非小细胞肺癌患者血清血管内皮生长因子受体2和内皮抑素与临床特征的相关性研究

杨异 赵天成 高宗礼 王修珍

[摘要] 目的：探究非小细胞肺癌患者外周血血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）和内皮抑素（endostatin，ES）与临床特征的相关性及其意义。方法：选取2009年在上海市第六人民医院心胸外科接受手术治疗的38例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者，用ELISA法检测其术前血清VEGFR-2、ES水平，分析二者相关性，并分析它们与年龄、性别、病理类型、肿瘤最大直径、肿瘤内血管密度（micro vessel density，MVD）、临床分期相关性及意义。结果：患者血清ES水平为（20.29±6.10）μg/L，VEGFR-2水平为（7.42±4.28）μg/L，ES表达水平与VEGFR-2表达水平无明显相关性（P＞0.05），ES与肺癌病灶内MVD呈直线负相关关系（r=-0.867，r2=0.752），直线回归方程为Y=32.002-0.499X（μg/L）（P＜0.001）；ES、VEGFR-2表达水平与其他临床特征无明显相关性（P＞0.05）。结论：胸外科NSCLC患者外周血ES水平可能影响肺癌病灶内肿瘤内血管密度，从而影响肿瘤的生长，VEGFR-2、ES可能无法单独作为接受手术治疗NSCLC患者分期及预后判断的有效指标。

[关键词] 非小细胞肺癌；内皮生长因子受体2；内皮抑素

[中图分类号] R734.2 [文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2011）11（c）-024-03

Research of the correlations between serum levels of VEGFR-2, endostatin and clinical characters in patients with non-small cell lung cancer

YANG Yi1,2, ZHAO Tiancheng2, GAO Zongli2, WANG Xiuzhen1

1.Department of Pathology, Medical College of Soochow University, College of Basic Medical and Biological Sciences, Jiangsu Province, Soochow 215006, China; 2.Department of cardio thoracic Surgery, the 6th People's Hospital Afficicated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, China

[Abstract] Objective: To study the relationship between clinical significance and the serum levels of vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR-2), endostatin (ES) inpatients with non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods: The serum VEGFR-2, ES levels were detected by ELISA method in 38 patients with NSCLC in Shanghai 6th People's Hospital cardiothoracic surgery department in 2009. The correlations were analyzed among VEGFR-2, ES and the clinical characters, age, sex, pathology, diameter of tumor, clinical stage, micro vessel density (MVD) of tumor. Results: The serum level of ES [(20.29±6.10) μg/L] was uncorrelated with that of VEGFR-2 [(7.42±4.28) μg/L] (P＞0.05); the serum level of ES was correlated with MVD of tumor (r=-0.867, r2=0.752), the linear regression equation was [Y=32.002-0.499X (μg/L)] (P＜0.001); ES and VEGFR2 were uncorrelated with the other clinical characters. Conclusion: The serum level of ES may change the MVD of tumor, ES, VEGFR-2 and the clinical characters are uncorrelated in NSCLC patients. It suggests that VEGFR-2 and ES may be failed to be used as effective markers to predict stages and prognosis in NSCLC patients.

[Key words] Non-small cell lung cancer; Growth factor receptor 2; Endostatin

研究表明，肺癌的发生、发展是一个多因素、多阶段的过程，其发生、生长、转移依赖血管新生，肿瘤自身能产生或刺激人体产生血管生长因子[以血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）为代表]，能促进肿瘤血管内皮细胞增殖，从而促使肿瘤生长[1]；但是，肿瘤也会产生或促进人体产生血管生长抑制因子[以内皮抑素（Endostatin，ES）为代表]，肿瘤新生血管的形成受上述两方面的调节[1-4]。有研究显示，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者血清中ES和VEGF水平可能是评估肺癌恶性行为及预后的有用指标[5-8]，但研究所统计病例多为非手术患者，为了解二者与接受手术治疗的NSCLC患者临床体征及病理类型、分期的相关性及意义，本文中笔者检测了接受外科手术治疗的NSCLC患者血清血管内皮生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR-2）、ES水平，现将结果及分析报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年在上海市第六人民医院心胸外科接受手术治疗的部分NSCLC患者38例，其中，男26例，女12例；年龄45～84岁，平均63.8岁；吸烟指数：0～1 200支/年，平均378支/年；术后病理：肿瘤最大直径0.8～8 cm，平均3.7 cm；腺癌24例，鳞癌13例，腺鳞混合型1例；按2009年UICC分期标准分期：Ⅰ期20例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例。

1.2 主要试剂和仪器

ES ELISA试剂盒为美国Phoenix公司产品；VEGFR-2 ELISA试剂盒及肿瘤血管酶标试剂CD34为美国R&D;公司生产，EGFR ELISA试剂盒为奥地利Bender公司产品，酶标仪为芬兰Thermo公司生产，型号DENLEY GRAGON WELLSCAN MK3。显微镜型号为Olympus BX-51，图像捕捉系统型号为Leica DFC-320。

