高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量

彭朝霞，杨朝莲，熊然英，晏祥杰

(六盘水市药品检验所，贵州 六盘水 553001)

岩陀是虎耳草科鬼灯檠属植物西南鬼灯檠(Rodgersia sambucifolia Hemsl)的根茎，性味:苦、涩，凉;功能主治:清热凉血，调经止痛。用于肠炎，痢疾，痛经，月经过多，风湿性关节炎，跌打损伤;外用治外伤出血，阴囊湿疹［1］。其根茎富含虎耳草素(Bergenin)又称岩白菜素，主要作用是镇咳祛痰，用于慢性支气管炎［2］。近来的药理实验发现岩白菜素除具有镇痛抗炎作用外［3］，还具有抗炎、护肝、抗溃疡、提高免疫等作用 。岩白菜素已制成各种单方或复方制剂用于临床。现在的岩陀均为野生药材，生长在1 600～2 200米的海拔高度。主要分布在四川西南部、贵州(威宁、六盘水)和云南北部，贵州省六盘水市等地还将羽叶鬼灯擎(Rodgersia pinnata Franch)的根茎作为岩陀入药。为更好地对岩陀质量进行控制，我们采用高效液相色谱法对岩陀中岩白菜素的含量进行了分析。

1 仪器与试药

Waters1525高效液相色谱仪;Waters2487紫外检测器;Brezz色谱工作站(版本:3.3);岛津UV-2550型紫外-可见分光光度计。

样品1:羽叶鬼灯擎(水城县勺米乡鱼塘村);样品2:西南鬼灯擎(水城县勺米乡严家垭口);样品3:西南鬼灯擎(水城县勺米乡范家寨村);样品4:西南鬼灯擎(水城县勺米乡三棵桩);样品5:西南鬼灯擎(水城县哈青村);样品6:西南鬼灯擎(水城县韭菜坪)。所有样品均经贵阳中医学院中药系陈德媛教授鉴定。

岩白菜素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111532-200202)。

乙腈为色谱纯;水为纯净水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流速:1.0 mL/min;柱温:25℃;流动相:乙腈-水(10∶90);检测波长:274 nm。理论板数按岩白菜素峰计应不低于5 000。结果表明，在该色谱条件中，岩白菜素峰和其他成分峰均能完全分离，分离度大于1.50，符合要求。典型色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 对照品溶液的制备

精密称取岩白菜素对照品(五氧化二磷减压干燥20 h)49.21 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得岩白菜素对照品储备液(每1 mL含岩白菜素0.492 1 mg)。精密量取储备液4 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得岩白菜素对照品溶液(每1 mL含岩白菜素196.84 μg)。

2.3 供试品溶液的制备

取岩陀粉末(过40目筛)0.15 g，精密称定，加入甲醇50 mL，称定重量，超声提取40 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密量取岩白菜素对照品储备液0.1，0.5，1，2，3，4，5，6，7 和 8 mL 分别置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度。分别精密量取10 μL注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件进行试验。以进样量(X，μg)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线。得线性回归方程:Y=1 340 000 X+21 471，r=0.999 8。结果表明，岩白菜素在进样量0.049 21～3.396 8 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验

取岩白菜素对照品溶液10 μL注入色谱仪进行试验，重复6次，峰面积RSD为0.5%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验

取岩陀粉末(样品2)约0.15 g，精密称定，按2.3项下方法制备供试品溶液。分别于0，2.5，5，7，9.5，12，14.5，17，19.5，22，24，26，28 h 精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。0～24 h峰面积RSD为1.9%，表明岩白菜素室温下24 h内具有良好的稳定性。

2.7 重复性试验

分别称取岩陀(样品2)粉末6份，每份0.15 g，精密称定后按2.3项下制备供试品溶液，取10 μL进样测定，以干燥品计算平均含量和RSD。岩白菜素的平均含量为10.06%，RSD为1.86%，表明该方法的重复性良好。

