食管黏膜上皮癌变过程中FHIT与增殖细胞核抗原的表达及临床意义

钱如林 李向阳 蔡祖勋 贾向波

食管黏膜上皮癌变过程中FHIT与增殖细胞核抗原的表达及临床意义

钱如林 李向阳 蔡祖勋 贾向波

目的探讨食管黏膜上皮癌变过程中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与PCNA的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学SP法分别检测FHIT在37例正常食管黏膜、非典型增生、食管鳞癌组织中的表达。结果食管鳞癌组织中FHIT蛋白阳性表达率43.2%(16/37)显著低于非典型增生组70.3%(26/37)和正常食管黏膜组89.2%(33/37)(均P＜0.05)。食管鳞癌组织中PCNA的表达明显高于非典型增生组织(P＜0.05);FHIT与PCNA的平均标记指数呈显著负相关(rs=-0.583，P＜0.05)。食管鳞癌高、中分化组FHIT蛋白阳性表达率46.2%(12/26)显著高于低分化组36.4%(4/11)(P＜0.05);淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率39.3%(11/28)显著低于无淋巴转移组55.6%(5/9)，(P＜0.05)。结论PTEN在食管黏膜上皮癌变过程中有明显缺失现象，在食管鳞癌的发生、发展中起重要作用，对其蛋白的检测可作为判定食管鳞癌发生及转移能力的一项客观指标。

食管肿瘤;脆性组氨酸三联体基因;增殖细胞核抗原;免疫组织化学

脆性组氨酸三联体(fragi1ehistidinetriad，FHIT)基因是抑癌基因，与多种恶性肿瘤的发生密切相关，研究表明，FHIT在人类许多肿瘤组织或细胞系中呈现高频率的异常缺失［1，2］。我们采用免疫组织化学法，检测 FHIT在正常食管黏膜、非典型增生、食管癌切除标本组织中的表达，以及与增殖细胞核抗原(proliferating cellular nuclear antigen，PCNA)的相互关系，了解其在食管癌形成过程中的可能作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 标本取自河南省胸科医院2008年9月至2009年10月手术切除并经病理证实的37例食管癌组织标本，均为鳞状细胞癌。术前未行化疗、放疗。其中男25例，女12例，年龄37～78岁，平均年龄52.8岁。其中低分化11例，中分化12例，高分化14例;淋巴结无转移9例，淋巴结转移28例。另取胃镜室经病理证实的正常食管粘膜组织和非典型增生组织作为对照。

1.2 免疫组织化学 每例标本经10%福尔马林固定，石蜡包埋，4μm连续切片，分别进行HE染色和免疫组化SP法染色。SP试剂盒及兔抗人FHIT多克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司，用磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。免疫组化染色步骤严格按照试剂盒说明进行。

1.3 结果判断标准 参考近期国外文献［3］，观察FHIT蛋白的分布，阳性强度和阳性率。先按染色强度评分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色，染色强度需与背景着色相对比;再按阳性细胞所占百分比评分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为11% ～50%，3分为51% ～75%，4分为＞75%，染色强度与阳性细胞百分比的乘积≥2分为免疫反应阳性(+);余下为阴性(-)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 12.0统计软件包进行统计处理，计数资料的比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 FHIT蛋白的表达 FHIT特异性着色位于细胞胞浆内，呈棕褐色。食管鳞癌组织中FHIT呈点片状，多为弱阳性表达，阳性表达率为43.2%(16/37)，显著低于非典型增生组70.3%(26/37)和正常食管黏膜组89.2%(33/37)(均P＜0.05)。食管鳞癌高、中分化组FHIT蛋白阳性表达率46.2%(12/26)显著高于低分化组36.4%(4/11)(P＜0.05);淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率39.3%(11/28)显著低于无淋巴转移组55.6%(5/9)，(P＜0.05)。

2.2 PCNA蛋白的表达 PCNA为胞核着色，间质内无表达，呈棕褐色。食管鳞癌组织中均有不同程度PCNA的阳性表达，PCNA标记指数为11.2% ～68.7%，非典型增生组织PCNA微弱阳性染色，PCNA标记指数＜5%，食管鳞癌组织中PCNA的表达明显高于非典型增生组织(P＜0.05);FHIT与PCNA的平均标记指数呈显著负相关(rs=-0.583，P＜0.05)。

