野生口蘑菌种分离及人工驯化

修翠娟

(辽宁省微生物科学研究院，辽宁朝阳122000)

野生口蘑是泛指一群生长在内蒙古和河北等草原上生态习性相近的草原蘑菇。野生口蘑是一种十分珍贵的大型野生食用菌，含丰富的蛋白质、维生素及钾、钙、铁、磷等矿质元素，菌肉肥厚，质地细腻，郁香醇正，味道独特鲜美，一直畅销于国内外市场，是我国宝贵的食用菌资源［1］。然而由于草原退化及人为过度采集等原因，其生境受到破坏，产量不断下降。因此，在保护这一珍贵资源的同时，开展人工驯化栽培技术的研究，具有重要的学术价值和广阔的开发前景。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1试验菌种野生口蘑子实体采自内蒙赤峰，经辽宁省微生物菌种保藏中心分离并通过性状鉴定初步定为伞菌目、口蘑科、口蘑属［2］。

1.1.2 试验药品硫酸镁、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、盐酸硫胺素、葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、果糖、麦芽糖、甘露醇、甘油、蛋白胨、酵母膏、硫酸铵、硝酸铵、硝酸钾、脲、牛肉膏。

1.2 方法

1.2.1 营养特性研究(碳氮源)［3］配制基础培养基:硫酸镁0.5 g，磷酸二氢钾0.5 g，磷酸氢二钾0.5 g，盐酸硫胺素10 mg，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL。做碳源试验时固定蛋白胨2 g，分别加入葡萄糖、蔗糖、乳糖、淀粉、果糖、麦芽糖、甘露醇、甘油20 g;做氮源试验时固定葡萄糖20 g。每个试验5个培养皿，121℃高压灭菌30 min，用打孔器接种直径0.5 cm的菌块，25℃培养，1周后测量菌落大小，并观察菌落及菌丝生长特征。

1.2.2 菌种驯化方法［4］采用不同培养基驯化。驯化培养基:①PSA培养基;②PSA+蛋白胨;③PSA+VB1;④PSA+VB1+蛋白胨;⑤PSA+硫酸镁+磷酸二氢钾。

1.2.3 生态特性研究(拮抗作用)拮抗菌为青霉和枯草芽胞杆菌，采用平板对峙法。

1.2.4 驯化栽培［5］栽培料:①发酵料，以羊粪、麦秸、棉籽壳为原料，添加生石灰、石膏和过磷酸钙等辅料进行发酵。发酵后的栽培料分为灭菌和不灭菌2种方式，以双孢菇为对照;②熟料，以羊粪、玉米秆、菌糠等为原料，121℃、灭菌1 h。栽培方法:采用箱式栽培方法，在40 cm×30 cm×30 cm纸箱内开放培养。

2 结果与分析

2.1 菌种碳氮源营养研究

由表1可知，蔗糖为该菌种的最佳碳源，菌丝较壮;在甘油上生长的菌丝细，但生长得快;淀粉、麦芽糖、葡萄糖、甘露醇为该菌种的较好碳源。氮源试验结果表明，牛肉膏为该菌种的最佳氮源，菌丝较密、生长速度快，酵母膏、蛋白胨、硝酸铵为该菌种较好的氮源，脲对菌丝体有毒害作用。

表1 碳源对菌种生长的影响Table 1 Influence of carbon on the growth of culture

表2 氮源对菌种生长的影响Table 2 Influence of nitrogen on the growth of culture

2.2 菌种驯化

经转管纯化及在不同培养基驯化培养，野生口蘑菌株在PSA培养基上生长速度快，菌丝较浓密(图1)。在平板上生长的菌丝体出现菌丝扭结现象(图2、图3)。

2.3 菌种的拮抗作用

据文献报道［6］，在口蘑蘑菇圈出菇环，土壤中其他细菌及真菌、放线菌生长受到明显抑制，浸麻芽胞杆菌和德氏食酸菌却大量产生，占明显优势，本文实验结果表明(图4、图5)，该菌菌丝能明显抑制青霉的生长，和枯草芽胞杆菌有较好的相容性。

2.4 驯化栽培

发酵料试验结果表明，口蘑无论在灭菌料和非灭菌料上都未见菌丝生长。对照菌种双孢菇在未灭菌的发酵料上生长旺盛，经覆土后出菇(图6)。熟料试验结果表明，口蘑在熟料上菌丝生长良好(图7)，但覆土后，菌丝未能爬土，后期物料染菌。

该菌种经过人工训化后，菌丝的生长速度和菌丝的致密度有较大的改善，但和双孢菇的菌丝相比，无论在麦粒上还是熟料上，菌丝不够粗壮，仍然有一定的距离(图8)。

图8 野生口蘑在熟料上的生长情况Fig.8 Growth of mushroom on clinker

3 讨论

野生口蘑菌种经过人工训化后，菌丝的生长速度和菌丝的致密度有较大的改善，但和双孢菇的菌丝相比，无论在麦粒上还是熟料上，菌丝不够粗壮，仍然有一定的差距。驯化栽培一直以来都是口蘑研究的焦点问题，许多试验研究都围绕这一主题而展开。口蘑的驯化栽培难度较大，欲获得实质性的突破还在于掌握其生长规律及生态习性。温度因子是影响蒙古口蘑菌丝及子实体正常生长发育的关键因子，作为长期适应低温生态环境的结果，适当温度的摸索将是驯化栽培的关键技术。本研究在菌种驯化时未对菌种进行不同温度的恒温及变温驯化，可能导致出菇失败。口蘑具有严格的营养要求，因而培养基的筛选至关重要。口蘑蘑菇圈土壤中优势微生物与口蘑的生物学关系有待深入探讨，为口蘑的生态学研究及加速人工驯化栽培提供科学依据。

［1］ 吴恩奇，图力古尔.蒙古口蘑研究进展［J］.中国食用菌，2007，26(4):3-5.

［2］ 卯晓岚.中国大型真菌［M］.郑州:河南科学技术出版社，2000.

［3］ 李林玉，李荣春.荷叶离褶伞菌丝体营养条件的初步研究［J］.中国食用菌，2005，(3):30-32.

［4］ 赵吉，邵玉琴.草原蒙古口蘑蘑菇圈特殊生态观察［J］.食用菌学报，1992，11(2):146-149.

［5］ 李维国，常立民，赵永光.松茸半人工栽培的研究现状［J］.微生物学杂志，2002，22(6):49-51.

［6］ 王欢，图力古尔.三种鳞伞属(Pholiota)真菌的菌丝生物学特性初步研究［J］.菌物研究，2006，4(2):6-10.