Livin与Survivin在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

陈吉添 陈 瑜 吴薇紫 陈 虹

鼻咽癌是头颈部常见的恶性肿瘤，特别在广西高发，主要死亡原因为局部未控或远处转移。Livin是凋亡抑制细胞蛋白(inhibitor of apoptosis family of proteins，IAPs)家族的新成员，在大多数恶性肿瘤中高表达，起到抑制细胞凋亡的作用[1]。Survivn基因同属于IAP家族的成员，具有抗凋亡、调节细胞周期和参与血管生成的作用。Survivin在正常组织中是1个“关闭”的基因，在肿瘤组织中被激活而参与肿瘤的发生发展[2]，因此被看做是肿瘤相关基因。本研究采用免疫组织化学方法对鼻咽癌组织检测鼻咽癌与鼻咽慢性炎组织中Livin和Survivin蛋白表达的情况，以了解它们在鼻咽癌中的表达情况及其临床意义。

1 材料和方法

1.1 材料来源

80例鼻咽癌组织标本，均来自广西灵山县人民医院2003年1月～2004年12月收治的患者。所有患者为初治病例，确诊为鼻咽低分化鳞癌，未行放疗和化疗处理。80例中男性61例，女性19例，年龄26～72岁，中位年龄48岁。采用1992年福州会议标准分期。另取30例鼻咽慢性炎组织作为对照组。放疗后随访截止至2010年1月。

1.2 方法

免疫组织化学检查采用Envision两步法。Livin鼠抗人单克隆抗体购自美国Neomarkers公司，抗体稀释浓度为1∶150。Survivin鼠抗人单克隆抗体购于美国Santa Cruz公司，抗体稀释浓度为1∶100，即用型快捷MaxvisionTM检测试剂盒购自福州迈新生物技术科技公司。整个过程按试剂盒说明书进行。每批染色均设已知阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液(phosphatic buffered saline，PBS)代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断

Livin表达产物主要定位于细胞质，少部分细胞核也有不同程度的染色，呈棕黄色颗粒为阳性细胞。Survivin的阳性表达以细胞质出现棕褐色颗粒为准。由2位医师采用双盲法观察每张切片。判断阳性判断参照许良中等的报道[3]：首先按切片中癌细胞染色强度计分：0分细胞无显色；1分呈淡黄色；2分呈棕黄色；3分呈棕褐色(染色深浅需与背景着色相对比)；再按切片中阳性癌细胞数所占的百分比打分：0分为阴性，1分为阳性癌细胞≤10%；2分为11%～50%，3分为50%～75%，4分为75%以上。染色强度与阳性细胞百分比的乘积>3分才算免疫反应阳性。

1.4 统计学处理

统计学处理采用SPSS11.0软件进行χ2检验，Spearman相关性分析，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎组织中Livin和Survivin蛋白的表达

鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎组织中Livin表达阳性率分别为61.25%(49/80)和16.67%(5/30)，两组间差异有统计学意义(χ2=17.352,P<0.05)；Survivin表达阳性率分别为68.75(55/80)和20.00%(6/30)，两组间差异有统计学意义(χ2=20.991,P<0.05)。

2.2 Livin和Survivin蛋白表达与鼻咽癌临床病理特征的关系

通过比较Livin和Survivin表达与临床病理特征之间的关系发现，Livin蛋白表达阳性在颈部淋巴结转移、远处转移、肿瘤复发、临床分期组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，在性别、年龄及T分期等组间差异无统计学意义(P>0.05)；Survivin蛋白表达在T分期、颈部淋巴结转移、远处转移、肿瘤复发及临床分期组间比较差异有统计学意义(P<0.05)，在性别、年龄等组间差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

表1 Livin和Survivin蛋白表达与鼻咽癌临床病理特征的关系

2.3 Livin和Survivin蛋白在鼻咽癌组织中表达的相关性

鼻咽癌组织中Livin的阳性表达率61.25%(49/80)，Survivin的阳性表达率为68.75%(55/80)，两者均为阳性者38例，经Spearman相关性分析，Livin和Survivin蛋白表达在鼻咽癌组织中表达呈显著正相关(γ=0.239，P=0.033)(表2)。

表2 鼻咽癌组织中Livin和Survivin蛋白表达的关系(例)

3 讨论

肿瘤的发生、发展与细胞凋亡的紊乱密切相关。凋亡受抑制将导致细胞存活时间延长，有利于转化突变的细胞生长积累，最终导致肿瘤的产生。细胞凋亡通路和p53、C-myc、Bcl-2家族、Smac、抑制凋亡蛋白家族(IAPS)及细胞内信号转导等通路构成1个复杂的网络对凋亡进行精细地调控。Livin是新近发现的1个IAPS家族成员，Ashhab等[4]通过RT-PCR证明Livin转录产物因剪接方式不同有2种mRNA亚型即Livinα和Livinβ。Livin抑制细胞凋亡作用主要通过其BIR区与Caspase结合，抑制Caspase酶的活性，尤其是抑制Caspase-3/-7和Caspase-9的活性，达到阻断凋亡受体及以线粒体为基础的凋亡途径而起作用。Livin在胚胎组织中存在，可能与生长发育有关，在正常成人的大多数终末组织中低表达或不表达[1]。研究显示在很多人类恶性肿瘤中Livin高表达，H-B Liu等[5]研究显示，在膀胱癌中，Livinα的表达率为39.58%(19/48)，在15例无肿瘤的组织中未见表达，其表达与肿瘤的复发密切相关。Ihab Adb-Elrahman等[6]亦通过动物模型的研究推断Livin在肿瘤发生学中有着重要作用，Livin可作为肿瘤治疗的重要靶点。我们的研究结果与之类似，在鼻咽癌组织中其表达(61.25%，49/80)显著高于鼻咽慢性炎组织(16.67%，5/30)，同时Livin的表达与颈部淋巴结转移、远处转移、肿瘤复发、临床分期呈显著的正相关，提示Livin蛋白可能参与了鼻咽癌的恶性演进过程，可作为反映鼻咽癌恶性程度的参考指标之一。

