科技进展

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从美国密歇根州猪分离出抗万古霉素肠球菌的分子特性

2008年，在美国密歇根州猪分离鉴定了万古霉素抗药肠球菌（VRE），这是首次在美国北部家畜中报道 VRE。在2009年和2010年继续抽样，检测在密歇根州是否还存在VRE。2009年，共检测猪粪便样品和饲料样品（n=56），集市上收集的猪粪样品（n=9）和密歇根州农场猪粪便样品（n=18）分离出VRE。2010年，猪粪便样品是从26个集市（n=73）和六个州的9个商业猪场采集的（n=18）。分离的VRE用聚合酶链式反应，限制片段长度多态性分析，脉冲凝胶电泳（PFGE），S1核酸酶消化及多位点序列分型（MLST）进行分子的评估。2009年在州农场分离出6个VRE，另外分离的6个VRE（占总数的8.2%）是从5个集市样品中分离的。所有12株分离的肠球菌与密歇根州第一次报道的VRE高度相关：所有均为具有万古霉素抗性的粪肠球菌 （VREf），Tn1546（D型）携带vanA基因，没有检测到插入序列IS1251，插入序列与IS1251、hyl和esp相似。PFGE分析有150～160处PFGE图形相似（相似度大于80%）。MLST将它们序列分为ST5、ST6或ST185，都属于一个克隆复合体CC5（认为该菌株是在欧洲猪群中流行）。这个研究显示了VREf是广泛存在于密歇根州猪群中的。 （王蕾 编译，译自 《人兽共患病学和公共卫生》）

译自 ：Gordoncillo MJ， Donabedian S， Bartlett PC，et al.Isolation and Molecular Characterization of Vancomycin-Resistant Enterococcus faecium from Swine in Michigan， USA.Zoonoses Public Health，2012[Epub ahead of print]

非结构蛋白2在MARC-145细胞中调节繁殖与呼吸综合征病毒的复制：影响基因沉默和过度表达

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是对经济有重大影响的猪病。有许多疫苗用于控制该病，但是目前还没有特别成功的疫苗。急需研发一个细胞系，用于大量生产PRRSV疫苗。为了研究Nsp2在MARC-145细胞中对高致病猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）复制的影响，基于RNA干扰理论，构建Nsp2基因的短发夹结构RNA，构建了细胞系表达HPPRRSV的Nsp2基因。保守的HP-PRRSV Nsp2基因序列用来设计短的干扰RNA以及用于检测干扰RNA对PRRSV在体外细胞上转录表达和复制的沉默作用。Nsp2、ORF7和βactin mRNA的表达用半定量PCR检测。用Nsp2的siRNA感染后减少了在感染PRRSV的MARC-145细胞中Nsp2的表达。MARC-145-TJ Nsp2和 MARC-145-TJM Nsp2细胞系用G418筛选（这些细胞都感染了HP-PRRSV，正常MARC-145细胞作为模型，当CPE出现后病毒滴度用TCID（50）表示。下调Nsp2导致明显的抑制PRRSV复制，减少了结构蛋白的表达。靶向Nsp2的siRNA下调Nsp2在MARC-145细胞中的表达并且抑制了PRRSV在MARC-145细胞中的复制。shRNA载体 S-1和S-2可以有效抑制病毒在MARC-145中的复制。结果显示细胞表达高致病性PRRSV TJ株和致弱TJM株Nsp2基因是稳定的。PRRSV在上述细胞中复制比在MARC-145细胞中快，尤其在早期阶段。这显示了Nsp2在PRRSV复制过程中扮演了重要的角色。 （王蕾 编译，译自《兽医微生物学》）

译自： Wang FX， Wen YJ， Yang BC， et al.Role of nonstructural protein 2in the regulation of the replication of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in MARC-145cells:Effect of gene silencing and over expression.Vet Microbiol， 2012,161（1-2）:58-65.

猪T淋巴细胞亚群的全基因组相关研究

淋巴细胞在被动免疫中起到重要的作用，对于免疫具有非常重要的作用。不同个体外周血中的T淋巴细胞亚群比例不同已被证明是基因控制的，但是对于基因调控的机制还知之甚少。弄清基因调控的机理可以帮助人们在猪选育中提高免疫力的遗传进展。

为了确定猪免疫特性相关的基因组区域，进行了一个全基因组的相关研究。本文研究了总共3个品种675只猪。在21日龄，所有的猪都免疫改良的古典猪瘟活疫苗。血液样品在20日龄和35日龄时采集。这两个日龄的7个免疫指标：包括CD4+、CD8+、CD4+CD8+、CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4-CD8-的比例以及CD4+/CD8+T淋巴细胞的比率被评估和计算出来。所有的样品基因型都为62，163单核苷酸多态性（SNP）用Illumina公司的porcine SNP 60k BeadChip检测。基于单点回归模型，SNPs和每个免疫性状关联试验的质量控制后选出40833SNPs。用处理全基因组关联分析（GWAS）方法处理多重试验的结果，10000序列展示全染色体和全基因组关联试验的显著水平。总的来说，确定61个SNPs达到了全染色体关联显著水平，有3个SNPs达到了全基因组关联显著水平。在先前的研究中 27个重要的SNPs位于免疫相关QTL区域。此外，几个重要的SNPs落入已知的免疫相关基因的区域，它们中的14个基因落入已知的T淋巴细胞相关的基因区域。

本研究证明了全基因组相关研究是揭示潜在基因变异影响T淋巴细胞亚群的可行方法。本研究为今后继续研究猪免疫力因果突变打下了基础。 （王蕾 编译，译自 《英国医学研究理事会基因组学》）

译 自 ： Lu X， Fu WX， Luo YR， Ding XD， et al.Genome-wide association study for T lymphocyte subpopulations in swine.BMC Genomics， 2012， 13（1）:488.