2.8 回收率试验

精密吸取0.492 1 mg/mL岩白菜素对照品溶液2，5，10 mL各3份，分置9个具塞锥形瓶中，水浴挥干。分别加入精密称定的样品2粉末(水分9.47%)约0.1 g，按2.3项下制备供试品溶液，吸取10 μL进样测定，计算回收率，结果见表1。岩白菜素的平均回收率为99.06%，RSD为1.56%。

表1 回收率试验结果

2.9 样品含量测定

取岩陀粉末约0.15 g，精密称定，按2.3项下的方法制备样品溶液，同时分别测定每个样品的水分，以干燥品计算样品中岩白菜素的含量。样品1～6的岩白菜素含量依次为7.63%，10.05%，8.66%，9.38%，6.16%和8.40%。

3 讨论

3.1 波长的选择

相关文献记述岩白菜素检测波长有220，275和260 nm等［5-8］，为选择合适的检测波长，对岩白菜素对照品溶液(22.4 μg/mL)进行了紫外光谱扫描。结果表明，岩白菜素在306.2与274.0 nm波长处有最大吸收，且274.0 nm波长处吸光度较大，故选用274 nm为检测波长。

3.2 流动相选择

文献记述检测岩白菜素的流动相有甲醇-水［5］、甲醇-0.2%磷酸［6］、1%醋酸溶液(用三乙胺调 pH 3.7)-甲醇-乙腈［8］等，比较岩白菜素在甲醇-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸各流动相条件下的检出效果，流动相为乙腈-水(10∶90)时，岩白菜素分离效果好，检出杂质峰较少，且与相邻杂质峰分离度较好，响应值较高，更利于岩白菜素含量的检测，故选用乙腈-水(10∶90)作为流动相。

3.3 提取方法选择

岩白菜素在甲醇中溶解，在水和乙醇中微溶［2］，故采用甲醇作为提取溶剂。

比较了30 min回流提取、20，40，60和90 min超声提取的效果。超声40 min提取样品，岩白菜素含量较高;超声20 min提取液中岩白菜素的含量较低;其余三种方法提取效果无显著差异，为使方法简便易行，又能尽量将岩白菜素提取出来，故使用超声40 min提取样品。

4 结论

目前岩陀的植物资源短缺，市场需求量较大，我市岩陀的岩白菜素含量在6%以上，云南产(为岩陀高产区)岩陀的岩白菜素含量大约在3%(此数据为贵州省重点实验室提供)，在我地民间有将羽叶鬼灯擎作为岩陀使用的情况，其疗效与西南鬼灯擎差不多［9］，且其根茎中所含岩白菜素与正品岩陀所含岩白菜素相差不大，故可将羽叶鬼灯擎做为岩陀的一个药用资源使用，以扩大药源，解决野生岩陀资源短缺的问题。

本文建立了岩陀中的岩白菜素高效液相色谱测定方法，并对不同产地岩陀及替代品中的岩白菜素含量进行了测定，建议在岩陀质量标准中增加岩白菜素含量测定。

［1］ 《中药辞海》编写组.中药辞海［M］.第二卷.北京:中国医药科技出版社，1996:817-818.

［2］ 中国药典［S］.一部.2005:278.

［3］ 黄丽萍，吴素芬.岩白菜素镇痛抗炎作用研究［J］.中药药理与临床，2009，25(3):24.

［4］ 夏从龙，刘光明，马晓匡.岩白菜素的研究进展［J］.时珍国医国药，2006，17(3)B:432-433.

［5］ 杨怀镜，姚宏春，张全望.HPLC法测定岩白菜素和复方岩白菜素片的含量［J］.中国药事，2003，17(3):171.

［6］ 王晓琼，康红英，陈声晶.RP-HPLC法测定地茶止咳露中岩白菜素的含量［J］.中国药事，2010，24(12):1224.

［7］ 马晓云，宋愿智，汤利荣，等.卡虎素含量测定的实验研究Ⅰ.岩白菜素含量测定的实验研究［J］.中国生化药物杂志，1993(4):56-57.

［8］ 张玉华.复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸氯苯那敏的含量测定［J］.中国药业，2008，17(21):25.

［9］ 贵州中药资源普查办公室、贵州中药研究所.贵州中药资源［M］.北京:中国医药科技出版社，1992:693.