HPLC–ELSD法测定食品中γ-氨基丁酸含量

徐自奥

（安徽省新星药物开发有限责任公司，合肥 230088）

张军忠

（合肥市庐江县质量监督技术所，合肥 231500）

赵成仕

（安徽国家农业标准化与监测中心，合肥 230051）

HPLC–ELSD法测定食品中γ-氨基丁酸含量

徐自奥

（安徽省新星药物开发有限责任公司，合肥 230088）

张军忠

（合肥市庐江县质量监督技术所，合肥 231500）

赵成仕

（安徽国家农业标准化与监测中心，合肥 230051）

建立了食品中γ-氨基丁酸的液相色谱蒸发光散射检测仪测定方法。该方法用水或10%甲醇提取样品，正己烷去油脂净化，然后用液相色谱／蒸发光散射检测仪测定。γ-氨基丁酸的浓度在0.01～0.5 mg／mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，相关系数r=0.999 8。食品中γ-氨基丁酸的检出限为0.01 g／kg，加标回收率在90%以上。该方法快速、灵敏、准确。

γ-氨基丁酸；蒸发光散射检测仪；液相色谱法

γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然活性成分，广泛存在于动植物体内。植物如豆属、参属、中草药等的种子、根茎和组织液中都含有γ-氨基丁酸。γ-氨基丁酸是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，它是中枢神经系统中很重要的抑制性神经递质，具有极其重要的生理功能，目前在医药、食品、饲料等工业中已有广泛应用。2009年卫生部第12号通告批准γ-氨基丁酸为新资源食品，使用范围为饮料、可可制品、巧克力和巧克力制品、糖果、焙烤食品、膨化食品，但不包括婴幼儿食品。GB 2760-2011［1］中规定γ-氨基丁酸可以作为食品用合成香料。

γ-氨基丁酸对电化学和紫外、可见光不灵敏，目前对食品中γ-氨基丁酸的测定主要是采用衍生化-色谱法、衍生化-氨基酸分析法、衍生化-毛细管电化学法等［2-9］。衍生化法易引入衍生剂、副产物等，影响色谱分离、污染仪器和形成干扰峰，同时难以保证衍生化程度完全一致，直接影响测定结果的准确性和重现性。笔者利用液相色谱-蒸发光散射检测技术［10］测定食品中的γ-氨基丁酸，该方法无须衍生化等特殊条件，测量精密度和准确度符合要求。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

超高压液相色谱仪：Waters®UPLC型，配蒸发光散射检测器，美国沃特世公司；

γ-氨基丁酸标准样品：含量为99%，美国Sigma公司；

乙醇、正己烷：分析纯；

乙腈：色谱纯；

实验用水为二次蒸馏水。

1.2 液相色谱条件

色谱柱：Waters超高压液相色谱柱C18（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；流动相：水-乙腈（体积比为90∶10）；喷雾器动力：65 %；漂移管温度：50 ℃；气体压力：2.76×105Pa（40 psi）；增益：50。

1.3 实验方法

一般样品直接称取1.00 g试样，加入10 mL蒸馏水，振荡混匀，超声15 min，离心10 min（转速8 000～10 000 r／min），取上清液，用 0.22 mm 滤头过滤进样。

含淀粉量大、遇水易成糊状的样品，称取1.00 g试样，加入10 %甲醇水溶液10 mL，振荡混匀，于常温水浴超声30 min，离心10 min（转速8 000～10 000 r／min），取上清液，用0.22 mm滤头过滤后进样。

含油脂的样品，按照一般样品处理方法处理，离心后取上清液5 mL，加入正己烷1 mL，剧烈振荡，取下液过滤进样。

2 结果与讨论

2.1 检测器的选择

由于γ-氨基丁酸的最大紫外吸收波长小于210 nm，没有荧光，而且对电化学响应不灵敏，液相色谱的紫外检测器、荧光检测器和电化学检测器等不能用来直接测定，应用衍生化技术则存在衍生物的稳定性差的问题。蒸发光散射检测器是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，适用于γ-氨基丁酸的测定。所以最终确定蒸发光散射检测器为检测器。图1为在测定条件下γ-氨基丁酸的蒸发光散射色谱图。

