厚蜂窝菌的化学成分研究

杜子伟， 刘劲松， 吴培云， 何其伟， 项 晨， 王 刚

(安徽中医学院药学院现代中药安徽省重点实验室，安徽合肥230031)

厚蜂窝菌Hexagonia speciosa为多孔菌科Polyporaceae蜂窝菌属Hexagonia高等真菌，菌盖扇形至贝壳型，淡黄褐色，菌肉淡黄色，薄，无味道，生于阔叶树的腐木上，主要分布于广东、云南等地［1］。蒋孟圆曾从该种真菌发酵液中共分离得到28个不同化合物，其中21个为新化合物。这些新化合物都是高度氧化的环乙烷类化合物，其中化合物speciosin B显示有显著的细胞毒活性［2-3］。为了进一步研究厚蜂窝菌的化学成分，本实验通过改变厚蜂窝菌的发酵条件，对其发酵液进行了系统的化学成分研究，从其乙酸乙酯提取物中分离得到11个已知化合物，经波谱解析分别鉴定为:角鲨烯 (1)、9(Z)-十八烷烯酸 (2)、麦角甾-4，6，8(14)，22-四烯-3-酮 (3)、麦角甾-5，7，22-三烯-3β-醇 (4)、过氧麦角甾醇 (5)、麦角甾-6β-甲氧基-7，22-二烯-3β，5α-二醇 (6)、麦角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇 (7)、8，14-环氧麦角甾-4，22-二烯-3，6-二酮 (8)、麦角甾-3β，5α，9α-三羟基-7，22-二烯-6-酮 (9)、2，2-二甲基-1-苯并吡喃-6-醇 (10)、2-呋喃甲酸 (11)。

1 仪器与材料

四川大学科学仪器厂生产的XRC—1型显微熔点仪，温度计未校正;VG AutoSpec—3000质谱仪;Bruker AV—400和DRX—500核磁共振仪，内标为TMS，其中1H NMR在400 MHz和500 MHz下测定，13C NMR在100 MHz和125 MHz下测定;分析型和制备型HPLC为Agilent 1100 HPLC，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18和YMC柱;柱层析硅胶(80～100目和200～300目)以及GF254薄层硅胶板均为青岛海洋化工厂生产;

反相材料 Lichroprep Rp-18(40～63 μm)为Merk公司产品;Sephadex LH-20为瑞典Amersham Biosciences公司产品;显色方法为荧光灯下波长254nm和365nm处观察荧光，10%硫酸乙醇溶液和硫酸香草醛处理后加热显色及碘蒸气显色。

厚蜂窝菌Hexagonia speciosa于2007年7月份采集于云南高黎贡山，由昆明植物所杨祝良研究员鉴定，标本存于昆明植物研究所标本馆。

2 培养与发酵

由昆明植物研究所李正辉博士培养发酵。培养基:葡萄糖5%，猪肉蛋白胨0.15%，酵母粉0.5%，KH2PO4和 MgSO4各0.05%。发酵条件:温度24℃，初始pH 6.0，转速250 r/min，每分钟通气量与罐体实际料液体积的比值为1.0，接种体积10%(V/V)，种子罐发酵6 d，当菌丝生物量最大时转入100 L发酵罐发酵培养20 d。发酵液总量为63 L。

3 提取与分离

厚蜂窝菌发酵液 (63 L)用乙酸乙酯萃取3次，合并减压蒸干得25 g粗提物，经硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇 (100∶0→0∶100)梯度洗脱得6个部分 (A、B、C、D、E、F)。A经石油醚-乙酸乙酯 (100∶2→0∶100)梯度洗脱，再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯 (10∶1)洗脱得到化合物1(4.5 mg)。B经石油醚-乙酸乙酯 (100∶5→0∶100)梯度洗脱得5个亚组分，其中B1经Sephadex LH-20柱层析，以三氯甲烷-甲醇 (1∶1)洗脱，再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯 (30∶1)洗脱得到化合物2(411 mg);B2经Sephadex LH-20柱层析，以三氯甲烷-甲醇 (1∶1)洗脱得化合物3(308 mg);B3经反相RP-18，用甲醇-水 (90∶10→0∶100)梯度洗脱得化合物4(235 mg)和化合物5(300 mg);B5经过硅胶柱层析，以三氯甲烷-丙酮(50∶1)洗脱得到化合物6(17 mg)和化合物7(10 mg)。C经Sephadex LH-20柱层析，以三氯甲烷-甲醇 (1∶1)洗脱得3个亚组分，其中C1经反相RP-18，用甲醇-水 (70∶30→0∶100)梯度洗脱，再经硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯 (5∶1)洗脱得到化合物8(6 mg)和化合物9(7 mg);C2经硅胶柱层析，三氯甲烷-丙酮 (30∶1)洗脱得到化合物9(4.5 mg);E经过硅胶柱层析，用石油醚-丙酮 (100∶10→0∶100)梯度洗脱，再经石油醚-乙酸乙酯 (2∶1)洗脱得化合物11(44 mg)。

