天芎头风颗粒对偏头痛大鼠的防治作用及其机制

杨子谊 吴红彦 王红蕾 (甘肃中医学院 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃 兰州 730000)

偏头痛的发病机制与血管和神经机能障碍有关。神经生化的代谢紊乱是形成偏头痛发病恶性循环的重要因素〔1〕。现代研究发现，偏头痛与一氧化氮(NO)、降钙素基因相关肽(CGRP)以及β-内啡肽(β-EP)密切相关。本实验研究天芎头风颗粒对偏头痛模型的镇痛作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康SD大鼠，SPF级别，70只，雌雄各半，体重180～220 g，由甘肃中医学院SPF实验室提供，合格证号：SYXK(甘)2011～0001。

1.1.2 药物与试剂 天芎头风颗粒制剂，由西安新通药物有限公司生产，每克颗粒含有10.35 g生药，批号：20110317;硝酸甘油(NTG)注射液，1 ml∶5 mg，北京益民药业有限公司生产，批号：20100522;琥珀酸舒马普坦片，100 mg/片，天津华津制药有限公司，批号：186911T;正天丸，三九医药股份有限公司，批号：1108014H。NO测试盒(硝酸还原酶法)，南京建成生物工程研究所，批号：20111103;CGRP放免分析试剂盒，北京华英生物技术研究所生产，批号：20111201;β-EP放免分析试剂盒，北京华英生物技术研究所生产，批号：20111203。

1.1.3 实验器材 HANGPING电子秤，型号：JY4001，上海精科公司天平仪器厂。Biofuge strators高速冷冻离心机，产地美国。UV-2401PC紫外分光光度计，产地美国。γ-911全自动放免计数仪，中国科技大学实业总公司生产。

1.2 方法

1.2.1 分组 所有动物在同一条件下适应性喂养，按照随机性原则分为空白组、模型对照组、舒马普坦对照组、正天丸对照组及天芎头风高、中、低剂量组，每组10只。

1.2.2 给药 空白组和模型对照组大鼠每天灌胃蒸馏水10.0 ml/kg;正天丸组每天灌胃正天丸1 339.31 mg/kg;舒马普坦组每天灌胃琥珀酸舒马普坦4.44 mg/kg;天芎头风高、中、低组分别按566.426、283.213、141.607 mg/kg(相当于60 kg成人日用量的2倍、1倍、1/2倍)，每天固定时间灌胃1次，连续7 d。给药过程中测定每只大鼠的体质量变化。

1.2.3 造模 连续灌胃给药7 d，第7天给药后30 min造模。参照Cristina等〔2〕研究的方法，按照预定除空白组给予蒸馏水之外，其余各组分别皮下注射NTG注射剂10 mg/kg，注射区定位于右肩皮下注射，可复制出较为理想的偏头痛模型〔3〕。造模后3 min左右，动物出现双耳发红、前肢频繁挠头、爬笼次数增多、烦躁不安等现象。此现象持续约3 h，继而出现蜷卧、活动减少状态，表明偏头痛动物模型复制成功。

1.2.4 取材与处理 动物皮下注射NTG注射剂4 h后，取脑，在冰盘上分离出脑干，制作脑干匀浆液，4℃下离心15 min(3 000 r/min)，取上清－20℃保存待测。

1.2.5 观察指标 NO的测定采用紫外分光光度法，β-EP、CGRP的测定采用放射免疫分析法(测定步骤按照试剂盒说明书进行)，由自动γ计数仪器直接读出结果。

1.3 统计学处理 运用SPSS17.0统计软件分析，先进行正态分布和方差齐性检验，结果以±s表示，各组间进行单因素方差分析，并作LDS检验。

2 结果

2.1 天芎头风颗粒对偏头痛模型大鼠脑组织NO、CGRP含量的影响 见表1。皮下注射NTG注射液后，模型组大鼠组织中NO、CGRP含量升高，与空白组比较显著差异(P＜0.01);药物治疗后，天芎头风各剂量组和舒马普坦组、正天丸组NO、CGRP含量降低，与模型对照组比较差异显著(P＜0.01)，与空白组比较没有差异(P＞0.05)。见表1。

2.2 天芎头风颗粒对偏头痛模型组大鼠脑组织β-EP含量的影响 皮下注射NTG后，模型对照组大鼠组织中β-EP含量降低，与空白组比较均有显著性差异(P＜0.01);经过药物治疗后，天芎头风组和舒马普坦组、正天丸组CGRP含量升高，与模型组比较均差异显著(P＜0.01)，与空白组比较没有差异(P＞0.05)。见表1。