Survivin同样是IAP家族成员，是目前研究的热点。它可以调控细胞凋亡，通过直接阻滞Caspase-3和Caspase-7的作用而抗凋亡[7]，从而有利于细胞的异常增殖和恶性转化。另外它还具有调节细胞有丝分裂的功能，可对抗G2/M期凋亡的诱导，从而克服细胞凋亡的检查点，允许变异细胞通过有丝分裂异常增殖。Survivin在多数人类肿瘤中均有过表达[2]，我们的实验结果亦显示在鼻咽癌中它的表达显著高于鼻咽炎组织，提示在鼻咽癌发生的早期过程中可能Survivin已经被激活，并起了一定作用。目前有愈来愈多文献报道Survivin在癌组织中的表达与恶性肿瘤的侵袭和预后有关。我们的研究结果亦得到了类似结论，Survivin蛋白表达在T分期、颈部淋巴结转移、远处转移、肿瘤复发及临床分期呈显著正相关，提示了其与鼻咽癌恶性进展的密切关系。

从理论上分析，Livin与Survivn在抑制凋亡的机理上部分相似，如都会通过抑制Caspase酶的活性，尤其是抑制Caspase-3/-7和Caspase-9的活性，达到阻断凋亡受体及以线粒体为基础的凋亡途径而起作用，但两者的组织构型并不一致，作用的结果也不一样，如Livin的作用仅局限于调节细胞凋亡，而Survivin在肿瘤中既调节凋亡也调节细胞分化等。国内两者相关的报道，刘益飞等[8]在非小细胞肺癌中，Livin与Survivn两者无相关性；而赵丽华等[9]在胃癌中的研究显示两者呈显著正相关。我们的研究显示两者在鼻咽癌中为显著正相关，但两者仅是弱的正相关，说明两者在鼻咽癌的发生和进展中可能存在的相互协调促进的作用，存在着一定的联系。但作用机制上存在着差异，可能与基因的诱导因素、调节因素以及传导通路，以及不同肿瘤的发生进展机理上都存在差异，有待更基础和更具体的研究。

鼻咽癌的发生发展与肿瘤细胞凋亡机制受损密切相关，高表达的IAP蛋白使癌细胞凋亡耐受，这也是临床上化疗耐药、放疗不敏感等现象的重要原因之一。总之，Livin与Survivin的高表达在鼻咽癌的发生及发展中起了重要的作用，可能两者是鼻咽癌细胞凋亡信号传导网络中重要的一环，联合检测两者在鼻咽癌中的表达情况，有助于评价鼻咽癌的预后情况，并为鼻咽癌的基因靶向治疗提供了新的途径。

[1] Kasof GM，Comes BC.Livin，a novel inhibitor of apoptosis protein family member〔J〕.J Biol Chem,2001,276(5):3238.

[2] Zaffaroni N，Pennati M，Daidonge M G.Survivin as a target for new anticancer interventions〔J〕.J Cell Mol Med,2005,9(2):360.

[3] 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准〔J〕.中国癌症杂志，1996,6(4):229.

[4] Ashhab Y，Alian A，Polliack A，et al.Two splicing variants of a new inhibitor of apoptosis gene with different biological properties and tissue distribution pattern〔J〕.FEBS Lett,2001,495(4):56.

[5] H-B Liu，Chui-Ze Kong,Yu Zeng，et al.Livin may serve as marker for prognosis of bladder cancer relapse and a target of bladder cancer treatment〔J〕.UROLOGIC ONCOLOGY，2009,27(3):277.

[6] Ihab Adb-Elrahman，Klilah Hershko，Tzahi Neuman，et al.The inhibitor of apoptosis protein Livin (ML-IAP) plays a dual role in tumorigencity〔J〕.Cancer Res,2009,69(13):5475.

[7] Deveraux QL，Reed J C.IAP family proteins-suppressors of apoptosis〔J〕.Genes Dev,1999,13(3):239.

[8] 刘益飞，施公胜，刘俊华，等.凋亡抑制蛋白livin在人非小细胞肺癌中的表达以及和survivin表达的关系〔J〕.现代肿瘤医学，2010,18(2)：294.

[9] 赵丽华，赵文江，郝建军，等.Livin和Survivin在胃癌组织中表达及其临床意义〔J〕.现代中西医结合杂志，2009,18(8)：841.