4 化学结构及鉴定

化合物1:C30H50，无色透明油状液体。FABMS m/z:411.3 ［M+H］+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.08～5.15(6H，m，H-3，H-7，H-11，H-14，H-18 and H-22)，1.96～2.11(20H，m，H-4，H-5，H-8，H-9，H-12，H-13，H-16，H-17，H-20 and H-21)，1.68(6H，s，H-1 and H-24)，1.60(18H，s，2-CH3，6-CH3，10-CH3，15-CH3，19-CH3and 23-CH3)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz) δ:135.0(s，C-6 and C-19)，134.8(s，C-10 and C-15)，131.1(s，C-2 and C-23)，124.4(d，C-3 and C-22)，124.3(d，C-7，C-11，C-14 and C-18)，39.7(t，C-5，C-9，C-16 and C-20)，28.3(t，C-12 and C-13)，26.8(t，C-4，C-8，C-17 and C-21)，25.6(q，C-1 and C-24)，17.6(q，2-CH3and 23-CH3)，16.0(q，6-CH3，10-CH3，15-CH3and 19-CH3)。以上波谱数据与文献［4］数据报道一致，确定该化合物为角鲨烯。

化合物2:C18H34O2，白色油状物。EI-MS m/z(%):282 ［M］+(27)，264(50)，256(36)，111(47)，97(70)，83(74)，69(80)，57(70)，55(100)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.34(2H，m，H-9 and H-10)，2.34(2H，t，J=7.5 Hz，H-2)，2.04(4H，m，H-8 and H-11)，1.61(2H，m，H-3)，1.20～1.35(m，H-4～H-7 and H-12～H-17)，0.89(3H，t，J=6.8 Hz，H-18)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:180.6(s，C-1)，130.0(d，C-10)，129.7(d，C-9)，34.1(t，C-2)，31.9(t，C-16)，29.0～29.7(t，C-4～C-7 and C-12～C-15)，27.2(t，C-8 and C-11)，24.6(t，C-3)，22.7(t，C-17)，14.1(q，C-18)。以上波谱数据与文献［5］数据报道一致，确定该化合物为9(Z)-十八烷烯酸。

化合物3:C28H40O，浅黄色晶体。mp 112～114℃。EI-MS m/z(%):392［M］+(15)，377(3)，349(4)，268(100)，253(30)，214(26)，173(23)，69(47)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.58(1H，d，J=9.4 Hz，H-7)，6.00(1H，d，J=9.4 Hz，H-6)，5.70(1H，s，H-4)，5.24(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-23)，5.18(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-22)，1.21～2.53(18H，m，甾体母核)，1.03(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.97(3H，s，H-19)，0.93(3H，s，H-18)，0.90(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.78(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:199.3(s，C-3)，164.2(s，C-5)，156.0(s，C-14)，135.0(d，C-22)，133.9(d，C-7)，132.6(d，C-23)，124.5(d，C-6)，124.3(s，C-8)，123.0(d，C-4)，55.8(d，C-17)，44.0(d，C-9)，44.0(s，C-13)，42.9(d，C-24)，39.2(d，C-20)，36.8(s，C-10)，35.7(t，C-15)，34.2(t，C-12)，34.1(t，C-1)，33.1(d，C-25)，27.7(t，C-16)，25.4(t，C-11)，21.2(q，C-21)，20.0(q，C-27)，19.7(q，C-26)，19.0(t，C-2)，18.9(q，C-19)，17.6(q，C-28)，16.7(q，C-18)。以上波谱数据与文献［6］数据报道一致，确定该化合物为麦角甾-4，6，8(14)，22-四烯-3-酮。

