HPLC法测定肠内营养乳剂中维生素C的含量

朱 虬，朱卫红

华瑞制药有限公司，江苏无锡 214092

维生素C（VC）及其制剂为临床常用药物，《中国药典》（2010年版）收载有维生素C原料药及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂[1]。原料及相应制剂中VC的含量测定方法有碘量法[2]、2，6—二氯靛酚滴定法、电位滴定法、荧光法、磷钼蓝分光光度法、紫外分光光度法、高效液相色谱法[3]等。肠内营养乳剂为含有VC及多种维生素、脂肪及蛋白质的复方制剂，营养乳剂中VC的含量测定方法未见报道，本研究用HPLC法测定肠内营养乳剂中VC的含量。

1 材料与试剂

仪器：Agilent1100 HPLC（四元泵，在线脱气机，带温控自动进样器，VWD检测器，化学工作站）。

VC对照品 （Sigma，批号：61K0001，纯度：100.3%）；肠内营养乳剂（瑞高TM，华瑞制药有限公司，批号：PLN336）；乙腈（Merck，色谱级）；磷酸二氢钾（分析级）。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Merck LiChrospher 100 NH2（250 mm× 4.0 mm，5 μm）；流动相：0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液－乙腈（27∶73），用盐酸调节pH为5.3；检测波长：254 mm；流速：1.5 mL·min-1；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备（临用新配）与测定 精密称取VC对照品约20 mg，用流动相溶解并定量稀释至5 μg·mL-1的溶液，量取20 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。见图1-A。

2.2.2 供试品溶液的制备与测定 精密称取新开启的肠内营养乳剂1.0 g，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。置2～8℃冰箱中放置半小时，用0.45 μm滤膜过滤，量取20 μL续滤液立即注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算。见图1-B。

图1 维生素C色谱图

2.3 专属性试验

2.3.1 VC空白样品的制备 除VC外，其余按乳剂处方量配制。

2.3.2 对照溶液的测定 按“2.2.1”配制VC对照品溶液并进样分析，记录VC色谱峰保留时间。

2.3.3 空白样品的测定 取VC空白样品，按“2.2.2”处理，进样分析。记录色谱图，观察在VC色谱峰位置有无干扰峰出现。

对照品溶液中VC色谱峰的保留时间为8.136 min，而空白溶液在此保留时间无色谱峰出现，说明方法没有干扰。

2.4 线性考察

2.4.1 线性测定溶液的制备 精密称定VC对照品20 mg，置200 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；分别精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，则VC浓度分别约为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μg·mL-1，相当于样品中VC标示量的90%～300%。

2.4.2 线性溶液的测定 取“2.2”各溶液进样分析，记录VC峰面积，以峰面积A为纵坐标，以VC浓度C为横坐标，求出回归方程：A＝18.38C－5.646，r＝0.9999。试验结果表明VC浓度在2.2868～7.5466 μg·mL-1和峰面积之间线性关系良好。

2.5 精密度试验

按“2.2.1”制备对照品溶液，按“2.2.2”制备供试品溶液（平行制备6份），进样分析，RSD＝0.52%，试验结果表明方法精密度良好。

2.6 回收率试验

精密称取VC对照品100 mg，加流动相溶解并定量稀释成100 μg·mL-1的溶液；精密称取“2.3.1”VC空白样品1.0 g，分别加入上述溶液0.44 mL、0.55 mL、1.1 mL（分别相当于样品中VC标示量的80%、100%、200%），再按“2.2.2”制备供试品溶液，每个浓度平行制备3份。

分别进样对照品溶液和9份回收率试验溶液，计算得平均回收率100.3%，RSD=1.11%，见表1。

2.7 样品含量测定

按“2.2.1”制备对照品溶液，按“2.2.2”制备供试品溶液（平行制备6份），进样分析，计算供试品中VC的含量。实验表明测定结果均符合规定，见表2。

表1 样品含量测定结果（n=6）

表2 样品含量测定结果（n=6）

3 讨 论

本方法的专属性试验、线性试验、精密度试验、回收率试验均表明方法准确、可靠。

由于VC本身有较强的还原性，容易被氧化，故对照品溶液需要新鲜配制，供试品溶液的制备也要采用未开启的样品，操作时要尽量快速，避免长久暴露于空气中。

本实验方法操作简便、快速，可操作性强，适于肠内营养乳剂中VC含量的质量控制。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 刘文英.药物分析[M].第6版.北京：人民卫生出版社，2009：265-6.

[3] 陈再洁，郑建明，王 智.高效液相色谱法测定维生素C片中VC含量[J].分析仪器，2008（6）：37-9.