咽舒喷雾剂组方合理性验证研究

崔清华，张雷明，薛云丽，田景振

(1.山东中医药大学，山东济南250335;2.烟台大学，山东烟台254000;3.南京绿叶思科药业有限公司，江苏南京210061)

咽舒喷雾剂是由山豆根、黄芩、丹皮、赤芍、生地、薄荷等11味药材组成的复方医院制剂，具有清热养阴、解毒利咽、活血生津等功效。临床用于治疗各种急慢性咽炎，作用直接、迅速、持久。对复方研究时发现山豆根主要有效成分生物碱类会与其他黄酮类成分产生沉淀反应，导致有效成分损失，降低药效，有必要对方中山豆根的去留做一筛选。另咽舒复方中大部分药物为治疗咽炎常用药，而赤芍、生地这两味药材无论从化学成分还是药理活性上均没有文献表明有治疗咽炎作用，故对这两味药材逐一拆方考察［1］，观察精简后的不同处方对有效组分含量及抗炎效果的影响，阐明方剂配伍的科学性，并为咽舒喷雾剂的剂型完善奠定基础。

1 材料

扶他林乳胶剂(北京诺华制药有限公司，批号X2045);咽舒喷雾剂组方所用药材(烟台绿叶有限公司，均符合《中国药典》2010年版各项下质量标准要求);硝酸铝、氢氧化钠、亚硝酸钠、三氯甲烷、溴麝香酚蓝、磷酸二氢钾等，均为分析纯或化学纯;AR3130分析天平(Adventurer公司);健康SPF级昆明种小鼠，体重(20±2)g［山东绿叶制药有限公司实验动物中心，动物生产许可证号:SCXK(鲁)2009－0009］;752紫外分光光度计(上海元析);PHS－3C pH计(上海三信)等。

2 实验方法与结果

2.1 供试品溶液的制备 丹皮、薄荷置多功能提取器中提取挥发油，收集蒸馏液。山豆根等几味，按简单拆方法分别对不同组方下得药材加10倍量水煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液，滤过，浓缩至每毫升药液中药材量为0.1 g，加入挥发油，混匀，分别制备原方药液、全方减山豆根、全方减赤芍、全方减生地共四种药液，备用。

2.2 总黄酮含量测定(亚硝酸钠－硝酸铝显色法)［2］以芦丁为对照品，取供试品溶液1 mL，置25mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的试剂为空白，照紫外－可见分光光度法，在500 nm处测定吸光度。

2.3 总生物碱含量测定(酸性染料比色法)［3］以氧化苦参碱作对照品，取供试品溶液1 mL，置于60 mL分液漏斗中，精密加入pH 7.6的缓冲溶液8 mL，0.001 mol·L－1溴甲酚蓝液2 mL，混匀后加入三氯甲烷10 mL，振摇萃取5 min，放置10 min，分层，分取三氯甲烷液加入含有0.2 g无水硫酸钠的10 mL量瓶中，摇匀，放置10 min，以三氯甲烷作为空白，在414 nm波长下测定吸光度。

2.4 抗炎作用［4］昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分成6组:生理盐水对照组、扶他林乳胶剂组、咽舒喷雾剂原方组、原方减山豆根组、原方减赤芍组、原方减生地组。每组小鼠左、右耳前、后两面分别用棉棒涂生理盐水及相应药物(分2次给药，间隔30 min)。末次给药30 min后，在各组小鼠右耳涂二甲苯12 μL(前后各6 μL)，1 h后处死动物，用9 mm打孔器于每只小鼠的左右耳相同部位打下耳片，分别称重，计算肿胀率及肿胀抑制率，比较组间差异的显著性。

肿胀值=右耳片重－左耳片重;

肿胀率=肿胀值/左耳片重;

肿胀抑制率=(对照组肿胀均值－用药组肿胀均值)/对照组肿胀均值。

2.5 结果 总黄酮含量测定标准曲线:C=2.147 7A+ 0.071，R2=0.999 2(0.38～1.14 mg·mL－1内线性范围良好)。

总生物碱含量测定标准曲线:C=1.783 4A+0.037 2，R2=0.996 3(0.2～1.2 mg·mL－1内线性范围良好)。

有效组分含量测定及抗炎效果见表1、表2。

表1 咽舒喷雾剂不同组方总黄酮及生物碱含量测定结果(n=3)

表2 咽舒喷雾剂不同组方对小鼠二甲苯致耳肿胀的影响(n=10)

3 讨论

拆方研究可说明中药复方的配伍关系和组方理论，通过拆方分析得出的规律性认识，为研制中药复方新药提供可靠的依据。中药复方是按君臣佐使配伍的，是中医用药的特色所在。现代复方药理研究，对多个方剂进行拆方等深入研究后，在一定程度上证实了方剂配伍的合理性。拆方研究对筛选方剂的有效成分，优化方剂的配伍不失为一种好的方法［5］。

组分含量和抗炎效果成正比关系，证明所选指标有意义。有效组分结合药效学双重指标得出的结论更具有科学性和使用性。原方减山豆根后，无论从有效组分含量还是抗炎作用效果上都相比原方有很大损失。证明山豆根在复方中的作用，其正面效果远大于负面效应，故应保留。

原方减赤芍后其有效组分和药效损失均超过10%，大于单味药材的平均值，故应保留。原方减生地后组分含量有少量损失，药理结果与原处方不相上下，考虑到可能存在长效作用等未知因素，故选择尊重原方，保留地黄。

本实验通过简单拆方对咽舒复方中有争议的药味逐一减少以观察疗效变化，寻找组效关系。从中找出起主导作用的药物，或各味药物在复方中的地位，或各味药之间的最佳配伍比例［6］。实验结果充分显示了原处方配伍的合理性和科学性。虽然没有达到精简处方的目的，但是从组分和药理两方面证实了山豆根在方中的君药地位;赤芍和生地的存在显示了中医理论指导下的增效减毒作用。研究表明，咽舒喷雾剂组方合理，药效明确，具备进一步开发的价值。

［1］ 朱萱萱，纪伟，彭青，等.热痹消治疗急性痛风性关节炎的拆方研究［J］.中医药学刊，2004，22(3):433－434.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:333.

［3］ 邵晶，倪京满，郭玫，等.苦参药材中总生物碱含量的测定［J］.安徽农业科学，2008，36(36):15950－15951，15967.

［4］ 许建安.五鹤续断抗炎镇痛作用的实验研究［J］.数理医药学杂志，2011，24(4):449－451.

［5］ 李凌艳，马长勇.中药复方研究的现状与方法探析［J］.齐鲁药事，2011，30(1):44－47.

［6］ 王丽静，贾晓斌，陈彦，等.中药复方拆方研究的思路与方法［J］.中成药，2008，30(9):1343－1346.