HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的含量

赵海桥，刘存领，付 建，苏贵勇

(1.山东方明药业集团股份有限公司，山东东明274500;2.山东大学药学院，山东济南250012; 3.中国药科大学药学院，江苏南京210009)

甲磺酸伊马替尼用于治疗慢性粒细胞白血病(CML)急变期、加速期或α－干扰素治疗失败后的慢性期患者;不能手术切除或发生转移的恶性胃肠道间质肿瘤(GIST)患者。进口药品注册标准JX20040087采用梯度洗脱测定甲磺酸伊马替尼片的含量，需要至少两元泵的液相才能测定，限制了该方法的普遍使用性。本文建立的方法，只需普通的液相就能测定，方法简便，结果可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津SPD－10A高效液相色谱仪。

1.2 试药 甲磺酸伊马替尼对照品(山东方明药业集团股份有限公司，1102001);甲醇、辛烷磺酸钠为色谱纯;水为纯化水;其他试剂均为分析纯;甲磺酸伊马替尼片(山东方明药业集团股份有限公司;批号:1106001、1106002、1106003;规格:0.1 g)。

2 方法与结果［1］

2.1 色谱条件 色谱柱为Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以含0.04%辛烷磺酸钠的20 mmol·L－1磷酸二氢钠溶液(磷酸调至pH 2.5)－甲醇(40∶60)为流动相，流速为1 mL ·min－1，检测波长为268 nm，柱温为30℃，进样量为20 μL。

2.2 对照品溶液的制备 取甲磺酸伊马替尼对照品约24 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取甲磺酸伊马替尼片20片，精密称定，研细，精密称取粉末适量(约相当于伊马替尼20 mg)，置100 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声20 min，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 根据甲磺酸伊马替尼片的制剂配方，制备不含甲磺酸伊马替尼的阴性对照粉末。精密称取阴性对照粉末适量(约相当于伊马替尼20 mg的量)，按照“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验 辅料干扰试验:分别对阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液进样分析，辅料不干扰甲磺酸伊马替尼的测定。

破坏试验:取甲磺酸伊马替尼片适量(约相当于伊马替尼20 mg)置100 mL容量瓶中，照下述方法试验:①加1.0 mol·L－1盐酸溶液2 mL并放置8 h作为酸破坏样品;②加1.0 mol·L－1氢氧化钠溶液2 mL并放置8 h作为碱破坏样品;③加3%过氧化氢溶液2 mL并放置8 h作为氧化破坏样品;④置4 500 lx光照度下8 h作为光照降解样品;同时做空白及辅料空白试验。结果表明:甲磺酸伊马替尼对酸、碱、氧化剂及光照均较稳定，各降解产物分离度良好。

2.6 线性关系考察 精密称取甲磺酸伊马替尼对照品约50.11 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为溶液①，精密量取溶液①2.0、1.0、1.0、1.0 mL，分别置5、5、10、20 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为溶液②、③、④、⑤，按上述液相条件，分别进样20 μL，记录色谱图峰面积。以甲磺酸伊马替尼峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标计算得回归方程为:A=561.32C+ 894.552 7，r=0.999 9。结果表明甲磺酸伊马替尼在25.055～501.1 μg·mL－1浓度范围内线性关系良好。

2.7 精密度试验 精密量取对照溶液20 μL，按上述液相条件，连续进样6次，RSD为1.0%。结果表明，精密度良好。

2.8 重复性试验 取同一批号(1106001)样品适量5份，精密量取，按样品测定项下的方法，测定甲磺酸伊马替尼片的含量，RSD为0.84%，重复性良好。

2.9 稳定性试验 取重复性实验中的第1份溶液，室温下在0、2、4、6、8 h测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温8 h内稳定，计算得:RSD=1.1%，n=5。

2.10 方法准确度试验 在阴性对照粉末中分别加入适量的甲磺酸伊马替尼对照品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，在相当于供试品溶液80%、100%和120%浓度水平下，分别考察加样回收率。每个浓度制备3份。测定3个浓度下的平均回收率分别为99.88%、100.12%、100.95%;RSD (n=3)分别为0.36%、0.88%、0.74%。

2.11 样品测定 对批号为1106001，1106002，1106003的甲磺酸伊马替尼片样品，按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，每批样品制备3份，按外标法计算含量，测得结果与进口药品注册标准比较，结果见表1。

表1 样品含量测定结果比较表(n=3)

3 结果与讨论

试验表明，本测定方法简单，测定结果准确可靠，重现性好，可用于甲磺酸伊马替尼的含量测定。

流动相的选择:参考进口注册标准，减少辛烷磺酸钠用量的同时使用磷酸二氢钠，且在该流动相条件下，甲磺酸伊马替尼的保留时间较为理想，理论塔板数高［2］。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅤD.

［2］ 亢玮，王文义，王友国.HPLC法测定阿昔莫司片的含量［J］.齐鲁药事，2012，31(3):153－154.