猴头菇多糖对小鼠血清抗氧化能力的影响

杜志强，杨晨晨，王建英

（内蒙古科技大学 数理与生物工程学院，内蒙古 包头 014010）

猴头菇（Hericium erinaceus）是一种重要的药食两用真菌，它具有“性平、味甘，益五脏，助消化，滋补身体等功效”，而且，在历代的中医典籍中都有广泛记载[1]。随着现代生物化学以及医学的快速发展，针对于微生物多糖功能方面的研究，越来越广泛而且深入；目前，根据现有的关于多种微生物多糖（灵芝多糖，香菇多糖，茯苓多糖，银耳多糖等）的研究结果可以确定：真菌多糖一般都具有免疫调节、抗氧化、抗病毒、消炎、降血糖、降血脂、抗辐射、耐缺氧等方面的功能[2]；同时，猴头菇又是一种容易培养、分布广泛的真菌，因此，针对于猴头菇多糖的开发价值、应用潜力、市场前景良好，也可以为临床多糖类药品、保健品的开发应用提供实验支持。本文旨在通过分离纯化获得猴头菇多糖，并且研究多糖对小鼠血清抗氧化能力的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与动物

猴头菇：购自包头市农贸市场。

小白鼠（体重18 g～22 g，雌雄兼有）：属包头医学院实验动物中心提供的清洁级实验动物。

1.2 实验药品与试剂

SOD（超氧化物歧化酶）试剂盒、CAT（过氧化氢酶）试剂盒、MDA（丙二醛）试剂盒：南京建成生物工程有限公司生产；其他试剂均为国产分析纯试剂。

1.3 方法

1.3.1 粗多糖的分离提取

将买来的猴头菇剪碎，在干燥箱中50℃过夜干燥，并且粉碎后充分研磨；称取干粉适量，加30倍体积的蒸馏水，在80℃下充分提取3 h，之后将提取液经过3000 r/min离心15 min后取上清液，将上清液用旋转蒸发仪浓缩到原体积的1/3，再用3倍体积的无水乙醇沉淀粗多糖[3]，并且静置过夜；次日经4000 r/min离心10 min后取沉淀，将沉淀进行真空冷冻干燥，即为猴头菇粗多糖。

1.3.2 粗多糖的纯化

取干燥后的粗多糖适量（5 g～10 g），用100 mL蒸馏水充分溶解，进行抽滤除杂质，滤液用Sevage法除去蛋白质；除去蛋白质杂质的透析液用3倍体积的无水乙醇进行多糖沉淀，并且将离心后的沉淀进行真空冷冻干燥，即为猴头菇多糖[4]，命名为HeP，将HeP用蒸馏水溶解，按要求配成不同剂量的溶液，即可进行体内试验。

1.3.3 动物分组与多糖剂量的设定

小鼠按照体重随机分为猴头菇多糖的高剂量组（HeP 400 mg/kg）、中剂量组（HeP 200 mg/kg）、低剂量组（HeP 50 mg/kg）、正常对照组4组，每组设置多于12只数目的小白鼠，以保证实验结束时有足够的采样点；而且，要求雌雄各半，试验期间按照性别一组两笼，自由饮食饮水[5]。之后，根据体重将猴头多糖组按照设定的剂量每天定时灌胃一次，正常对照组以蒸馏水灌胃，试验持续4周。

1.4 猴头菇多糖对小鼠血清抗氧化能力的影响作用

动物连续给药4周后，于末次给药12 h之后，将4组小鼠采用摘除眼球的方法取血，经过3000 r/min低温低速离心15 min，获得血清[6]。之后马上按照试剂盒的要求测定4组小鼠血清中SOD、CAT、MDA的含量，各项试验均利用统计分析软件SPSS（版本12.0）进行数据分析，要求结果以的形式表示。

2 结果

2.1 多糖的提取得率与多糖含量

按照设计的提取方法，从500 g猴头菇干粉（平均分成10份，每份提取3次）中提取粗多糖，共收集到粗多糖50.45 g，平均得率为10.09%；之后将50.45 g粗多糖全部进行纯化，共收集到多糖8.33g，平均得率为16.51%。

