头穴丛刺对慢性抑郁模型大鼠行为学改变的影响*

2012-01-31 09:20徐博佳郑祖艳张海芳
针灸临床杂志 2012年6期
关键词:糖水消耗量造模

徐博佳,郑祖艳,蒋 鹏,张海芳

(黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江哈尔滨150040)

实验研究

头穴丛刺对慢性抑郁模型大鼠行为学改变的影响*

徐博佳,郑祖艳,蒋 鹏,张海芳

(黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江哈尔滨150040)

目的:通过观察头穴丛刺对慢性不可预见性应激模型大鼠行为学的改变,证明头穴丛刺对抑郁症的治疗作用。方法:24只3月龄健康雄性Wister大鼠,随机分为正常对照组、模型组、针刺组,每组8只;用慢性不可预见性轻度刺激结合孤养法造模,给予模型组和针刺组14天随机不同应激刺激,之后对针刺组进行针刺治疗,选“百会”“神庭”及“四神聪”,留针20 min,每日针刺1次,连续针刺治疗14天。在实验前1天、实验的第14天、21天、28天对大鼠进行测量体重、open-field评分及糖水消耗试验。结果:造模后14天模型组和针刺组大鼠体重、糖水消耗量明显低于正常对照组(P<0.05);造模后21天模型组大鼠体重、糖水消耗量均明显低于正常对照组(P<0.05),但针刺组大鼠仅体重明显低于正常对照组(P<0.05)而糖水消耗量虽低于正常对照组但不明显(P>0.05);造模第28天模型组大鼠体重、垂直运动、水平运动、糖水消耗量均明显低于针刺组(P<0.05),针刺组与正常对照组之间无显著差异。结论:头穴丛刺对慢性不可预见性应激结合孤养法制造抑郁症模型大鼠的行为学改变有治疗作用。

头穴丛刺;慢性抑郁;open-field评分;糖水消耗试验

抑郁症目前已成为全球性的主要精神卫生问题,世界卫生组织预计,到2020年抑郁症造成的全球疾病负担将仅次于冠心病,因而被称为新世纪健康的第二杀手[1]。随着现代医学的不断发展,对抗抑郁药物的深入研究及广泛使用,对抑郁症的治疗临床上取得了一定的疗效,但是抗抑郁药物长期服用疗效降低,且有严重的毒副作用及过量使用的危险。针灸治疗抑郁症已取得肯定疗效,且不良反应轻微短暂[2],故深入探讨针灸治疗抑郁症作用机理具有重要的意义。本实验模拟人的慢性应激刺激过程,设计慢性应激抑郁模型大鼠,并以此为研究对象,探讨头穴丛刺对抑郁症的治疗作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

本实验以清洁级3月龄体重在(200±20)g之间的健康雄性Wister大鼠为研究对象(购于黑龙江中医药大学动物实验室)。

1.2 实验器材

电子称,量杯,自制敞箱(长80 cm、宽80 cm、高40 cm),SDZ-Ⅱ型电针治疗仪。

1.3 分组

将大鼠购回后,在实验室饲养1周,以适应实验室环境,使大鼠自由摄取食水。然后对每只大鼠分别进行3次开野实验(Open-fild),将水平运动加垂直运动次数平均大于100次或少于50次的大鼠剔除,再按体重由轻到重排序,将序号输入电脑随机分为正常对照组、模型组和针刺组,每组8只,正常对照组每笼4只,模型组和头穴丛刺组单笼饲养。

1.4 模型制备

按照文献方法[3]制备大鼠慢性应激抑郁模型。模型组和头穴丛刺组单笼饲养并接受14天各种不同的应激刺激,每日随机不定时选取一种刺激。刺激包括高温刺激(45℃,5 min)、冷水游泳刺激(4℃,5 min)、晃动刺激(1次/s,15 min)、夹尾3 min、足底电击(电压50 mV,每隔1 min刺激1次,每次持续10 s,共30次)、禁水24 h、禁食48 h和昼夜颠倒等应激刺激,每天随机安排1种,在刺激之前给予持续10 s的铃声提示,正常对照组每日抓取1次,予以10 s铃声提示但不予刺激。