图1 γ-氨基丁酸的蒸发光散射色谱图

2.2 前处理方法

γ-氨基丁酸极易溶于水，一般样品直接用蒸馏水提取进样即可。但含淀粉量大的样品，遇水易成糊状，采取高速离心等方法效果不理想。采用10 %甲醇水溶液作提取液，试样不易成糊状。经试验，γ-氨基丁酸易溶于10 %甲醇水溶液中，在常温水浴超声30 min，提取效果较好。遇到含油脂样品，可以取处理好的上清液，加入正己烷去油脂。

2.3 线性关系和检出限

分别精密配制 0.01，0.03，0.06，0.10，0.30，0.50 mg／mL的γ-氨基丁酸溶液，在确定的仪器条件下分析，以γ-氨基丁酸的质量浓度X（mg／mL）为横坐标，以γ-氨基丁酸的色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得到回归方程Y=1 774X，回归系数r2=0.999 8，表明线性关系良好。当信噪比（S／N）=3时，测得仪器检出限为 0.001 mg／mL，食品中γ-氨基丁酸的检出限为0.01 g／kg。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的食品作为空白基质，分别添加0.5 mg／mL标液0.2，0.4，1.0 mL共3组，每组6份，进行平行试验，按照实验方法进行前处理和仪器分析测定，计算回收率和相对标准偏差，结果见表1。由表1可知，该方法的回收率为90%以上，相对标准偏差小于4%，表明本法具有较高的测量精密度和准确度。

表1 方法的精密度和回收率（n=6）

3 结语

运用蒸发光散射检测技术测定食品中的γ-氨基丁酸，浓度在0.01～0.5 mg／mL范围内线性良好，该方法具有样品前处理步骤简单，测定快速、结果准确、灵敏度高等优点。

［1］GB 2760-2011 食品安全国家标准食品添加剂使用标准［S］.

［2］夏虹，彭茂民，周有祥.发芽米中γ-氨基丁酸含量的测定［J］.食品与机械，2009，25(4)： 100-102.

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［4］赵大伟，普晓英，曾亚文，等.大麦籽粒γ-氨基丁酸含量的测定分析［J］.麦类作物学报，2009，29(1)： 69-72.

［5］孔令瑶，汪云，曹玉华.毛细管电泳-电化学法对发芽黑米胚芽中γ-氨基丁酸含量的检测［J］.分析测试学报，2008(5)：527-530.

［6］郑洪健，叶立斌，励建荣，等. 2，4-二硝基氟苯柱前衍生RT-HPLC 法测定γ-氨基丁酸［J］.中国粮油学报，2011，26(4)：104-106.

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Determination ofγ-Aminobutyric Acid in Food by HPLC-ELSD

Xu Ziao
（Anhui New Star Pharmaceutical Development Co.， Ltd， Hefei 230088， China）

Zhang Junzhong
（Hefei Lujiang Municipal Bureau of Quality and Technical Supervision， Hefei 230000， China）

Zhao Chengshi
（Anhui Country Agriculture Standardization and Monitor Center， Hefei 230051， China）

The method of HPLC-ELSD for determination ofγ-aminobutyric acid in food was built，which used water or 10% methyl alcohol for the extraction agent,n-hexane for degreasing purification, and then carried out by HPLC-ELSD.The concentration ofγ-aminobutyric acid appeared good linear relationship with the chromatographic peak area in the range of 0.01-0.05 mg／mL, the correlation coefficient was 0.999 8, the detection limit ofγ-aminobutyric acid was 0.01 g／kg,and the recovery was over 90%. This method was quick, sensitive and accurate.

γ-aminobutyric acid; evaporative light-scattering detector; liquid chromatography

O657.7

A

1008–6145（2012）05–0049–03

doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2012.05.015

联系人：赵成仕； E-mail： zhaochengshi2099@126.com

2012-06-16