木棉叶中多糖含量的测定

杜婷婷，范超君，毕和平，2*

（1.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

木棉叶中多糖含量的测定

杜婷婷1，范超君1，毕和平1，2*

（1.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

黎药木棉叶用石油醚除去脂溶性杂质，用水提醇沉法得海南木棉叶的多糖，采用苯酚-硫酸比色法对多糖含量进行了测定.测得木棉叶的多糖质量分数为0.72%，加样平均回收率为101.1%，相对标准偏差RSD为1.76%.

木棉；多糖；紫外分光光度法

木棉（Bombax malabaricum DC）又称英雄树、莫连、红茉莉、木棉树、红棉、攀枝花、斑芒树等，为木棉科木棉属植物，为落叶乔木，常先花后叶，开时满树，十分壮观，是南方常见的植物.木棉以花、树皮和根入药，具祛风除湿，活血消肿、散结止痛等功效[1-3]，是海南黎族常用药之一，民间主要是取其根、树皮、花或叶水煎服，用于治赤白痢疾、湿热下痢、妇女月内风，肺癌、肠癌，胃痛，便后下血及痹症等.文献曾对木棉的化学成分及药理作用的研究进展进行了综述[4]，研究发现其化学成分有香橙素、槲皮素、木犀草素、橙皮苷等黄酮类成分、羽扇豆醇、羽扇豆酮等三萜类化合物，香橙素-4′-甲醚，胡萝卜苷等其他成分，证明了木棉提取物具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、肝损伤保护等作用.木棉纤维具有的天然抗菌，不蛀不霉的优良特性也为众所周知.多糖是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子，具有多种生物活性，与生物机能的维持密切相关[5-8].本文采用石油醚除去木棉叶中的脂溶性杂质后，用水提醇沉法制得木棉粗多糖，采用苯酚-硫酸比色法[9-11]测定了多糖含量.

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

FZ-102型微型植物试样粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；AR2140型电子天平（Ohaus Corp，USA）；RE-52型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；D2F-200型真空干燥箱（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）等.

葡萄糖（天津市福晨化学试剂厂，分析纯）；苯酚，浓硫酸，丙酮，氯仿，正丁醇，95%乙醇，石油醚（沸程为60-90℃），碳酸氢钠等，均为国产分析纯.

海南木棉叶采自海南师范大学南校区，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师鉴定为Bombax malabaricumDC的叶，自然晾干，粉碎备用.

1.2 苯酚溶液的配制

取苯酚100 g，加铝片0.1 g和NaHCO30.05 g，蒸馏，收集182℃馏分，称取12.5 g该馏分，加适量水溶解，转移至250 mL容量瓶中，摇匀定容，置冰箱内备用.

1.3 木棉叶中多糖的提取

取已干燥的木棉叶粉末10 g，用脱脂纱布包好，置于索氏提取器中，加300 mL石油醚脱脂和叶绿素2 h，取出挥去溶媒，换用蒸馏水浸提3次，每次5 h，合并3次水提液，减压浓缩至50 mL，Sevag法除蛋白，加200 mL95%乙醇，至乙醇质量分数约80%，静置12 h（过夜），抽滤，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤沉淀2次，置真空干燥箱内90℃下烘干，得海南木棉多糖0.1490 g.

1.4 标准溶液配制与标准曲线绘制

准确称取于105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品10 mg，溶解定容至100 mL容量瓶中，即得到C=0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液，备用.分别准确量取0，5.0，10.0，20.0，30.0，35.0 mL葡萄糖标准溶液至6个已编号的50 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，摇匀备用.分别取葡萄糖溶液1 mL至6个干燥的25 mL容量瓶中，分别滴加1.5 mL 5%苯酚溶液，混合均匀后缓慢滴加7.5 mL浓硫酸，充分混匀，室温下静置20 min.以未加葡萄糖溶液为随行空白，用紫外分光光度法于512 nm处测定吸光度.以葡萄糖标准品溶液浓度C（mg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线.

1.5 木棉叶多糖含量的测定

精确称取木棉粗多糖10 mg置于100 mL容量瓶中，加入浓硫酸2 mL，加热水溶解2 h，冷却至室温，稀释至刻度.精确量取1.0 mL样品液5份置于50 mL小烧杯中，分别加入1.5 mL苯酚溶液，7.5 mL浓硫酸溶液，混合均匀后放置20 min，用紫外分光光度计在512 nm处测其吸光度.

2 结果与讨论

2.1 最大吸收波长的选择

精密吸取一定量葡萄糖标准溶液，按1.4项下方法操作，在分光光度计上，于波长450—700 nm区间扫描，确定最大吸收波长为512 nm.

2.2 标准曲线与回归方程

测定结果表明，在标准溶液浓度0.00—0.70 mg/mL范围内，线性关系良好（见图1）.得回归方程：A=0.00136×C-0.00509，相关系数r=0.9998.式中：C为标准品浓度（mg/mL），A为吸光度.

图1 标准曲线图Fig.1Standard curve

2.3 提取温度的影响

取经过脱脂、除杂后的木棉叶粉末6份，每份2.0 g，加水50 mL，分别设置恒温水浴温度为40、50、60、70、80、90 ℃，提取3 h，抽滤，Sevag法脱蛋白质，余下按1.4项的方法操作，测定吸光度，计算葡萄糖含量.实验曲线见图2.

图2 葡萄糖提取率与提取温度关系曲线Fig.2 Effects of extraction temperature on extraction yield of polysaccharides from Bombax malabaricum DC

试验证明，葡萄糖提取率与提取温度成正比关系，一般来讲，温度越高，提取率也越高.

2.4 加样回收率实验

准确移取80℃条件下提取的样品多糖溶液1.0 mL，置于25 mL容量瓶内，加入一定量的葡萄糖标准品，余下部分按1.4项操作，以不含糖溶液为随行空白，平行测定5次，测定结果见表1.

表1 加标回收率实验(n=5)Tab.1 Recovery test(n=5)

2.5 木棉叶中多糖含量测定结果

测定结果见表2.

根据回归方程及表2，计算得黎药木棉叶的多糖的平均质量分数为0.72%.

表2 木棉叶多糖含量吸光度测定结果Tab.2 The determination results of polysaccharides content in samples

本文用水提醇沉法提取木棉叶中的多糖，以硫酸-苯酚法测定其含量，方法简便，可靠，可为木棉的综合开发利用提供一定的科学依据.

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Determination of Polysaccharides Content from Leave ofBombax malabaricumDC

DU Tingting1，FAN Chaojun1，BI Heping1，2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou 571158，China
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou 571158，China）

Petroleum ether was used to remove fat-soluble impurities,with Water Extracting-Alcohol Precipitating to get the polysaccharide from leave of Bombax malabaricum DC.The content of polysaccharide was determined with phe⁃nol-sulfuric acid colorimetry.The mass fraction of polysaccharide from leave of Bombax malabaricum DC was deter⁃mined as 0.72%with average recovery of 101.1%and the RSD of 1.76%.

Bombax malabaricum DC；Polysaccharide；phenol-sulfuric acid colorimetry

R 284.2

A

1674-4942（2011）03-0307-03

2011-04-20

国家大学生创新实验项目（101165804）

*通讯作者

黄 澜