化合物4:C28H44O，白色晶体。mp 152～154℃。EI-MS m/z(%):396［M］+(55)，363(61)，337(40)，271(17)，253(48)，211(37)，197(28)，185(23)，171(30)，157(55)，143(57)，131(27)，119(30)，91(28)，81(27)，69(100)，55(56)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.58(1H，m，H-6)，5.38(1H，m，H-7)，5.14～5.26(2H，m，H-22 and H-23)，3.60(1H，m，H-3)，1.03(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.95(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)， 0.61(3H， s， H-18)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:141.3(s，C-8)，139.8(s，C-5)，135.6(d，C-22)，132.1(d，C-23)，119.6(d，C-6)，116.4(d，C-7)，70.5(d，C-3)，55.9(d，C-17)，54.6(d，C-14)，46.4(d，C-9)，42.9(s，C-13)，40.8(d，C-24)，40.9(t，C-4)，40.4(d，C-20)，39.2(t，C-12)，38.4(t，C-1)，37.1(s，C-10)，33.1(d，C-25)，32.1(t，C-2)，28.3(t，C-16)，23.0(t，C-15)，21.2(t，C-11)，21.2(q，C-21)，19.9(q，C-26)，19.7(q，C-27)，17.6(q，C-28)，16.3(q，C-19)，12.1(q，C-18)。以上波谱数据与文献［7］数据报道一致，确定该化合物为麦角甾-5，7，22-三烯-3β-醇。

化合物5:C28H44O3，无色针晶。mp 177～178℃。EI-MS m/z(%):428［M］+(10)，410(4)，396(100)，363(35)，271(7)，255(37)，251(14)，152(30)，107(22)，69(63)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz):δ:6.50(1H，d，J=8.4 Hz，H-7)，6.24(1H，d，J=8.4 Hz，H-6)，5.22(1H，dd，J=15.2，7.4 Hz，H-22)，5.13(1H，dd，J=15.2，7.4 Hz，H-23)，3.97(1H，m，H-3)，0.99(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.90(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.88(3H，s，H-19)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.82(3H，s，H-18)，0.80(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz):δ:135.4(d，C-6)，135.2(d，C-22)，132.3(d，C-23)，130.7(d，C-7)，82.1(s，C-5)，79.4(s，C-8)，66.4(d，C-3)，56.2(d，C-17)，51.6(d，C-14)，51.0(d，C-9)，44.5(s，C-13)，42.7(d，C-24)，39.7(d，C-20)，39.3(t，C-12)，36.9(t，C-4)，36.9(s，C-10)，34.7(t，C-1)，33.0(d，C-25)，30.1(t，C-2)，28.6(t，C-15)，23.4(t，C-11)，20.8(q，C-21)，20.6(t，C-16)，19.9(q，C-27)，19.6(q，C-26)，18.1(q，C-19)，17.5(q，C-28)，12.8(q，C-18)。以上波谱数据与文献［8］数据报道一致，确定该化合物为过氧麦角甾醇。

化合物 6:C29H48O3，白色粉末。EI-MS m/z(%):444 ［M］+(6)，426(80)，411(26)，393(40)，377(100)，301(11)，269(32)，251(76)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:5.41(1H，brd，J=5.0 Hz，H-7)，5.13～5.25(2H，m，H-22 and H-23)，4.05(1H，m，H-3)，3.39(3H，s，6-OCH3)，3.17(1H，brd，J=4.7 Hz，H-6)，1.03(3H，d，J=6.5 Hz，H-21)，1.00(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J=6.5 Hz，H-28)，0.84(3H，d，J=6.5 Hz，H-27)，0.82(3H，d，J=6.5 Hz，H-26)，0.60(3H，s，H-18)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:143.6(s，C-8)，135.5(d，C-22)，132.0(d，C-23)，114.9(d，C-7)，82.5(d，C-6)，76.4(s，C-5)，67.8(d，C-3)，58.4(q，6-OCH3)，55.9(d，C-17)，54.9(d，C-14)，43.8(d，C-9)，43.8(s，C-13)，42.8(d，C-24)，40.4(d，C-20)，39.5(t，C-4)，39.3(t，C-12)，37.2(s，C-10)，33.0(d，C-25)，32.7(t，C-1)，30.8(t，C-2)，27.9(t，C-16)，22.8(t，C-15)，22.2(t，C-11)，21.1(q，C-21)，19.8(q，C-26)，19.6(q，C-27)，18.5(q，C-19)，17.6(q，C-28)，12.3(q，C-18)。以上波谱数据与文献［9］数据报道一致，确定该化合物为麦角甾-6β-甲氧基-7，22-二烯-3β，5α-二醇。