1.5 头穴丛刺法

针刺组在实验的第15天起,于每日上午对大鼠进行针刺治疗。参照《实验动物穴位图谱》[4]取“百会”、“四神聪”、“神庭”穴,用华佗牌30号半寸毫针进行针刺,均平刺0.2 cm左右,针柄接SDZ-Ⅱ型电针治疗仪,频率2 Hz,电流强度0.6 mA左右,以大鼠头部微颤为宜。留针20 min,每日针刺1次,连续针刺治疗14天。

1.6 观测指标及检测方法

1.6.1 体重 每只动物于造模前1天、造模后14天、21天、28天分别称量体重,记录体重变化情况。

1.6.2 开野试验(Open-filed法) 包括水平运动评分及垂直运动评分,水平的运动评分反映了实验大鼠自由活动程度的情况;垂直的运动评分则反映实验大鼠对新鲜环境的好奇程度。因此开野实验是抑郁症研究最常用的行为指标之一。开野实验(open-field)测定方法:参考文献[5],本实验使用的敞箱为80 cm×80 cm×60 cm立方体,敞箱的四壁及底面皆涂为黑色,底面用白线划分成等面积的25个方块。实验时将一只大鼠置于敞箱底面的正中心的方格内,以大鼠穿越底面的格数(四只爪均踏入的方格为记数格)为水平运动(crossing)次数,以后肢直立次数(两前爪腾空或攀附敞箱壁)为垂直运动(rearing)次数,每只大鼠在实验前1天、实验28天各测定1次,每次测定计时3 min,记录大鼠水平运动的次数及垂直运动的次数,每只大鼠记录结束后彻底清洁敞箱后才可以进行下1只大鼠的开野实验观察。

1.6.3 糖水消耗试验 糖水消耗试验反应了大鼠对食物愉快感的变化。方法:开野实验后,将大鼠禁水24 h后给予1%的蔗糖水250 ml,同时禁食,24 h后量所剩蔗糖水的量,计算大鼠在24 h内蔗糖水消耗量。以蔗糖水消耗与体重比值的方法来比较,以每千克动物体重消耗糖水重量(ml/kg)计算,以降低体重因素对糖水消耗试验结果的影响。在实验前1天、14天、21天、28天各测定1次。

1.7 统计方法

采用SPSS16.0统计软件系统处理实验数据,以均数±标准差(±s)表示,采用单因素方差分析,以P<0.05为显著性差异的标准。

2 结果

2.1 头穴丛刺对大鼠体重的影响

见表1。实验前各组大鼠的体重未见明显差异,具有可比性(P>0.05);造模14天后,模型组、针刺组与正常组比较大鼠的体重明显下降(P<0.05);造模后21天,模型组、针刺组与正常组比较大鼠体重显著下降(P<0.05),模型组与针刺组比较大鼠体重无明显差异(P>0.05),但模型组大鼠体重普遍低于针刺组;造模后28天模型组大鼠体重与正常组比较有非常显著的下降(P<0.01),针刺组与正常组比较虽大鼠体重普遍偏低但未见显著差异(P>0.05),模型组大鼠体重明显低于针刺组(P<0.05)。模型组大鼠经28天的慢性刺激体重逐渐下降,符合抑郁模型体重逐渐下降的要求;在造模14天模型组与针刺组大鼠体重未见明显差异,但因头穴丛刺治疗的干预实验后期针刺组大鼠体重明显高于模型组,提示头穴丛刺疗法可增加抑郁模型大鼠体重,且较长时间的治疗才会体现出疗效。

表1 各组大鼠体重增长情况 (±s,单位:g)

表1 各组大鼠体重增长情况 (±s,单位:g)

