白背叶黄酮类化学成分研究

韦 松 曲 磊 郑作文

（广西中医学院，广西 南宁 530001）

白背叶为大戟科野桐属植物白背叶Mallotus apelta(Lour.)Muell.-Arg.的干燥叶［1］，又名白鹤叶、白面戟、白面风、白桃叶、白膜树。广泛分布于广西、河南、安徽、浙江、江西、湖南、广东、海南等省区。味微苦、涩、平。白背叶的根、茎、叶入药。白背叶的药理作用主要表现为止血、抑菌、抗肝纤维化、抗癌等作用［2］。前期研究发现白背叶所含的总黄酮和洋芹素对人肝癌和人胃癌细胞的增殖均有显著抑制作用［3-6］。本实验对白背叶的黄酮类化学成分进行了系统的分离，以期得到新的抗癌活性成分。

1 材料和仪器

XT4-100A型显微熔点测定仪(温度未校正)，BRUKER TENSOR27 FT-IR；Finnigan Trace DSQ四级杆质谱仪；BRUKER Drx-500MHz、BRUKER AV-400MHz核磁共振波谱仪；柱层析和薄层层析硅胶均为青岛海洋化工厂分厂生产；聚酰胺粉为浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂生产；AB-8大孔吸附树脂为天津市光复精细化工研究所产品；反相硅胶C-18为YMC公司产品；Sephadex LH-20为通用公司产品；所用试剂均为分析纯；所用药材由广西中医学院药用植物教研室韦松基教授鉴定。对照品由中药化学教研室提供。

2 提取与分离

白背叶的叶阴干后粉碎得粉末5 kg，用三倍量70%乙醇加热回流提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏275 g。将浸膏混悬分散于2000 mL水中，分别用石油醚(60～90℃)、乙酸乙酯和正丁醇萃取，各部分减压浓缩，得到石油醚部位28 g，乙酸乙酯部位43 g，正丁醇部位46 g。

乙酸乙酯部位用硅胶柱分离，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱，再经硅胶、聚酰胺、ODS和Sephadex LH-20等柱层析进一步分离，得到化合物1～4。正丁醇部位进行大孔树脂柱层析，以水-甲醇梯度洗脱，再经硅胶、聚酰胺、ODS、Sephadex LH-20等柱层析进一步分离，得到化合物5和化合物6。

3 结构鉴定

化合物1:淡黄色粉末(MeOH)，mp 343～345℃，盐酸-镁粉反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。IR(KBr)cm－1:3300(OH)，1660(C=O)，1600，1500(芳环)，820(芳香邻二氢)。与洋芹素对照品共TLC，在3种展开系统下其Rf值完全一致，且混合熔点不下降。Rf值和IR(KBr)vmax均与文献［7］报道对照品Apigenin的数据一致，故鉴定化合物1为Apigenin即洋芹素。

化合物2:淡黄色粉末(MeOH-H2O)，mp 226～228℃，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。IR(KBr)cm－1:3432(OH)，1652(C=O)，1612，1596，1502，1445(芳环)。与洋芹苷对照品共TLC，在3种展开系统下其Rf值完全一致，且混合熔点不下降。Rf值和IR(KBr)Vmax均与文献［8］报道对照品 Apigenin-7-O-β-D-glucoside即洋芹苷的数据一致，故鉴定化合物2为洋芹苷。

化合物3:淡黄色粉末(MeOH-H2O)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。EI-MS m/z:270［M］+，为黄酮苷失去糖支链的相对分子质量。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.95(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，6.85(1H，S，H-3)，6.42(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，12.95(1H，brs，5-OH)，5.09 ～3.26为葡萄糖上的氢信号，2.15(3H，S，-CH3)。13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:164.3(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，161.4(C-5)，99.6(C-6)，162.7(C-7)，94.8(C-8)，156.9(C-9)，105.2(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，76.2(C-3″)，69.8(C-4″)，73.9(C-5″)，63.4(C-6″)。170.2(C=O)，20.6(-CO-CH3)(端甲基)。以上数据与文献［9］报道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucoside一致，故鉴定化合物3为Apigenin-7-O-β-D-(6″-O-acetyl)-glucosid 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-O-乙酰基)-葡萄糖苷。

化合物4:淡黄色粉末(MeOH-H2O)，盐酸-镁粉反应呈阳性，Molish反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。EI-MS m/z:414［M-p-coumaryl］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:7.94(2H，d，J=8.5 Hz，H-2'，H-6')，6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3'，H-5')，7.91(2H，d，J=8.3 Hz，H-2‴，H-6‴)，6.90(2H，d，J=8.3Hz，H-3‴，H-5‴)，6.80(1H，S，H-3)，6.40(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，13.00(1H，brs，5-OH)，7.45(1H，d，J=15.5 Hz，H-7‴)，6.32(1H，d，J=15.5 Hz，H-8‴)，4.48～3.14为葡萄糖上的氢信号。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:162.7(C-2)，103.1(C-3)，182.0(C-4)，156.9(C-5)，99.4(C-6)，164.3(C-7)，94.7(C-8)，161.4(C-9)，105.4(C-10)，121.0(C-1')，128.6(C-2')，116.0(C-3')，161.2(C-4')，116.0(C-5')，128.6(C-6')，99.5(C-1″)，73.0(C-2″)，73.8(C-3″)，70.0(C-4″)，76.2(C-5″)，63.4(C-6″)，124.9(C-1‴)，130.2(C-2‴)，115.7(C-3‴)，159.8(C-4‴)，115.7(C-5‴)，130.2(C-6‴)，145.0(C-7‴)，113.7(C-8‴)，166.5(C-9‴)。以上数据与文献［10］报道 Apigenin-7-O-β-D-(6″-p-coumaryl)-glucoside 即芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-对-香豆酰基)-葡萄糖苷一致，故鉴定化合物4为芹菜素-7-O-β-D-(6″-反式-对-香豆酰基)-葡萄糖苷。