化合物7:C28H46O3，白色粉末。mp 224～226℃。EI-MS m/z(%):430［M］+(35)，412(35)，394(37)，379(65)，376(15)，269(33)，251(62)，69(100)。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ:5.74(1H，brs，H-7)，5.24(1H，dd，J=15.2，7.4 Hz，H-23)，5.16(1H，dd，J=15.2，7.4 Hz，H-22)，4.84(1H，m，H-3)，4.32(1H，brd，J=4.8 Hz，H-6)，1.53(3H，s，H-19)，1.07(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.94(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.85(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.84(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.67(3H，s，H-18)。13CNMR(C5D5N，100 MHz)δ:141.6(s，C-8)，136.2(d，C-22)，132.5(d，C-23)，120.4(d，C-7)，76.5(s，C-5)，74.3(d，C-6)，67.6(d，C-3)，56.5(d，C-17)，55.2(d，C-14)，43.9(s，C-13)，43.8(d，C-9)，43.0(d，C-24)，42.0(t，C-4)，40.7(d，C-20)，40.1(t，C-12)，38.1(s，C-10)，33.8(t，C-1)，33.1(d，C-25)，32.6(t，C-2)，28.2(t，C-16)，23.5(t，C-15)，22.4(t，C-11)，21.3(q，C-21)，20.1(q，C-27)，19.9(q，C-26)，18.8(q，C-19)，17.6(q，C-28)，12.3(q，C-18)。以上波谱数据与文献［10］数据报道一致，确定该化合物为麦角甾-7，22-二烯-3β，5α，6β-三醇。

化合物 8:C28H40O3，白色粉末，EI-MS m/z(%):424［M］+(20)，409(5)，396(5)，381(5)，327(5)，300(5)，285(15)，257(10)，229(30)，189(10)，175(5)，150(15)，137(30)，109(25)，69(100)，55(65)。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ:6.35(1H，s，H-4)，5.22 ～ 5.30(2H，m，H-22 and H-23)，2.80(1H，t，J=8.9 Hz，H-9)，2.63(1H，d，J=16.7 Hz，H-7a)，2.48(1H，d，J=16.7 Hz，H-7b)，2.02～2.04(2H，m，H-1)，1.86～1.89(1H，m，H-24)，1.25(3H，s，H-19)，1.08(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.98(3H，s，H-18)，0.91(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.81(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)。13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ:216.0(s，C-6)，200.0(s，C-3)，157.4(s，C-5)，135.4(d，C-22)，132.6(d，C-23)，126.8(d，C-4)，71.5(s，C-8)，62.5(s，C-14)，54.2(s，C-13)，49.8(d，C-9)，49.6(d，C-17)，43.5(d，C-24)，41.2(t，C-7)，39.9(s，C-10)，39.2(t，C-1)，38.7(t，C-15)，38.1(t，C-2)，37.5(d，C-20)，34.6(t，C-16)，33.3(d，C-25)，25.3(t，C-11)，24.2(q，C-19)，23.8(q，C-21)，23.4(t，C-12)，20.2(q，C-27)，19.9(q，C-26)，17.8(q，C-28)，17.3(q，C-18)。以上波谱数据与文献［11］数据报道一致，确定该化合物为8，14-环氧麦角甾-4，22-二烯-3，6-二酮。

化合物9:C28H44O4，白色粉末。EI-MS m/z(%):444［M］+(2)，410(4)，392(5)，377(4)，363(3)，316(13)，283(6)，267(17)，251(15)，215(11)，187(16)，173(15)，161(18)，143(22)，125(19)，109(25)，95(28)，81(42)，69(100)，55(80)。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ:5.93(1H，brs，H-7)，5.26(1H，dd，J=15.2，7.9 Hz，H-23)，5.19(1H，dd，J=15.2，7.9 Hz，H-22)，4.62(1H，m，H-3)，1.15(3H，s，H-19)，1.05(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.96(3H，d，J=6.8 Hz，H-28)，0.86(3H，d，J=6.8 Hz，H-27)，0.85(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.64(3H，s，H-18)。13C-NMR(C5D5N，100 MHz)δ:199.1(s，C-6)，164.1(s，C-8)，136.2(d，C-22)，132.5(d，C-23)，120.3(d，C-7)，79.8(s，C-5)，75.1(s，C-9)，66.8(d，C-3)，56.2(d，C-17)，52.0(d，C-14)，45.4(s，C-13)，43.1(d，C-24)，42.3(s，C-10)，40.6(d，C-20)，38.1(t，C-4)，35.5(t，C-12)，33.4(d，C-25)，31.5(t，C-2)，29.0(t，C-11)，28.4(t，C-16)，26.4(t，C-1)，22.8(t，C-15)，21.3(q，C-21)，20.4(q，C-19)，20.2(q，C-27)，19.9(q，C-26)，17.9(q，C-28)，12.4(q，C-18)。以上波谱数据与文献［12］数据报道一致，确定该化合物为麦角甾-3β，5α，9α-三羟基-7，22-二烯-6-酮。