注:与正常组比较,*P<0.05;与针刺组比较,**P<0.05。

组别 n 实验前1天 第14天 第21天 第28天正常组 8 203.4±15.2 258.6±18.7 297.3±19.8 346.1±12.3模型组 8 205.1±14.9 231.5±11.2*255.6±12.8*287.7±10.4**针刺组 8 199.5±18.7 228.3±17.4*279.2±9.3*328.0±12.8

2.2 开野试验(Open-filed法)

见表2、3。予以应激刺激前各组大鼠的水平及垂直运动次数无显著差异(P>0.05)。在针刺治疗之前,与正常组相比,模型组与针刺组大鼠的水平及垂直运动次数明显减少,有非常显著性差异(P<0.05);针刺治疗后,针刺组的水平及垂直运动次数与模型组相比明显增加,有显著性差异(P<0.05),通过观察模型组大鼠水平及垂直运动次数逐渐减少说明随刺激的时间延长,大鼠的抑郁程度也在逐步加重,提示头穴丛刺疗法能增加抑郁模型大鼠的运动度及好奇度,具有防治抑郁的作用。

表2 Open-filed法测定各组大鼠水平运动情况 (±s,单位:次)

表2 Open-filed法测定各组大鼠水平运动情况 (±s,单位:次)

注:与正常组比较,*P>0.05;与针刺组比较,**P<0.05。

组别 n 实验前1天 第28天正常组862.4±9.2 55.9±10.4模型组 8 60.1±8.9* 21.7±6.5**针刺组 8 61.5±10.3*47.6±10.7

表3 Open-filed法测定各组大鼠垂直运动情况(±s,单位:次)

表3 Open-filed法测定各组大鼠垂直运动情况(±s,单位:次)

注:与正常组比较,*P>0.05;与针刺组比较,**P<0.05。

组别 n 实验前1天 第28天正常组818.7±6.5 16.1±5.6模型组 8 19.2±7.4* 8.2±4.7**针刺组 8 18.1±11.3*13.8±9.2

2.3 糖水消耗试验结果

表4 各组大鼠糖水消耗量情况 (±s,单位:ml/kg)

表4 各组大鼠糖水消耗量情况 (±s,单位:ml/kg)

注:与正常组比较,*P>0.05;与针刺组比较,**P<0.05。

组别 n 实验前1天 第14天 第21天 第28天正常组8 67.3±12.5 78.5±11.0 87.4±13.8 95.6±12.9模型组8 65.2±9.8* 67.1±8.5 72.1±6.8 76.4±8.5**针刺组 8 66.7±10.2*66.9±10.4 76.9±11.2 90.2±9.8

由表4可见,予以应激刺激前各组大鼠的糖水消耗量未见显著差异(P>0.05)。针刺治疗前,与正常组相比,模型组与针刺组的糖水消耗量明显降低,存在非常明显差异(P<0.05);针刺治疗后,针刺组的糖水消耗量明显高于模型组,具有显著性差异(P<0.05),提示头穴丛刺疗法能增加抑郁模型大鼠的糖水消耗量。

3 讨论

现代医学研究表明,长时间低强度的压力刺激是诱发抑郁症的主要病因,而应激事件则可以促发抑郁症,因此抑郁症的发生与情志不畅密切相关。

从临床表现来看,抑郁症病位在脑,脑为“元神”之府,脑神失调是抑郁症的主要病理因素,故健脑调神是针灸治疗抑郁症的关键。头穴丛刺疗法经多年临床验证具有良好的开窍养神的作用,本实验所取“百会”、“神庭”、“四神聪”为目前治疗抑郁症的临床常用腧穴[6],“百会”、“神庭”位于督脉[7],督脉总领一身之阳气,联系各脏腑,故针刺“百会”、“神庭”通过督脉调节全身机能,促脏腑功能恢复,“四神聪”为经外奇穴具有醒神开窍的作用,诸穴合用以调神醒脑。

