松潘乌头总碱的抗炎机制研究

李 敏，李晓强，焦海胜，王建治（兰州大学第二医院，兰州 730030）

乌头属植物松潘乌头（Aconitum sungpanense Hand.-Mazz.）分布在甘肃、四川、青海等广大地区，民间常用于治疗跌打损伤、风湿性和类风湿性关节炎等疾病。其化学成分主要为多种生物碱，以二萜类生物碱为主[1]。药理实验结果证明，松潘乌头总碱（TAS）有镇痛、抗炎、解热的作用[2，3]。笔者将主要研究TAS的抗炎机制，为其开发、利用提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

751型分光光度计、UV/VIS-731型紫外分光光度计（上海分析仪器厂）。

1.2 试药

TAS（兰州大学药学院药物分析教研室提供，含量：1.14%）；消炎痛（兰州制药厂，批号：20101106）；角叉菜胶（Car，辽宁药物研究所）；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3 动物

普通级昆明种小鼠，♀♂兼用，体重（22.0±2.0）g（动物生产合格证号：医动字第14-005）；普通级Wistar大鼠，♀♂兼用，体重（185.0±25.0）g（动物生产合格证号：医动字第14-006），均由兰州大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 明胶致炎小鼠多形核白细胞游走实验[4]

♂小鼠40只随机均分为4组，即对照（等容量生理盐水，ig）、消炎痛（2.0 mg·kg－1，sc）和TAS高、低剂量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）组，每天给药1次，连续3 d。于末次给药1 h后ip 1%明胶0.8 mL，3 h后处死小鼠，取腹液1滴涂片，瑞氏染色，油镜下计100个多形核白细胞、淋巴细胞、组织细胞，从中计算出多形核白细胞的百分比。

2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性测试[5]

♀小鼠40只均分为4组，即对照（等容量生理盐水，ig）、消炎痛（20 mg·kg－1，sc）和TAS高、低剂量（3.0、1.5 mg·kg－1，ig）组。给药前禁食不禁水12 h。给药30 min后，每鼠尾iv 0.5%伊文斯蓝溶液5 mL·kg－1，5 min后ip 0.7%乙酸溶液10 mL·kg－1，30 min后处死小鼠，用蒸馏水反复冲洗腹腔内伊文思蓝溶液，将冲洗液稀释至5 mL，加0.1 mol·L－1NaH 0.1 mL，于590 nm波长处测吸光度（A）值。

2.3 大鼠足跖炎症组织PGE含量测定[6]

♂大鼠40只均分为4组，即对照（等容量生理盐水，ig）、消炎痛（1.5 mg·kg－1，sc）和TAS高、低剂量（2.0、1.0 mg·kg－1，ig）组。给药30 min后，每鼠左后足跖sc 1%Car 0.1 mL致炎，4 h后处死大鼠，将致炎足自踝关节上1 cm处剪下，称重，浸泡于5 mL生理盐水中45 min后，于50℃水浴异构化20 min，加甲醇溶液5 mL，于278 nm波长处测定A值，计算前列腺素E（PGE）含量。

2.4 Car致炎大鼠气囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性测定

分组与给药同“2.3”项下方法。于Car致炎前给药，每天1次，连续4 d；致炎后6 h再给药1次。第4天给药1 h后，于大鼠背部气囊内注射Car 25 mg·kg－1诱发炎症，致炎后12 h处死大鼠，取血、离心、制备血清，待测SOD活性；气囊内注射4 mL Hank’s液进行灌洗，收集灌洗液于试管内，于4℃离心，取上清液，待测MDA含量。SOD活性和MDA含量测定按试剂盒说明书进行。

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 TAS对明胶致炎小鼠多形核白细胞游走的影响

对照、消炎痛和TAS高、低剂量组小鼠腹腔液中多形核白细胞百分比分别为（42.50±15.34）%、（21.87±16.92）%、（20.58±17.34）%、（23.16±12.09）%。与对照组比较，TAS高、低剂量组有显著性差异（P＜0.01），表明TAS能明显抑制明胶诱发的多形核白细胞的游走，使其百分比降低。

