。分别以70%乙醇为空白对照，在280 nm波长处测定吸光度，计算药材中总黄烷醇苷的含量。结果，同批药材6次测定总黄烷醇苷的平均含量为10.2%，RSD＝1.9%（n＝6），表明该方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验

精密称取处理后的已知总黄烷醇苷含量的蛇鳞草样品0.1 g，共6份，置圆底烧瓶中，分别加入适量Triphyllin A标准品，按“2.1”项下方法制备供试品溶液。分别以70%乙醇为空白对照，在280 nm波长处测定吸光度，计算药材中总黄烷醇苷的含量和加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝6）

2.9 样品含量测定

分别精密称取不同批次的蛇鳞草根茎、叶粗粉各0.2 g，置圆底烧瓶中，按“2.1”项下方法制备供试品溶液。分别以70%乙醇为空白对照，在280 nm波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中相当于Triphyllin A的量，计算药材中总黄烷醇苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Content determ ination of sam p les（n＝3）

由表2可知，蛇鳞草的根茎与叶所含总黄烷醇苷的含量差异较大，以Triphyllin A计，根茎、叶的平均含量分别为10.3%、8.9%。

3 讨论

在植物代谢产物中，黄烷-3-醇及其苷类，如儿茶素类和原花色素类化合物比较常见，而黄烷-4-醇及其苷类相对比较少见。从文献[2～4]来看，黄烷-4-醇类在金星蕨科植物中大量分布，故可以把此类成分作为该科特征性成分之一。笔者前期蛇鳞草化学成分研究表明，黄烷-4-醇苷类化合物是蛇鳞草中主要成分，其中含量最高的为Triphyllin A，故以Triphyllin A作为质量控制指标具有较强的可操作性。紫外分光光度法是鉴定黄酮类化合物的一种重要技术，目前被广泛用于测定中药中的总黄酮。因此，本试验以紫外分光光度法测定蛇鳞草根茎、叶中总黄烷醇苷类化合物的含量。试验结果表明，该方法简便、快速、准确、精密度高、稳定性强、重复性好、加样回收率合格，可作为测定蛇鳞草中总黄烷醇苷含量的一种有效方法。

由于所测总黄烷醇苷极性相对较大，其在石油醚、氯仿中的溶解度非常小，因此在样品提取时分别采用了石油醚和氯仿进行脱脂脱色预处理，并与不进行预处理直接提取所得供试品溶液总黄烷醇苷含量进行比较。结果表明，不进行预处理所得供试品溶液中的总黄烷醇苷含量最低，而用氯仿处理比用石油醚处理所得的含量要高，表明采用氯仿除杂质后能显著减少杂质对待测总黄烷醇苷的干扰，故本试验选择以氯仿作为脱脂脱色溶剂对蛇鳞草的根茎、叶进行预处理。在选择提取溶剂时，比较了甲醇和乙醇提取的效果，结果表明2种溶媒的提取效果无明显差异，考虑到甲醇的毒性，故选择乙醇作为提取溶剂。此外，试验对蛇鳞草的根茎与叶分别测定其总黄烷醇苷的含量，从而可清楚地得知总黄烷醇苷在蛇鳞草植物体内的分布情况，为蛇鳞草及其制剂的进一步深入开发与研究提供参考依据。

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Determ ination of Total Flavanol Glycosides in Rhizome and Leaves ofPronephrium triphyllumby UV Spectrophotometry

ZHONG Xi-wen，ZHANGWen-xia，ZENG Cong-yan，ZENG Xi-na（Zhongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine A ffiliated to Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Zhongshan 528400，China）

OBJECTIVE：To establish amethod for the determ ination of the total flavanol glycosides in rhizome and leaves ofPronephrium triphyllum.METHODS：Using triphyllin A as control，the total flavanol glycosides were determined by spectrophotometric method atwavelength of 280 nm.RESULTS：The linear range of total flavanol glycosideswas 0.020～0.100mg·m L－1（r＝0.999 5）w ith an average recovery of 99.0%（RSD＝1.3%，n＝6）.CONCLUSION：Themethod is simple，rapid and accurate，and can be used for quality control ofP.triphyllum.

Pronephrium triphyllum；UV spectmphotometric method；Total flavanol glycosides；Content determ ination；Triphyllin A

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2012）23-2176-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.23.25

＊主任中药师，教授，硕士研究生导师。研究方向：新药开发与中药药理。电话：0760-88815106。E-mail：zszxw68@126.com

2011-10-08

2012-02-24）