本实验所建立的慢性轻度不可预见性应激抑郁模型(CUMS)就是利用实验大鼠受到长期、轻度、不可预见刺激,同时采用铃声提示的方式造成条件反射,增强大鼠恐惧感及不愉悦感,模拟人类的抑郁症病程,比较各组大鼠遭受应激刺激后体重、Open-field法测定垂直水平运动度、糖水消耗量变化。实验结果显示造模后14天模型组与针刺组无明显差异,大鼠体重增长缓慢,垂直水平运动度减少,糖水消耗量降低,说明大鼠活动度降低,好奇度减弱,食欲减退,快感缺乏,类似人类抑郁症的表现。造模后21天模型组与针刺组出现差异,造模后28天模型组与针刺组明显差异,提示头穴丛刺对大鼠抑郁状态有明显防治作用,治疗两周左右体现明显效果,但其作用机理还待进一步研究。

[1]郭克锋,关菊香.抑郁症患者的治疗难度预测性研究[J].现代康复,2001,5(8):48

[2]钟宝亮,黄悦勤,李会娟.针灸治疗抑郁症疗效和安全性的系统评价[J].中国心理卫生杂志,2008,22(9):641-647

[3]Murua VS,Gomez RA,Andrea ME,et al.Shuttle-box deficits induced by chronic variable stress:reversal by imipramine administration[J].Pharmacol Biochem Behav,1991,38(1):125-130

[4]李忠仁.实验针灸学[M].北京:中国中医药出版社,2003:327-329

[5]Katz R,Roth K,Carroll B.Acute and chronic stress effects on openfield activity in the rat:Implications for amodel of depression[J].Neurosci Biobehav Rev,1981,5:247

[6]胡方梅,崔友祥,程为平.程为平教授加强扬刺治疗抑郁证临床体会[J].针灸临床杂志,2010,26(3):58-60

[7]陈庆,庄子齐,龙伟芳.针刺百会、神庭、神门为主治疗抑郁症30例疗效观察[J].新中医,2007,39(8):64-65

Impact of Scalp Cluster-needling on Chronic Depression and Behavioral Changes for Rats

XU Bo-Jia,ZHENG Zu-yan,JIANG Peng,ZHANG Hai-fang
(The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin,150040,China)

Objective:To observe the head point cluster-needling for chronic unpredictable stress model in rats'behavioral changes,and to prove the head point cluster-needling for the treatment of depression.Methods:24 three-month-old male Wister rats were randomly divided into normal comparison group,model group,the head point cluster-needling group,eight rats in each group;with chronic unpredictable mild irritation with isolation to support law modeling,the model group and the head point cluster-needling group were given 14 days randomly different stress stimuli,followed by the head group of the cluster-needling acupuncture point treatment,choose“shenting”,“Baihui”and“Sishencong”,leaving the needle 20min,once a day for 14 days.One day before the experiment,experiment on the 14th day,21st day,28th day measured body weight,open-field test scoring and sugar consumption.Results:Modeling the model group and 14 days after the first hole cluster-needling group were body weight,sugar consumption was significantly lower than that in the control group(P<0.05);modeling models in rats 21 days after the body weight,sugar consumption was significantly lower than that in the control group(P<0.05),but the first hole only cluster-needling group was significantly lower than that in the normal weight control group(P<0.05)and sugar consumption,although lower than that in the control group but not significant(P>0.05);modeling the first 28 days rats body weight,vertical movement,horizontal movement,sugar consumption were significantly lower than those in the first hole cluster-needling group(P<0.05),the first point cluster-needling group and normal control group,no significant differences.Conclusion:The first hole cluster-needling for chronic unpredictable stress method of manufacturing support with isolated rat model of depression,behavioral changes has a therapeutic effect.

Head point cluster-needling;Chronic depression;Open-field test scoring;Sugar consumption experiment

徐博佳(1979-),女,主治医师,研究方向:针刺治疗抑郁症的机理研究。

R246.6

A

1005-0779(2012)006-0047-03

教育部“春晖计划”合作科研项目,编号:31 Y-43。

2011-12-13

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