1.3 标本的收集、保存及制作

全组均于术前抽取外周静脉血5 ml，5 000 r/min离心10 min，分离血清，然后将血清放入2 ml Eppendorf管中，-80℃低温冻存备用。血管密度检测切片由上海交通大学附属第六人民医院病理科制作，肿瘤蜡块常规切片脱蜡后用标准方法CD34免疫组化染色。

1.4 检测方法

ES、VEGFR-2：由上海西唐生物科技有限公司代为检测，严格按试剂盒说明书进行。血管密度：先用低倍显微镜扫视整个玻片寻找CD34染色标记血管密度最高的区域即“热点”后，在高倍显微镜视野下计数被染色的微血管数目，计数血管密度最高的3个区域，计平均值。

1.5 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件处理，应用方差分析和Pearson相关性分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 内皮抑素与血管内皮生长因子受体2表达水平之间的相关性

血清ES水平为（20.29±6.10）μg/L，血清VEGFR-2水平为（7.42±4.28）μg/L，ES水平与VEGFR-2水平无明显相关性（r=0.466，P＞0.05），见图1。

2.2 内皮抑素、血管内皮生长因子受体2表达水平与临床特征、病理、分期之间相关性

ES表达水平与肺癌病灶内MVD呈直线负相关关系（r=-0.867，r2=0.752），直线回归方程为Y=32.002-0.499X（μg/L）（P＜0.001），见图2。VEGFR-2表达水平与肺癌病灶内MVD无相关关系（r=0.372，P＞0.05）。

ES表达水平与年龄、吸烟指数、肿瘤直径相关性检验r值分别为0.342、-0.269、0.428，均P＞0.05，与性别、病理、分期组间方差分析F值分别为0.254、0.571、0.750，均P＞0.05；VEGFR-2表达水平与年龄、吸烟指数、肿瘤直径相关性关系检验r值分别为0.298、0.337、0.413，均P＞0.05，与性别、病理、分期组间方差分析F值分别为0.492、0.542、0.381，均P＞0.05，各相关数据见表1。

3 讨论

实体肿瘤的发生、生长依赖于新生血管生成，抑制新生血管生成就能抑制其生长[2]。VEGF是最重要的新生血管生成促进因子之一，VEGFR-2是其发挥促血管生成效应因子的主要受体，其在VEGF的信号转导及血管内皮生成中起主导作用[9]。血管内皮抑素是最有效的内源性血管抑制因子[10]。因此，笔者选择ES及VEGFR-2水平作为血管生成和抑制血管的代表，了解NSCLC患者二者之间及其与病理、分期等临床特征的相关性。

尽管大量研究发现ES与VEGFR-2作用相对立，可能互为对方的下调因子[11]，但本研究发现两者并没有相关关系，提示NSCLC患者肿瘤的血管生成是各种血管生成促进因子和抑制因子综合作用的结果，而VEGF与ES仅是肿瘤血管生成中两个最重要的促进因子和抑制因子而已。

本研究发现，ES与肺癌病灶内MVD呈直线负相关关系，即NSCLC患者血中ES表达水平越高，肿瘤内MVD越少，r=-0.867，直线回归方程为Y=32.002-0.499X（μg/L），P＜0.001，r2=0.752，X能够解释Y变异的75.2%，说明术前ES与MVD直线相关性有较好的专业意义，但也提示除了该自变量“MVD”对应变量“术前ES”的影响外，还存在其他的自变量。此结果证明ES是最有效的内源性血管抑制因子之一，同时也提示如果给予外源性ES，人为提高其在NSCLC患者血中水平，很有可能可以减少肿瘤MVD，从而抑制肿瘤生长，为肿瘤治疗指出了新的方向。

由于VEGF与ES在实体肿瘤的发生、发展中有重要作用，能够影响二者在体内水平，就有可能影响肿瘤的发生、发展，笔者试图找出可能影响二者的临床特征，但结果显示，ES、VEGFR-2表达水平与年龄、性别、吸烟指数、病理类型均无明显相关性，提示NSCLC患者体内二者的表达是一个复杂、多因素作用的结果，还需进一步研究。有研究观察到肺癌患者外周血清中VEGF和ES的水平随肺癌临床分期的升级而增高[12-13]，因而认为检测二者水平可以了解肿瘤进展及预后，但本组数据显示，二者与肿瘤最大直径、临床分期均无明显相关性（P＞0.05），而国际TNM临床分期能够很大程度预测预后，因此笔者推断ES、VEGFR-2表达水平与NSCLC患者预后没有明确相关性，也就很难根据此指标来了解预后。分析报道ES、VEGFR-2可以预测预后的文献数据，不难发现，其病例大多是Ⅲ～Ⅳ期患者，而本组均为Ⅰ～Ⅲ期可手术患者，是否因期别明显不同导致二者结果差异，有待深入研究。

虽然VEGF、ES分别作为新生血管生成促进和抑制因子在肺癌发生、发展中起着重要作用，但在本研究结果显示可手术的NSCLC患者中二者并无明显相关性，其与临床特征之间也无明确的相关性，VEGFR-2、ES可能无法单独作为NSCLC患者分期及预后判断的有效指标，ES与肺癌病灶内MVD呈直线负相关关系，提示抑制血管生成治疗可能是NSCLC治疗的一个有效方法。

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（收稿日期：2011-10-11）