2.2 血清SOD含量的测定结果

血清SOD含量的测定结果如表1所示。

表1 SOD含量的测定结果Table 1 Detection result of the SOD content

从表1血清SOD含量的测定结果可见：猴头菇多糖可以明显提高小鼠血清中SOD的含量；其中，猴头菇多糖高剂量对血清SOD含量的提高作用与对照组相比，差异极显著；中剂量多糖对SOD含量的提高作用与对照组相比，存在显著差异。

小鼠血清SOD含量的变化趋势表明：与正常对照组相比较，高剂量猴头多糖使小鼠血清的SOD含量提高了57.5%，中剂量多糖使小鼠血清的SOD含量提高了39.9%。

表2 CAT含量的测定结果Table 2 Detection result of the CAT content

2.3 血清CAT含量的测定结果

血清CAT含量的测定结果如表2所示。

如表2血清CAT含量的测定结果所示：猴头菇多糖可以明显提高小鼠血清中CAT的含量；其中，猴头菇多糖高剂量对血清CAT含量的提高作用与对照组相比，差异极显著。小鼠血清CAT含量的变化趋势表明：与正常对照组相比较，高剂量猴头多糖使小鼠血清的CAT含量提高了53.3%。

表3 MDA含量的测定结果Table 3 Detection result of the MDA content

2.4 血清MDA含量的测定结果

血清MDA含量的测定结果见表3。

如表3血清MDA含量的测定结果所示：猴头菇多糖可以明显降低小鼠血清中CAT的含量；其中，猴头菇多糖高剂量对血清MDA含量的降低作用与对照组相比，差异显著。小鼠血清MDA含量的变化趋势表明：与正常对照组相比较，高剂量猴头多糖使小鼠血清的MDA含量降低了33.9%。

3 结论

SOD是机体清除各类氧自由基的重要酶类，能够催化氧自由基的歧化反应，对需氧生物体起到保护作用；CAT是机体清除过氧化氢的重要酶类，可以使机体细胞避免遭受过氧化氢的毒害，是机体防御体系的关键酶之一[7]；MDA是机体膜脂发生过氧化的直接产物，因此，测定机体SOD、CAT活性以及MDA的含量可以间接反映机体清除自由基、清除过氧化氢、抗脂质过氧化的能力，从而可以衡量机体的组织、细胞的抗氧化能力[8]。

本试验通过利用分离纯化得到的猴头菇多糖，进行了对小鼠血清抗氧化能力的影响作用的研究，根据实验结果可以得出如下结论：猴头菇多糖可以明显提高小鼠血清的SOD和CAT的含量，具有良好的抗氧化能力；同时，猴头菇多糖可以明显降低小鼠血清MDA的含量，其具有较强的抗脂质过氧化的能力。因此，针对于猴头菇多糖的开发潜力和市场前景极佳。

[1]杨炎,周昌艳,王晨光,等.猴头多糖调节机体免疫功能的研究[J].食用菌学报,2000,7(1):19-22

[2]傅明辉,林总华.沙棘果水溶性多糖的分离纯化、组分分析及抗氧化学性的研究[J].食品科学,2002,23(3):73-75

[3]周林珠,杨祥良,周井炎,等.多糖抗氧化作用研究进展[J].中国生化药物杂志,2002,23(4):210-212

[4]崔荣军,曹颖莉,赵璇.螺旋藻多糖对老龄小鼠脑中SOD、MDA的影响[J].中国初级卫生保健,2003,17(4):68-69

[5]段玉峰,韩果萍.马齿苋多糖组分的分离纯化及抗氧化活性研究[J].食品科学,2005,26(3):225-228

[6]丁利君,吴倩萍.黄芪多糖的提取及其对自由基的清除作用[J].食品与机械,2003(4):7-9

[7]杨瑞欣.枸杞多糖提取工艺及抗氧化活性的研究与探讨[J].化学工程与装备,2010(9):42-43

[8]程仕伟,于晓明,张玉香.紫贻贝多糖提取及其体外抗氧化活性研究[J].食品工业科技,2010,31(9):132-134