化合物10:C11H12O2，棕黄色无定形粉末，mp 86～87℃。ESI-MS m/z:353［2M+H］，177［M+H］。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:6.65(1H，d，J=8.6 Hz，H-8)，6.58(1H，dd，J=8.6，2.9 Hz，H-7)，6.49(1H，d，J=2.9 Hz，H-5)，6.25(1H，d，J=9.8 Hz，H-4)，5.64(1H，d，J=9.8 Hz，H-3)，1.41(6H， s， 2-2CH3)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:149.4(s，C-6)，146.7(s，C-9)，131.9(d，C-3)，122.1(d，C-4)，122.0(s，C-10)，116.9(d，C-8)，115.4(d，C-7)，112.8(d，C-5)，75.8(s，C-2)，27.5(q，2-2CH3)。以上波谱数据与文献［13］数据报道一致，确定该化合物为2，2-二甲基-1-苯并吡喃-6-醇。

化合物 11:C5H4O3，白色晶体，mp 210～211℃。EI-MS m/z(%):112［M］+(100)，95(75)，55(6)，39(47)，38(14)，37(8)，29(8)。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ:7.66(1H，d，J=1.7 Hz，H-5)，7.35(1H，d，J=3.4 Hz，H-3)，6.58(1H，dd，J=3.4，1.6 Hz，H-4)。13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ:163.4(s，2-COOH)，147.4(d，C-5)，143.8(s，C-2)，120.0(d，C-3)，112.2(d，C-4)。以上波谱数据与文献［14］数据报道一致，确定该化合物为2-呋喃甲酸。

［1］赵继鼎．中国真菌志:第3卷［M］．北京:科学出版社，1998:186．

［2］Jiang M Y，Zhang L，Liu R．Speciosins A-K，oxygenated cyclohexanoids from the basidiomycete Hexagonia speciosa［J］．J Nat Prod，2009，72:1405．

［3］Jiang M Y，Li Y，Wang F．Isoprenylated cyclohexanoids from the basidiomycete Hexagonia speciosa［J］．Phytochemistry，2011，72(9):923-928.

［4］Burger B V，Roux M L，Spies S C，et al．Mammalian pheromone studies-III．(e，e)-7，11，15-trimethyl-3-methylenehexa-deca-1，6，10，14-tetraene，a new diterpene analogue of β-farnesene from the dorsal gland of the springbok，Antidorcas marsupialis［J］．Tetrahedron Letters，1978，19(52):5221．

［5］Akita C，Kawaguchi T，Kaneko F，et al．Solid-state13C NMR study on order→disorder phase transition in oleic acid［J］．J Phys Chem B，2004，108(15):4862．

［6］Gao J M，Dong Z J，Liu J K．A new ceramide from the basidiomycete Russula cyanoxantha［J］．Lipids，2001，36(2):175．

［7］Mishra P D，Wahidulla S，Souza L D．Lipid constituents of marine sponge Suberitus carnosus［J］．Ind J Chem，1996，35B:806．

［8］Ishizuka T，Yaoita Y，Kikuchi M．Sterols from the fruit bodies of Grifola frondosa［J］．Chem Pharm Bull，1997，45:1756．

［9］Du Z Z，Shen Y M．A rare new cleistanthane diterpene from the pericarp of Trewia nudiflora［J］．Helvetica Chimica Acta，2006，89:2841．

［10］Gao J M，Hu L，Liu J K．A novel sterol from Chinese truffles Tuber indicum［J］．Steroids，2001，66:771．

［11］Gallo M B，Cavalcanti B C，Barros F W，et al．Chemical constituents of Papulaspora immersa，an endophyte from Smallanthus sonchifolius(Asteraceae)，and their cytotoxic activity［J］．Chem Biodivers，2010，7:2941．

［12］Yaoita Y，Amemiya K，Ohnuma H，et al．Sterol constituents from five edible mushrooms［J］．Chem Pharm Bull，1998，46:944．

［13］Brown P E，Lewis R A，Waring M A．Studies of chromenes．Part 9.Syntheses of chromenequinones［J］．J Chem Soc Perkin Trans 1，1990，11:2979．

［14］张维威，孔令义．栽培毛喉鞘蕊花化学成分［J］．中国中药杂志，2009，34(16):2060．