GPC3、Hep-Par-1在肝细胞癌中的表达及其价值

陈远钦 邱建龙 张永辉 陈婷婷 郑素琼

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是严重威胁人类生命的恶性肿瘤之一[1]，在中国的发病率居高不下，在恶性肿瘤中位居第2位。HCC的组织形态复杂多变，一些高分化肿瘤与正常肝组织或良性肝肿瘤难以鉴别，低分化肿瘤需与转移癌鉴别，因此经常需要免疫组化来辅助诊断。以往较常用于HCC诊断的抗体有AFP、CD34及CK8等，但应用价值相对有限。20世纪90年代以来，肝细胞单克隆抗体Hep-Par-1及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3，GPC3)陆续被发现。Hep-Par-1在判断肿瘤是否为肝细胞来源方面具有重要的诊断价值，被推荐为诊断HCC的一线抗体之一[2]。GPC3是近年来较热门的1种用于肝细胞癌诊断的标记物，因其敏感性好、特异性高，被认为可能是1种新型癌胚因子[3]。本文应用免疫组织化学方法，对64例HCC分别进行GPC3及Hep-Par-1抗体标记，探讨其在HCC诊断与鉴别诊断中的应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料

随机抽取解放军180医院病理科1998～2011年手术切除的肝癌组织标本64例。年龄22～79岁，中位年龄55岁，其中男性56例，女性8例。按照2008版WHO组织学分类标准将HCC分为高分化6例、中分化28例、低分化30例。另选取28例癌旁肝组织、2例HA、6例FNH、12例肝内ICC、11例肝内MAC等作为对照研究。选取病例均经病理检查确诊。

1.2 方法

所有选取标本经4%中性甲醛固定，常规脱水、包埋、制片。免疫组织化学采用EliVision法(产品编号：KIT-9903)，人抗Glypican-3(GPC3)、Hep-Par-1等试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。操作严格按产品说明书进行。

1.3 结果判定

GPC3阳性定位于胞质或胞膜，Hep阳性定位于胞质。染色程度评分标准：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞评分标准：显微镜下随机取5个高倍镜视野，根据每个视野中阳性细胞比例进行评分：阳性细胞数< 5%为0分，5%～10%为1分，11%～50%为2分，>50%为3分。免疫组化结果评价标准：上述两项得分相乘，0分为"-"，1～2分为"+"，3～5分为"++"，6分以上为"+++"。

1.4 统计学分析

采用SPSS16.0软件进行统计分析。

2 结果

2.1 GPC3表达情况

64例HCC中58例胞质/胞膜呈阳性表达，GPC3表达率为91%(58/64)，其中75%(48/64)呈强阳性表达(+++)，在28例癌旁肝组织、2例HA、6例FNH、12例肝内ICC、11例肝内MAC中均无表达(表1)。GPC3在HCC中表达率显著高于其他非HCC肿瘤组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 Hep-Par-1表达情况

64例HCC中52例胞质呈阳性表达，Hep-Par-1表达率为81%(52/64)；28例癌旁肝组织、2例HA及6例FNH中Hep-Par-1表达率为100%；1例MAC呈阳性表达，表达率为9%(1/11)；12例ICC中无表达(表1)。肝细胞来源的肿瘤组织中Hep-Par-1表达率显著高于其他肿瘤组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 GPC3和Hep-Par-1在不同组织中的表达情况(例，%)

2.3 GPC3与Hep-Par-1表达的相关性

GPC3和Hep-Par-1均与HCC组织学分化相关，肿瘤组织学分化越低，GPC3表达率越高，表达强度越强；低分化HCC中Hep-Par-1表达率明显低于高分化HCC，并且肿瘤组织学分化越低，其表达强度越弱(表2)；GPC3表达与Hep-Par-1表达无明显相关性。

表2 GPC3和Hep-Par-1表达与HCC组织学分化的相关性(例，%)