表1 各组大鼠脑组织NO、CGRP、β-EP含量的比较(±s)

表1 各组大鼠脑组织NO、CGRP、β-EP含量的比较(±s)

与模型对照组比较：1)P＜0.01;与空白组比较：2)P＜0.01

组别 n NO(μmol/g·prot) CGRP(pg/g) β-EP(pg/g)空白组9 2.52±1.60 127.94±48.88 397.94±32.15模型对照组 8 4.77±3.782) 222.12±40.492)302.61±38.092)正天丸组 8 2.38±0.851) 158.27±18.281)411.90±59.251)舒马曲坦组 8 2.27±0.621) 134.71±14.461)422.59±42.851)天芎头风低剂量组 7 2.53±0.871) 166.48±48.911)399.63±50.311)天芎头风中剂量组 8 2.45±0.781) 151.10±34.141)404.23±48.551)天芎头风高剂量组 8 2.39±0.712) 146.17±46.241)408.45±45.491)

3 讨论

天芎头风颗粒为吴红彦教授经过多年临床实践验证，并结合现代中药化学、中药药理学研究成果，以及相关药效学实验指标，通过拆方分析研究所得，方药选用天麻、川芎等七味中药为主要成分。偏头痛有着病程持久、顽固、反复的特点。从古至今，各医家对偏头痛的发病原因皆认为主要在感受外邪，情志内伤，饮食不节，久病致瘀的基础上造成肝、脾、肾等脏腑功能失调，风袭脑络，痰浊阻滞，瘀血阻络所引起。所以，祛风活血定痛法当为偏头痛的主要治法。天芎头风颗粒处方中，川芎入少阳经，又能通行十二经脉，上行头目，祛一切风，调一切气，而止一切头痛;天麻，入足厥阴肝经，息肝风，平肝阳，祛风通络，为治偏头痛、肝阳头痛、痰浊头痛之要药;二药相配既增强平肝、潜阳、解痉、通络、止痛之效，又可祛风散邪、醒脑通窍。

NO作为一种特殊的神经递质已引起了人们的广泛关注，它兼有神经递质和效应分子的双重功效〔4〕。NO在体内既直接扩张血管又促使CGRP等血管活性物质的释放，触发血管周围神经源性炎症，直接或间接引起神经源性血管扩张，参与偏头痛的发作〔5〕。CGRP在疼痛感觉调控中也发挥重要作用，CGRP过量释放和由它产生的神经性炎症被认为是偏头痛疼痛的病理生理基础〔6〕。β-EP是体内镇痛系统的主要递质，具有吗啡样的镇痛作用。β-EP的减少对脑干蓝斑的抑制减弱，使多种血管活性物质释放，导致脑血管舒缩功能紊乱，进而促使偏头痛发作〔7〕。本实验表明天芎头风颗粒可使由NIG诱发的偏头痛模型大鼠脑组织中NO、CGRP大量生成水平降低，使β-EP大量减少水平升高，从而降低神经性炎症、升高镇痛系统的递质含量，使之趋于生理状态下的平衡水平，以缓解偏头痛症状。

1 赵永烈，王玉来.芎芷地龙汤对偏头痛模型动物血液和脑干中β-EP、CGRP 的影响〔J〕.世界中西医结合杂志，2009;4(7)：473-5.

2 张双全.偏痛宁片的主要药效学实验研究〔J〕.中国实验方剂学杂志，2009;15(5)：71-3.

3 Tassorelli C，Creco R，Wang D，et al.Nitroglycerin induces hyperalgesia in rats-a time-course study〔J〕.Eur J Pharmacol，2003;464(2-3)：159.

4 杜艳芬，王纪佐.偏头痛发病机制研究进展〔J〕.中国临床神经学，2002;10(3)：314-7.

5 李佳川，孟宪丽.中药防治偏头痛的药效研究思路探讨〔J〕.中药药理与临床，2010;26(5)：165-7.

6 任 旭，牛争平.降钙素基因相关肽在偏头痛发病机制中的研究进展〔J〕.中西医结合心脑血管病杂志，2004;2(4)：229-31.

7 孙红梅.针刀松解法对第三腰椎横突综合征家兔5-HT和β-EP以及局部组织病理学的影响〔J〕.辽宁中医杂志，2011;38(1)：1-3.