盐酸贝那普利片生物等效性研究

刘 肃，江伟健

（1.广州市药品检验所，广东 广州 510610；2.广州军区广州总医院，广东 广州 510060）

盐酸贝那普利（benazepril hydrochloride），化学名称：3－［（1－乙氧羰基－3－苯基－（1S）－丙基）氨基］2，3，4，5－四氢－2－氧代－1H－1－（3S）苯并氮杂卓－1－乙酸盐酸盐。盐酸贝那普利（商品名：洛汀新）是世界卫生组织推荐的一线抗高血压药物，为血管紧张素转换酶抑制药，在体内转换成贝那普利拉后生效。原药抑制血管紧张素转换酶活性的作用仅为后者的千分之一。本品特点为出现作用慢，但维持作用时间长，对心功能指标有良好改善作用，能改善充血性心力衰竭的临床症状及运动能力。

王雪丁等［1－2］建立了灵敏度较高、准确度好的 HPLC方法，用外标法同时测定人血浆中贝那普利及其代谢物浓度，本实验采用该分析方法，研究了24名健康受试者分别服用受试制剂与参比制剂后的原形与代谢物的药动学特征，并对原形与代谢产物贝那普利拉的生物等效性进行评价。

1 材料与仪器

1.1 药品、试剂

受试制剂：贝那普利片（广州南新制药有限公司，批号为03107，规格为10mg／片）；参比制剂：贝那普利片（商品名：洛汀新）（诺华公司，批号为1370628，规格为10mg／片）；贝那普利化学对照品：由Ranbaxy Laboratories Limited生产，广州南新制药有限公司提供，批号：1349122，纯度：99.6%，用作标准对照品。贝那普利拉对照品：由Ranbaxy Laboratories Limited生产，广州南新制药有限公司提供，批号：1349122，纯度：98.45%，用作标准对照品。甲醇、乙腈，色谱纯，美国Ficher Scientific产品；其余试剂均为市售分析纯。空白血浆，由广州市血液中心提供。

1.2 仪器

高效液相色谱仪系统：1525Binary HPLC泵、717Plus自动进样器、2487Dualλ吸收检测器、B reeze色谱工作站，美国Waters公司产品；AE－260电子分析天平，梅特勒仪器（上海）有限公司产品；XW－80型旋涡混合器，上海医科大学仪器厂产品；C8固相萃取柱，印度Analchem Pvt.Ltd产品。

2 方法

2.1 色谱条件

分析柱：Hypersil BDS C18柱（5μm，4.6mm×300mm）（大连依利特科学仪器有限公司产品）；流动相：0.02mol·L－1磷酸二氢钾缓冲液－乙腈（7∶3）（调pH2.6）；流动相用直径50mm、孔径0.5μm的微孔膜过滤，使用前超声脱气；流量：1～6min，1mL／min；6～7min，1.3mL／min；7～23min，保持1.3mL／min；23～23.5min，1mL／min；柱温：室温；紫外检测波长：237nm。

2.2 给药及血样采集

选择24例年轻成年健康男性志愿者为受试者，年龄（23.4±2.4）岁，身高（172.0±5.1）cm，体重（62.4±6.6）kg，各受试者均签署知情同意书。所有受试者均经体检证实无胃肠道疾病，心、肝、肾功能正常，且试验前1个月内未服用任何药物。服药前12h禁食，试验期间禁烟酒、禁食含咖啡因的饮料、避免剧烈运动，服药后禁食4h，统一给予低脂膳食。试验期间没有服用其它药物。24例受试者自身对照，随机交叉分成A、B两组。

单次双周期给药，清晨7：30空腹口服药物40mg，用250mL温开水送服。第一轮A组服参比制剂，B组服受试制剂。于服药前0h、服药后0.16，0.33，0.5，0.67，0.83，1，1.25，1.5，1.75，2，2.5，3，4，6，8，12，24，36，48h时间点依次取血，每次5mL。将血样品置于肝素化试管中，离心（4000rpm，10min），分离出血浆，－30℃避光保存至测定。第二轮于停药14d后，A组服受试制剂，B服参比制剂。

2.3 预处理

取血浆样本0.9mL于10mL离心管中，加入0.02mol／L磷酸二氢钾缓冲液（pH 6）1mL酸化，涡旋30s，静置10min；C8固相萃取小柱先以甲醇3mL、水3mL淋洗，以活化柱子，然后将混匀处理过的血浆样本移入C8固相萃取小柱，用1mol／L1乙酸3mL、水3mL、甲醇2mL洗涤，最后用2%氨水甲醇2mL洗脱，收集洗脱液；于真空干燥箱干燥后，加甲醇－水（1∶1）200μL溶解，涡旋20s，移入进样管，进样量为50μL。

2.4 标准曲线制备

取10mL具塞离心管，分别加入空白血浆0.9mL，再精密加入贝那普利及贝那普利拉溶液适量，使之浓度分别为0.06，0.1，0.25，0.5，1，1.5，2μg／mL，按上述方法处理，记录色谱图。分别以已知贝那普利及贝那普利拉浓度为横坐标，贝那普利及贝那普利拉色谱峰面积为纵坐标，绘得2条标准曲线，直线回归得相关系数、回归方程。