3.2 TAS对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

对照、消炎痛和TAS高、低剂量组A值分别为（0.250±0.045）、（0.139±0.033）、（0.125±0.026）、（0.138±0.031）。与对照组比较，TAS高、低剂量组有显著性差异（P＜0.01），表明TAS能使伊文思蓝渗出量明显减少，即降低了乙酸所致毛细血管通透性增加。

3.3 TAS对Car诱发的大鼠足跖炎症组织PGE含量的影响

对照、消炎痛和TAS高、低剂量组大鼠足跖炎症组织PGE的含量分别为（232.71±39.62）、（103.68±27.25）、（109.42±28.15）、（118.24±31.52）mg·g－1。与对照组比较，TAS高、低剂量组有显著性差异（P＜0.01），表明TAS能使大鼠炎症组织中PGE的含量明显减少。

3.4 TAS对Car致炎大鼠气囊灌洗液中MDA含量和血清SOD活性的影响

与对照组比较，TAS高、低剂量组MDA含量显著减少，SOD活性显著增强（P＜0.01或P＜0.05）。TAS对模型大鼠气囊灌洗液中MDA含量与血清SOD活性的影响见表1。

4 讨论

先前的药理实验结果表明，TAS对二甲苯致小鼠耳肿，蛋清、Car、甲醛性大鼠足肿与大鼠琼脂性肉芽增生均有明显抑制作用，说明TAS具有显著的抗急、慢性炎症作用[3]。从本研究结果观察到，TAS能降低乙酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加；使明胶诱发的小鼠腹腔炎性渗出液中多形核白细胞百分比降低；使大鼠足跖炎症组织PGE的含量明显减少。提示TAS的抗炎作用机制可能与其降低毛细血管通透性、减少渗出，抑制白细胞游走，降低其向炎症部位的聚集（趋化），以及抑制炎症介质PGE的释放有关。

表1 TAS对模型大鼠气囊灌洗液中MDA含量与血清SOD活性的影响（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

表1 TAS对模型大鼠气囊灌洗液中MDA含量与血清SOD活性的影响（±s，n＝10）Tab 1 Effects of TAS on MDA content and SOD activity in air sac irrigating solution of model rats（±s，n＝10）

与对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

组别对照组消炎痛组TAS高剂量组TAS低剂量组剂量/mg·kg－1－1.52.01.0 MDA/nmol·mL－111.28±1.137.81±0.97＊＊7.52±0.88＊＊8.11±0.97＊＊SOD/U·mL－198.26±27.02128.06±21.92＊＊130.32±26.21＊＊123.82±24.15＊

氧自由基在疾病中所起的作用日益被人们所重视。据报道，类风湿性关节炎患者病灶中氧自由基明显增多，可能是其病理机制之一；大鼠佐剂性关节炎局部炎症与脂质过氧化程度密切相关[7]。本研究结果表明，Car致炎大鼠气囊灌洗液中MDA水平明显增高、血清SOD活力明显降低，与上述报道相一致。而TAS使大鼠炎性灌洗液中MDA含量降低、血清SOD活性升高，提示抑制脂质过氧化反应、减少氧自由基的生成，可能是TAS抗炎作用的又一重要机制。

[1]李洪刚，李广义.松潘乌头二萜生物碱的研究[J].药学学报，1988，3（23）：460.

[2]党月兰，胡兆勇，吴福祥.松潘乌头总碱的镇痛作用和身体依赖性的实验研究[J].中国药物依赖性通报，1993，3（2）：242.

[3]杨军英，党月兰.松潘乌头总碱的抗炎解热作用[J].中国临床药理学与治疗学，2003，8（4）：441.

[4]党月兰，骆 勤，李淑玉.红毛五加总甙的抗炎作用[J].中药药理与临床，2000，16（1）：14.

[5]马建秀，高明堂，马迎春.棉丹通肺化淤胶囊镇痛抗炎的实验研究[J].中药药理与临床，2005，21（3）：49.

[6]李仪奎.中药药理实验方法学[M].第1版.上海：上海科学技术出版社，1991：307.

[7]丁长海，陈敏珠，魏 伟，等.抗氧自由基药物研究进展[J].中国药理学通报，1992，8（5）：332.