特异性蛋白质印迹杂交检测人和猪的旋毛虫感染

旋毛虫病是人畜共患病，是由旋毛虫属寄生虫引起的，该病在全世界广泛分布。为了确诊，需用蛋白质印迹杂交检测验证人和猪血清样品ELISA检测阳性样品，因为ELISA检测结果有许多假阳性。这个研究的目的是鉴定在感染人和猪的血清中大量存在的旋毛虫特异抗原，界定一个检测旋毛虫的特异方法 [通过蛋白质印迹杂交（western blots）检测方法检测感染宿主血清]，可以将假阳性血清与真阳性血清分开。运用排泄/分泌抗原，用蛋白质印迹杂交检测了450份人的血清样品 [150份确诊感染旋毛虫的人血清和300份没有感染旋毛虫但ELISA检测为阳性的人血清 （假阳性）]。我们还检测了210份猪血清 [（1）30份血清样品采自试验室感染旋毛虫的猪； （2）90份血清样品从自然感染旋毛虫的猪上采集；3）90份血清样品从没有感染旋毛虫的猪上采集（人工消化膈肌，ELISA检测为假阳性）。所有真正阳性的血清（从实验室感染猪和自然感染猪及确诊的感染旋毛虫的人采集的血清）呈三个条带反应（条带大小48～72kD）。该检测方法敏感性为100%并且可以将旋毛虫感染的人和猪的血清与健康人和猪的血清分开 （特异性100%）。 （王蕾 编译， 译自 《国际寄生虫学杂志》）

译自： Gómez-Morales MA,Ludovisi A,Amati M,Blaga R,et al.A distinctive western blot pattern to recognize Trichinella infections in humans and pigs.Int J Parasitol， 2012[Epub ahead of print]

不同日粮类型对猪后肠道挥发性硫化物的影响

将猪饲喂小麦-大麦日粮（STD）或者小麦DDGS日粮后，通过体外发酵的方法测定大肠中挥发性硫化物（VSC）和硫酸盐还原比例（SRR）。从盲肠到结肠末端，硫化氢和SRR产量逐渐升高，而且STD日粮组显著高于DDGS组。DDGS组中甲硫醇产量显著提高，二甲基硫醚差异不显著。通过定量PCR测定大肠中硫酸盐还原菌以及总体细菌数，发现随着大肠从前到后，这些菌类显著提高，但是与日粮类型无关。可见，猪的大肠中VSC产量在不同的肠段变化幅度很大，日粮不同类型会影响与之相关的微生物。 （彭华编译，译自 《应用微生物学杂志》）

Poulsen HV,Jensen BB,Finster K,et al.Microbial production of volatile sulphur compounds in the large intestine of pigs fed two different diets.Journal of Applied Microbiology,2012,113（1）:143-154.

DDGS与日粮配制方法对保育猪干物质消化率、钙和磷的沉积与排放的影响

磷是猪饲料中一种较昂贵的原料，过量使用磷会导致粪中磷排放增加，从而影响环境，因此，应优化日粮配方以降低饲料成本并减少粪中磷的排放。本试验分为5个处理，第1个处理为对照组，即以总磷为基础配制小麦-豆粕型日粮；第2～5个处理以总磷或可用磷为基础配制含10%或20%DDGS的日粮组。 选用39头阉公猪（初始体重为10.37±0.37kg），随机分配到5个处理组中，适应期为7天，在随后5天的试验期，收集粪样和尿样。与对照组相比，饲喂10%和20%DDGS日粮组干物质消化率降低，降低幅度分别为2%和4%（P＜0.01）。各处理组间的采食量与总磷摄入量无显著差异，但以可用磷为基础配制的日粮组磷的摄入量显著低于（P＜0.01）以总磷为基础配制的日粮组。饲喂DDGS猪的粪中磷含量低于未饲喂组，在DDGS组中，以可用磷为基础配制的日粮组的磷的排放量显著低于（P＜0.01）以总磷为基础配制的日粮组。日粮中DDGS的含量对总磷的排放、沉积以及表观消化率无影响（P＞0.05）。与对照组相比，饲喂DDGS日粮组钙的摄入量有降低的趋势，粪中钙的含量和沉积增加（P＜0.05）。 与 10%DDGS 日粮组相比， 20%DDGS 日粮组钙的排放有升高的趋势（P=0.08），钙沉积、沉积系数以及表观消化率降低（P＜0.05）。无论以总磷还是以有效磷为基础配制日粮，日粮中DDGS的含量对钙的摄入、沉积、排放和表观消化率无影响。综上所述，增加保育猪日粮中DDGS的含量可降低干物质消化率、粪中磷的含量，但对磷的排放、沉积以及消化率无影响。无论以总磷还是以有效磷为基础配制含DDGS的日粮，对磷的消化率或总排放量无影响，但以有效磷为基础配制的日粮总磷含量降低。 （彭华编译，译自 《动物饲料科学与技术》）

译自： Hanson AR,Xu G,Li M,et al.Impact of dried distillers grains with solubles（DDGS）and diet formulation method on dry matter,calcium,and phosphorus retention and excretion in nursery pigs.Animal Feed Science and Technology,2012,172（3–4）:187–193.