3 讨论

研究表明，在许多肿瘤组织中或肿瘤细胞株中，FHIT基因呈现多发性，广泛性的纯合性或杂合性缺失［4］，提示此基因的异常可能和肿瘤的发生有关。我们的研究显示，食管鳞癌组织中FHIT呈点片状，多为弱阳性表达，阳性表达率为43.2%，显著低于非典型增生组70.3%和正常食管黏膜组89.2%。FHIT在癌组织中缺失率明显高于癌旁组织和正常组织;这表明在食管癌发生发展过程中，FHIT基因的缺失或表达减弱可能增加了食管癌的易感性。Kitamura等［5］对75例食管鳞癌的研究显示，随着病理组织学变化的加重，FHIT蛋白的表达呈进行性减少或缺失。胡殿宇等［6］报道23癌旁不典型增生组织和39食管鳞癌组织中FHIT蛋白的阳性表达率分别为52.17%和28.21% ，均低于正常食管黏膜组织的89.74%。Ramesh等［7］的一项检测结果发现肺支气管上皮不典型增生及原位癌FHIT蛋白缺失率达93%，而正常支气管上皮细胞均高表达FHIT蛋白。FHIT蛋白表达下调或缺失可能是食管鳞癌发生的早期事件，FHIT蛋白在食管鳞癌组织中表达的降低，使得抑制正常组织细胞恶性转化的能力降低，细胞发生癌变、增殖能力增强，导致肿瘤的发生。本实验证实，FHIT蛋白表达与食管鳞癌组织分化程度密切相关，恶性程度低，组织分化程度高，其蛋白高表达;而恶性程度高，组织分化差的癌组织，其蛋白不表达或表达弱，说明FHIT在食管鳞癌分化过程中起一定作用。本研究还发现FHIT蛋白表达与食管鳞癌的淋巴结转移相关，淋巴结转移患者FHIT蛋白阳性表达率46.4%显著低于无淋巴转移组55.6%。提示FHIT在食管鳞癌的发展浸润转移过程中起重要作用。

PCNA是DNA聚合酶的辅助因子，是真核细胞DNA合成所必须的一种糖蛋白，参与DNA的合成并在细胞周期中起重要的调控作用［9，10］。PCNA在DNA合成的G1期开始增加，到S期时能够达到最高峰，到G2/M期时开始迅速降低。这种变化周期与细胞增殖周期过程刚好相关。由于PCNA的合成与表达和细胞增殖活性密切相关，因此检测PCNA可以反映癌细胞DNA的合成情况，为癌细胞增殖活性提供客观指标。研究发现，PCNA与许多恶性肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结或脏器转移有关，并可用于临床诊断、指导治疗以及预后评估［11］。本研究发现食管鳞癌组织中均有不同程度PCNA的阳性表达，PCNA标记指数为11.2% ～68.7% ，非典型增生组织PCNA微弱阳性染色，PCNA标记指数＜5%，食管鳞癌组织中PCNA的表达明显高于非典型增生组织(P＜0.05);FHIT与PCNA的平均标记指数呈显著负相关(rs=-0.583，P＜0.05)。提示PCNA蛋白检测可直接反映细胞合成代谢及增殖状态。

总之，我们的研究表明，FHIT表达与食管鳞癌的发生、发展有关，与细胞增殖关系密切，其为食管鳞癌的早期诊断、判断预后提供新的参考。

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［4］李鹏，李道堂.非小细胞肺癌组织中FHIT基因表达缺失与临床病理因素的相关性研究.中华肿瘤防治杂志，2006，13(7)：505-508.

［5］Kitamura A，Yashima K，Okamoto，et a1.Reduced FHIT expression occurs in the early stage of esophageal tumorigenesis：no correlation with p53 expression and apoptosis.Oneology，2001，61(3)：205.

［6］胡殿宇，杨再珍，陈奎生，等.食管鳞癌组织中脆性组氨酸三联体蛋白的表达.郑州大学学报(医学版)，2007，42(5)：853-855.

［7］Ramesh R，Saelci T，Templeton NS，et a1.Successful treatment of primary and disseminated human lung cancer by systemic delivery of tumor suppressor genes using an improved liposome vector.Mol Ther，2001，3(3)：337-350.

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FHIT and PCNA expression and its clinical significance in the carcinogenesis of esophagealmucosa

QIAN Ru-lin，LI Xiang-yang，CAI Zu-xun，et al.
Thoracic Surgery，Henan Chest Hospital，Zhengzhou 450003，China

ObjectiveTo investigate the expression of fragile histidine triad(FHIT)gene and proliferating cell nuclear antigen(PCNA)during the process of esophageal squamous cell carcinogenesis.M ethodsThe expression of FHITwere detected by immunohistochemistry SPmethod in 37 cases of lung squamous carcinoma，10 of adjacent tissue.The biopsy of normal，dysplasia and esophageal carcinoma of 37 cases were performed.The expressions of FHIT，PCNA were detected by using immmuno-histochemicalmethod.ResultsFHIT protein expression 43.2%(16/37)of esophageal squamous cell carcinoma was significantly lower than the atypical hyperplasia group 70.3%(26/37)and normal esophagealmucosa and 89.2%(33/37)(P＜0.05).PCNA expression in esophageal squamous cell carcinoma was significantly higher than that atypical hyperplasia(P＜0.05);There was a negative correlation between PCNA and FHIT expressions(rs=-0.583，P＜0.05).The positive rates of FHIT in high andmiddle degrees of differentiation were significantly higher than that in low degree of differentiation(46.2%νs36.4%).Tumorswith lymph nodemetastases(39.3%)(11/28)had loss FHIT protein expression than those withoutmetastasis(55.6%)(5/9)(P＜0.05).ConclusionFHIT gene play an important role in the occurrence and development of esophageal squamous cell carcinoma.It is suggested that FHIT can be a usefulmarker for predicting invasion and metastasis ability of esophageal squamous cell carcinoma.

Esophageal neoplasms;Fragile histidine triad;Proliferating cellular nuclear antigen;Immunohistochemistry

河南省科技攻关项目(项目编号：082300450070)

450003 河南省胸科医院胸外科