3 讨论

1996年Pilia等[4]首先描述了磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(Glypican-3,GPC3)，把它列为硫酸类肝素糖蛋白聚糖家族中的一员。GPC3通过糖基磷脂酰肌醇(GP I)结合于细胞表面[5]。研究表明，GPC3通过增强自分泌或旁分泌Wnt基因表达信号来刺激体内和体外HCC肿瘤细胞生长，在肿瘤的恶性转变和持续增殖中发挥着特殊作用[6]。GPC3在人体胚胎期的胎盘、胚肝、胚肺和胚肾中都有表达，成人后丧失表达。1997年Hsu等[7]首次报道了GPC3在HCC中的表达情况，在154例HCC组织中，74.8%检测到GPC3mRNA，而在正常肝和肝炎组织中只有3.2%检测到GPC3基因。Coston等[8]通过免疫组织化学检测了107例HCC，其中94例(84%)GPC3呈阳性表达，而在225例非HCC的癌症中只有7例(3%)发现有GPC3阳性染色。GPC3在肝外肿瘤鲜见表达，主要见于肺鳞癌、卵巢癌、乳腺癌及部分生殖细胞肿瘤等[9,10]。在本组HCC病例研究中，GPC3阳性率达91%(58/64)，略高于文献报道。在28例癌旁肝组织、2例HA、6例FNH、12例肝内ICC、11例肝内MAC均无表达，故特异性达100%。GPC3在本组HCC中具有高的敏感性及特异性特点，与文献报道的基本符合，表明在HCC与其他肝脏常见恶性肿瘤的鉴别诊断中具有重要应用价值。本组病例癌旁肝组织中未有表达，与有关文献不相一致，可能与研究病例较少或者结果判读不同有关。GPC3在HCC中多数为弥漫强阳性表达(评分2分以上占95%)，故在肝针吸活检小标本中有较高的应用价值。另外，随着组织学分化越低，GPC3表达率越高，表达强度越强，然而，叶玉清等[11]研究显示，GPC3在肝未分化癌中表达缺失，提示GPC3可能在肿瘤进展中起特殊作用。

Hep-Par-1是Wennerberg等[12]在1993年以石蜡包埋的肝组织作为抗原克隆出的一株新的单克隆抗体，是1种线粒体相关抗原。Amarapurkar等[13]研究显示Hep-Par-1在鉴别HCC、肝内ICC、MAC中发挥着非常重要作用，其敏感性及特异性分别为89%及96%。Hep-Par-1在肝外的表达主要见于消化道肿瘤中，国内周新木等[14]通过免疫组化发现Hep-Par-1在胃癌中表达率达55.4%(72/130)。Hep-Par-1在其他肿瘤中研究较少，且仅偶见表达[15]。我们的研究中，Hep-Par-1在HCC中阳性率为81%，在2例HA、6例FNH、28例癌旁肝组织中均为弥漫阳性表达，因而，Hep-Par-1对肝细胞来源的肿瘤无鉴别诊断作用。在11例MAC中1例阳性表达，这一病例形态学表现为肝样腺癌，已证实为胃癌来源，其余10例MAC为非胃癌来源，均未见表达。在12例ICC中无表达。故Hep-Par-1对HCC与ICC、MAC鉴别有较高的敏感性及特异性。

在本组HCC病例中，GPC3阴性者Hep-Par-1表达率为100%(6/6)，Hep-Par-1阴性者GPC3表达率为92%(11/12)，与单独使用GPC3或Hep-Par-1的阳性率无明显差异，显示GPC3及Hep-Par-1在HCC中的表达可能无明显相关性。我们在研究中还发现，两者同时为阳性HCC病例占70%(45/64)，至少1种标记物阳性HCC病例占98%(63/64)，仅有1例HCC中两者表达均为阴性，故联合使用可提高HCC检出敏感性。另外，GPC3表达在HCC中的特异性远高于Hep-Par-1，因此，虽然联合应用有助提高检测敏感性，但不影响其特异性。

综上所述，GPC3及Hep-Par-1在HCC中均显示出较高的阳性率，前者在特异性上明显高于后者，联合使用可提高HCC的检出敏感性，且不影响特异性。两者在HCC与ICC、MAC鉴别中均有较高的应用价值。GPC3可作为HCC诊断的首选一线抗体。

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