化合物5:淡黄色粉末(MeOH-H2O)，盐酸-镁粉反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。ESI-MS m/z:594［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，H-6')，6.99(2H，d，J=8.6 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.70(1H，brs，5-OH)；5.03～3.29为两个葡萄糖上的氢信号。13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δ:164.1(C-2)，102.6(C-3)，182.3(C-4)，158.7(C-5)，107.6(C-6)，161.3(C-7)，105.3(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.6(C-1')，129.1(C-2')，115.9(C-3')，161.2(C-4')，115.9(C-5')，129.1(C-6')，71.0(C-1″)，72.0(C-2″)，77.9(C-3″)，69.1(C-4″)，81.9(C-5″)，59.9(C-6″)，73.4(C-1‴)，71.0(C-2‴)，78.9(C-3‴)，70.6(C-4‴)，80.9(C-5‴)，61.3(C-6‴)。以上数据与文献［11］报道Vicenin 2一致，故鉴定化合物5为Vicenin 2。

化合物6 淡黄色粉末(MeOH-H2O)，盐酸-镁粉反应呈阳性，三氯化铁乙醇溶液显暗紫色。ESIMS m/z:564［M］+。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:8.00(2H，d，J=8.5 Hz H-2'，H-6')，6.88(2H，d，J=8.5 Hz H-3'，H-5')，6.75(1H，S，H-3)，13.8(1H，brs，5-OH)，5.05 ～2.49为两个糖上的氢信号。13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:163.6(C-2)，103.7(C-3)，182.0(C-4)，158.7(C-5)，108.3(C-6)，161.1(C-7)，103.7(C-8)，155.2(C-9)，103.7(C-10)，121.9(C-1')，129.1(C-2')，116.0(C-3')，161.1(C-4')，116.0(C-5')，129.1(C-6')，74.2(C-1″)，70.0(C-2″)，75.1(C-3″)，70.1(C-4″)，71.2(C-5″)，74.6(C-1‴)，70.7(C-2‴)，73.5(C-3‴)，70.1(C-4‴)，81.3(C-5‴)，61.4(C-6‴)。以上数据与文献［12］报道Corymboside一致，故鉴定化合物6为Corymboside。

［1］南京药学院，《中草药学》编写组.中草药学［M］.南京:江苏人民出版社，1976:591.

［2］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海:上海人民出版社，1977:731.

［3］郑作文，伦玉宁，毛 健，等.白背叶提取物A对人肿瘤细胞增殖的抑制作用［J］.时珍国医国药，2009，20(12):3029-3030.

［4］夏 星，郑作文，谭 为，等.白背叶提取物WF对2215细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响研究［J］.时珍国医国药，2010，21(3):631-632.

［5］夏 星，郑作文，谭 为，等.白背叶黄酮类化合物抗鸭乙型肝炎病毒活性研究［J］.中国药房，2010，21(7):590-592.

［6］伦玉宁，郑作文，邹 静，等.白背叶提取物A的体外抗肿瘤活性研究［J］.时珍国医国药，2011，22(1):30-31.

［7］王乃丽，向玉霞，凡峥嵘，等.蒙古山萝卜活性成分的研究［J］.中草药，1989，20(6):7.

［8］吴桂凡，韦 松，兰树彬，等.白背叶中一个新的异戊烯基二氢黄酮［J］.中草药，2006，37(8):1126-1127.

［9］Redaelli C，Formentini L，Santaniello E.Apigenin 7-glucoside and its 2″-and 6″-acetates from ligulate flowers of Matricaria chamomilla［J］.Phytochemistry，1980，19(5):985-986.

［10］Itokawa H，Suto K，Takeya K.Studies on a novel p-coumaroyl glucoside of apigenin and on other flavonoids isolated from patchouli(labiatae)［J］.Chem Pharmace Bull，1981，29(1):254-256.

［11］黄 琼，陈丽芬，林翠梧，等.药用植物战骨中黄酮类化学成分及抗氧化作用研究［J］.时珍国医国药，2009，20(11):2707.

［12］Besson E，Dombris A，Raynaud J，et al.Corymboside，nouvelle di-C-gl ycosylflavone des Racines de carline corymbosa［J］.Phytochemistry，1979，18:1899-1900.