2.5 精密度实验

在同日，用正常人空白血浆制成每1.0mL含贝那普利及贝那普利拉低、中、高3个浓度（0.1，0.5，1.5μg）的质量控制样品，每一浓度进5样本，求得日内相对标准差。另于不同工作日，对贝那普利及贝那普利拉0.1，0.5，1.5μg／mL的样品，以上述方法处理，连续测定5天，得日间相对标准差。贝那普利拉日内RSD≤8.5% ，日间RSD≤6.0%。

2.6 药动学数据处理

采用DAS Ver2.0软件计算两者的药动学参数。以实测值计算Cmax、Tmax；以末端相血药浓度的对数值对时间进行回归，求得斜率 Ke及t1／2；运用梯形法计算AUC0→t，进而求得试验制剂的相对生物利用度。

3 结果

3.1 受试者血浆样本贝那普利／贝那普利拉浓度测定结果

试验过程中，有1例受试者因私人原因退出试验，其余受试者顺利完成试验。采用上述方法检测23例受试者血浆中贝那普利／贝那普利拉的浓度。每轮血浆样品获得后即进行分析，避免长期冻存。

3.2 药动学参数

23名健康受试者口服单剂量40mg贝那普利片后的主要药动学参数：对于原药贝那普利，参比制剂与受试制剂的Cmax分别为（1346.9±442.9）ng／mL及（1302.5±340.6）ng／mL；Tmax分别为（0.4±0.1）h及（0.4±0.2）h；t1／2分别为（0.9±0.7）h及（0.7±0.3）h；AUC0→t分别为（928.7±235.4）ng／mL·h及（919.8±220.7）ng／mL·h；AUC0→∞分别为（978.6±246.8）ng／mL·h及（951.5±223.）ng／mL·h；MRT分别为（0.8±0.1）h及（0.8±0.2）h，受试制剂相对于参比制剂生物利用度F为（103.0±25.9）%。

对于代谢物贝那普利拉，参比制剂与受试制剂的Cmax分别为（799.5±181.6）ng／mL及（783.7±240.5）ng／mL；Tmax分别为（1.3±0.3）h及（1.2±0.4）h；t1／2分别为（4.1±1.6）h及（4.2±1.3）h；AUC0→t分别为（3621.8±940.0）ng／mL·h及（3503.7±1055.0）ng／mL·h；AUC0→∞分别为（4034.6±1059.6）ng／mL·h及（3846.1±1111.1）ng／mL·h；MRT分别为（4.3±0.9）h及（4.4±1.1）h；受试制剂相对于参比制剂的AUC0→t的比值为（97.6±19.6）%。

试验制剂的相对生物利用度为（102.99±25.88）%。方差分析结果显示，主要药动学参数在2种制剂之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

3.3 生物等效性分析

2000年版中华人民共和国药典未要求对除Cmax、AUC0－t、AUC0→∞外的其它参数如 Tmax等进行统计分析。受试制剂与参比制剂的Cmax、AUC0－t、AUC0→∞经对数转换后等效界法双向单侧t检验进行生物等效性评价，等效标准Cmax为70%～143%，AUC0－t、AUC0→∞为80%～125%。

生物等效性检验显示，对于原药贝那普利，受试制剂与参比制剂各参数的90%可信限Cmax为88%～111.9%；AUC0－t为90.7%～110.0%；AUC0→∞为89.6%～107.6%，对于代谢物贝那普利拉，受试制剂与参比制剂各参数的90%可信限Cmax为 90.8% ～105.0%；AUC0－t为 90.3% ～104.4%；AUC0→∞为90.0%～104.9%，提示这两种制剂生物等效。

4 讨论

对于贝那普利，受试制剂相对于参比制剂的人体生物利用度为（103.0±25.9）%（n＝23），经方差分析，显示本试验23例健康男性受试者交叉口服两种盐酸贝那普利片所得原药主要药代动力学参数之间无显著性差异（P＞0.05）；但因贝那普利是前体药物，需经肝脏水解为二元酸贝那普利拉才能发挥强而持久的降压作用，所以还需考察两种制剂的活性代谢物贝那普利拉的药动学参数。结果表明该代谢物的主要药代动力学参数之间亦无显著性差异（P＞0.05），受试制剂相对于参比制剂的AUC0→t的比值为（97.6±19.6）%。方差分析显示，无论是原药还是代谢物，受试制剂与参比制剂的Cmax、AUC0－t、AUC0→∞均无显著性差异。提示受试制剂与参比制剂具有生物等效性。

参考有关文献，确定试验过程中受试者取血时间为服药前（0h）、服药后0.16，0.33，0.5，0.67，0.83，1，1.25，1.5，1.75，2，2.5，3，4，6，8，12，24，36，48h，实际测定结果反映36h贝那普利拉血药浓度已低于检测限，而12h绝大部分血浆样本的浓度已低于相应峰浓度的1／10，两种制剂的平均t1／2分别为（4.2±1.3）h（受试制剂）及（4.1±1.6）h（参比制剂），采 血 点 24h 已 接 近 5 个t1／2，且 AUC0－t／AUC0→∞＞80%，表明取血时间和检测限满足生物利用度试验的要求。

本试验期间，受试者均未发生药物不良反应，除一名受试者因个人原因退出实验，其余受试者试验后体检未见异常。

［1］王雪丁，黄丽惠，曾桂雄，等.HPLC法同时测定健康人血浆中贝那普利及其代谢物贝那普利拉的浓度［J］.中国临床药理学杂志，2005，21（4）.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典［S］.二部.2000，附XIX B：193－197.