组胺H4受体基因多态性与结肠癌的相关性

王红珊 李国豪 曹毅敏 林美仪 关爱萍 臧林泉 (广州市第一人民医院，广东 广州 5080)

组胺是由L-组氨酸脱羧而成的一种广泛分布于人体组织中的生物胺，其生理功能主要通过其受体发挥。目前发现的组胺受体主要有H1、H2、H3和H4，这四种受体在表达、信号转导及其生理功能等方面均存着明显不同。而其中H4受体作为最新发现的一种亚型，目前在国内外临床上受到高度关注〔1〕。本文旨在探讨其基因多态性与结肠癌的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我科2006年1月至2010年1月收治的65例结肠癌患者，其中男38例，女27例，年龄41～72〔平均(52.3±6.5)〕岁;所有患者均经病理检查确诊，根据 WHO 2000年大肠肿瘤组织学分级标准，18例为高分化腺癌、25例为中分化腺癌、22例为低分化腺癌。

1.2 方法

1.2.1 标本收集与总RNA测定 取65例患者的结肠肿瘤标本(肿瘤组)及距肿瘤组织至少5 cm以上的正常结肠组织标本(癌旁组)，同时取65例无结肠癌患者的正常结肠组织作为正常组。将取出的组织立即置入液氮中，然后再转至超低冰箱(－70℃)内保存待用。采用 Trizol法提取标本内总 RNA，取3 μl置入琼脂糖凝胶(1.0%)内，进行总 RNA 质量的鉴定〔2〕，然后采用紫外分光仪对总RNA的浓度和纯度分别进行测定，其他RNA继续放回超低冰箱内保存。

1.2.2 RNA分析 对测定的结果进行分析，定性:对RNA质量采用1.5%的琼脂糖凝胶电泳分析，根据有无明显rRNA区带及Smear样染色进行定性判断。定量:根据紫外分光光度计的测定结果进行判断，1.8＜A260/280＜2.0视为纯度很高。

1.2.3 合成cDNA第一链 先将EP管用DEPC浸泡，然后将2 μl总RNA溶液置入，先在70℃条件下孵育10 min，再转放在冰上，分别按要求加入氯化镁溶液、逆转录缓冲液、RNA酶抑制剂等溶液适量〔3〕，将最终溶液离心数秒，依次孵育(42℃)、水浴(95℃)后置入－20℃冰箱储存备用。

1.2.4 PCR反应 参照基因选择磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因，将合成的cDNA为模板，在DNA聚合酶和上下引物作用下进行PCR扩增，反应温度为95℃，5 min，每份标本在相同条件下操作3次，扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳分析，电泳结束后，取出凝胶置入暗箱式紫外投射仪下进行仔细观察并记录，然后借助凝胶成像分析系统对每条DNA条带的A值进行检测，目的基因相对含量为目工基因A值与GAPDH的A值之比。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行分析，数据资料以±s表示，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验。

2 结果

所有标本总RNA抽提质量可靠，所有待检标本以GAPDH基因作为参照，均为阳性表达，结果显示RT-PCR特异性高。肿瘤组与癌旁组H4受体mRNA基因表达量(0.3954±0.0428 vs 0.5369±0.0582)比较(t=26.65，P ＜0.05)，癌旁组与正常组(0.6209±0.0782)比较(t=11.34，P ＜0.05)，肿瘤组与正常组比较(t=42.27，P＜0.05)，三组差异均有统计学意义。经Q检验，肿瘤组、癌旁组及正常组结肠组胺H4受体mRNA表达呈逐级递增趋势(P＜0.05)。

3 讨论

组胺H4受体是一种由390个氨基酸残基组成的G蛋白耦联受体，与H3受体具有高达37% ～43%的同源性〔4〕，且其中跨膜区域同源性更高，定位于人类18号染色体。对于组胺H4受体的研究表明，它具有独特的药理学特点及特殊的组织学分布，与其他三种受体不同，更多见于外周组织，而且高度表达于炎症反应组织器官及造血细胞中〔5〕，它的这种独特性可能与其参与免疫调节及造血等生理功能有关，但这仅仅是在组胺H4受体发现后的一种初步研究结果。

长期以来人们对组胺H1受体和组胺H2受体研究较多，而且临床上已研究出多种这两种受体拮抗剂，而且已广泛用于临床。随着2000年受体组胺H4受体的发现及近些年分子克隆技术的发展，关于组胺H4受体的研究取得了许多新的突破和进展。国外有学者采用RT-PCR方法也证实了外周组织中存在组胺H4受体mRNA的表达，而且研究结果还表明其在免疫组织、免疫器官及造血干细胞、骨髓、脾肺等外周造血器官内优先表达，且呈高度表达状态〔6〕。目前许多关于组胺H4受体与变应鼻炎的研究结果也证实，在鼻炎患者中这种组胺H4受体表达明显增加〔7〕。而且，组胺H4受体在肝癌组织表达明显高于癌旁组织，许多临床专家便推测组胺H4受体在癌症、过敏反应等疾病的发生发展中有重要作用〔8〕。

本研究结果提示，在结肠癌组织中组胺H4受体的mRNA表达降低，使组胺H4受体的免疫应答能力降低，促进了结肠癌的发生及发展。

1 Zhang M，Venable JD，Thurmond RL.The histamine H4 receptor in autoimmune disease〔J〕.Exprt Opin Investig Drugs，2006;15(11):1443-52.

2 王红珊，臧林泉，潘雪刁.人原发性肝癌组织中组胺H4受体基因表达和意义〔J〕.广东药学院学报，2007;23(1):67-70.

3 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会，中华医学会耳鼻咽喉科分会.变应性鼻炎的诊治原则和推荐方案(2004年，兰州)〔J〕.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2005;40(3):166-7.

4 王红珊，王乃平，周宏灏.新型组胺受体:组胺H4受体〔J〕.中国药理学通报，2004;20(7):731-4.

5 张孟贤，于世英.趋化性细胞因子受体CXCR4在大肠癌的表达及其临床意义〔J〕.世界华人消化杂志，2007;15(7):772-6.

6 燕志强，张 俊，李得本，等.变应性鼻炎患者鼻黏膜中组胺H4受体的差异性表达〔J〕.临床耳鼻咽喉头颈外科杂志，2010;24(20):928-30.

7 闫庆辉，张国建，任鹏涛，等.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体DR4在大肠癌的表达及意义〔J〕.世界华人消化杂志，2006;14(3):332-5.

8 Godot V，Arock M，Garcia G，et al.H4 histamine receptor mediates optimal migration of mast cell precursors to CXCL12〔J〕.J Allergy Clin Immunol，2007;120(4):827-34.