吴峰,曾莹,梁华敏
(1.武汉医药卫生学会联合办公室《中国医院药学杂志》编辑部,430014;2.华中科技大学同济医学院附属协和医院药剂科,武汉 430022;3.华中科技大学同济医学院生理系,武汉 430030)
治痔胶囊是根据中药长期治疗痔疮的临床实践研制的中药复方制剂,主要由槐角、槐花、地榆、荆芥、女贞子、黄连、黄芩、黄柏、熟大黄、当归、甘草等中药组成。槐角丸用于治疗痔疮历史悠久,因其确切的疗效而在临床上被广泛使用[1]。笔者在本实验对两种药物体外抑菌作用进行比较,为新药治痔胶囊的继续研究提供依据。
1.1 材料
1.1.1 药品及主要试剂 治痔胶囊(自制,批号:20090401),槐角丸(武汉太福制药有限公司提供,批号:080701-1),MH琼脂(北京市海淀区微生物培养基制品厂提供),菌种金黄色葡萄球菌25923、铜绿假单胞菌27853、大肠埃希菌25922标准菌株,均由中国药品生物制品检定所提供,其他菌株为临床标本采集分离,并经鉴定确证获得。
1.1.2 仪器 SW-CJ-1FD型超净工作台(苏净集团出品),A400型多点接种仪(英国),梅里埃比浊仪(法国),万分之一天平(日本岛津),SKP-01电热恒温培养箱(湖北省黄石市医疗器械厂)。
1.2 方法
1.2.1 治痔胶囊药液的制备 取治痔胶囊浸膏(浓度1.46 g·mL-1)60 g,加纯化水稀释至100 mL(相当于100%,即含主药1 g·mL-1药液),取该混悬液50 mL,加纯化水至100 mL(50%,即0.5 g·mL-1),以此类推,将药液稀释至 0.5,0.25,0.125,0.062 5,0.031 3 g·mL-1,将稀释后的药物混悬液用流通蒸汽灭菌30 min后调节渗透压为290~310 mOsm·L-1,pH为6.8~7.2,待用。
1.2.2 槐角丸药液的制备 取槐角丸粉60 g(相当于原药材50 g),加水至100 mL(相当于50%药液,即0.5 g·mL-1),取该混悬液50 mL加水至100 mL(相当于25%药液,即0.25 g·mL-1),以此类推将槐角丸稀释为 0.5,0.25,0.125,0.062 5,0.031 3 g·mL-1,将稀释后的药物混悬液用流通蒸汽灭菌30 min后,调节渗透压为290~310 mOsm·L-1,pH为6.8~7.2,备用。1.2.3 培养基的制备 分别取上述已稀释好的治痔胶囊和槐角丸药液2 mL,加入到一系列已作好标记内径为90 mm平板内,再将已在50℃水浴中平衡>30 min的MH琼脂液18 mL也加入到平板内(药液∶琼脂=1∶9),边加边摇晃平板,使药物和培养基充分混匀[2]。
1.2.4 菌株的准备 细菌的鉴定按照全国临床检验操作规程[3]操作,挑取新鲜培养纯菌落3或4个菌落,用0.9%氯化钠溶液配成0.5麦氏浊度菌液,取该菌液0.1 mL加入0.9%氯化钠溶液0.9 mL中,置于菌液托盘,备用。
1.2.5 抑菌实验 采用多点接种仪在水平台上,从低浓度含药平板向高浓度含药平板,逐个接种细菌,接种量为1μL。然后将已完成接种的平板置于35℃恒温培养箱中孵育16~20 h。
1.3 结果判断 将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点,以菌落生长被完全抑制的最低药物浓度为该药对检测菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。
治痔胶囊对常见的6种细菌均有抑菌作用。其对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、乙型链球菌的 MIC为0.062 5 g·mL-1;对 铜 绿 假 单 胞 菌 的 MIC 为0.125 g·mL-1;对大肠埃希菌的MIC为0.25 g·mL-1;对肠球菌的的MIC为0.5 g·mL-1。槐角丸对金黄色葡萄球菌、变形杆菌的生长有抑制作用,其对两者的MIC均为0.125 g·mL-1;槐角丸对另外4种细菌生长均无抑制作用。结果见表1。
表1 治痔胶囊和槐角丸对6种常见细菌的抑制作用Tab.1 The bacteriostasis of zhizhi capsules and huaijiao pills on 6 kinds of common bacterium
痔疮是在成年人中多发的一种常见病,临床主要表现为便血、脱出、肿痛。究其病因,祖国医学认为:“肛门不洁,外感邪毒,或湿热内蕴,下注肛门,久则致气滞而淤,筋脉横解,肠澼为痔”[4]。临床上采用中成药治疗痔疮,往往可获良效。本课题组研制的治痔胶囊,在其组方中的槐角、槐花、地榆、荆芥、女贞子可凉血止血;黄连、黄芩、黄柏可清热化湿;熟大黄、当归可活血消肿;甘草可解毒,并调和诸药。全方共奏清热解毒,活血化瘀之功效。
现代医学认为,痔疮及肛肠病术后肿胀疼痛常常与局部炎症因素密切相关[4],体外抑菌实验结果表明:治痔胶囊具有抑制金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希菌、乙型链球菌、铜绿假单胞菌、肠球菌的生长的作用。与临床广泛使用的槐角丸比较,该药具有更强的抑菌能力。本实验为治痔胶囊用于临床治疗痔疮肿痛提供了科学依据。
[1] 王丽华,段玉峰,丁红军,等.槐角丸的研究进展[J].现代生物医学进展,2007,7(5):793-795.
[2] 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2003:911.
[3] 叶应妩,王毓三,审子瑜,等.全国临床检验操作规程[M].3版.南京:东南大学出版社,2006:337-467.
[4] 陈红锦,钱海华,徐慧琴,等.龙脑消痔露的制备工艺及体外抑菌实验研究[J].时珍国医国药,2005,16(12):1207-1208.