马兰叶中总黄酮的提取

姜显光，侯冬岩，回瑞华，刁全平

鞍山师范学院化学系，鞍山114005

马兰叶中总黄酮的提取

姜显光*，侯冬岩，回瑞华，刁全平

鞍山师范学院化学系，鞍山114005

本论文以提取马兰叶中的总黄酮类化合物为目的，采用纤维素酶辅助热浸提和热浸提两种方法进行提取，利用紫外分光光度法测得马兰叶中总黄酮类化合物为分别为17.14 mg/g和14.44 mg/g，纤维素酶辅助热浸提方法的平均回收率为94.60%，相对标准偏差为5.56%。

马兰;总黄酮;热浸提;纤维素酶;紫外分光光度法.

马兰(Kalimeris indica)为菊科多年生草本植物，别名鱼鳅串、鸡儿肠、田边菊等，主产于江苏、浙江、江西等地。马兰载于《本草拾遗》，具有清热利湿、解毒消肿、凉血止血之功效。其资源特别丰富，民间把其作野菜食用，还常用于治肝和护肝，且疗效显著［1］。黄酮类化合物具有降低心肌耗氧量，使冠脉、脑血管流量增加，抗心律、软化血管、降血糖、血脂等作用，同时它还是一种天然的抗氧化剂，具有清除人体中超氧离子自由基抗衰老，增加机体免疫力的生理活性作用［2］。为更好的开发利用马兰叶，本论文采用纤维素酶辅助热浸提和热浸提两种方法提取马兰叶中的总黄酮，为其合理的开发利用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

马兰叶于2009年9月采自辽宁鞍山，标本存放于鞍山师范学院天然产物分析实验室(标本编号: 20090901)。

1.2 主要试剂

芦丁(中国药品生物制品检定所，含量92.5%)，NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、无水乙醇(均为分析纯)，纯净水。

1.3 主要仪器

TU-1201型紫外可见分光光度计(北京扑析通用仪器有限公司);RE52CS型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.4 提取方法

1.4.1 纤维素酶辅助热浸提法

将马兰叶晒干，粉碎，过筛，称取10.0 g马兰叶，置于索氏提取器中，用石油醚脱色1.5 h，过滤后将滤渣置于锥形瓶中，加入纯净水150 mL和纤维素酶，调pH在4～6之间，55℃水浴1.5 h，过滤，收集滤液，将滤渣置于锥形瓶中，浸提3次，每次用200 mL 60%乙醇在60℃条件下浸提1 h，合并四次滤液，蒸发溶剂，得黄酮浸膏，用60 mL石油醚分三次洗涤，弃掉石油醚，用800 mL 60%乙醇定容，待测。

1.4.2 热浸提法

将马兰叶晒干，粉碎，过筛，称取10.0 g马兰叶，置于索氏提取器中，用石油醚脱色1.5 h，过滤后将滤渣置于锥形瓶中，加入纯净水150 mL，55℃水浴1.5 h，过滤，收集滤液，将滤渣置于锥形瓶中，浸提3次，每次用200 mL 60%乙醇在60℃条件下浸提1 h，合并四次滤液，蒸发溶剂，得黄酮浸膏，用60 mL石油醚分三次洗涤，弃掉石油醚，用800 mL 60%乙醇定容，待测。

1.5 吸收波长的确定

移取一定量的标准品溶液、样品溶液分别置于10 mL容量瓶中，各加60%乙醇2 mL，加5%亚硝酸钠溶液0.4 mL，摇匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液0.4 mL，摇匀，静置6 min，再加1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，用60%乙醇定容，摇匀，静置10 min。以5%亚硝酸钠溶液0.4 mL、10%硝酸铝溶液0.4 mL、1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，用60%乙醇定容，得到的溶液作为参比溶液，在400～800 nm扫描，得到其吸收光谱，最大吸收波长为510 nm。

1.6 芦丁标准溶液的配置

精密称取芦丁标准品0.0200 g，加适量60%乙醇溶解，置于100 mL容量瓶中，用60%乙醇定容，摇匀，备用。

1.7 标准曲线的绘制

准确吸取芦丁标准品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于10 mL容量瓶中，分别加60%乙醇2 mL，加5%亚硝酸钠溶液0.4 mL，摇匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液0.4 mL，摇匀，静置6 min，再加1 mol/L氢氧化钠溶液4 mL，用60%乙醇定容，摇匀，静置10 min。于510 nm测其吸光度。

以浓度(C)为横坐标、吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，得其线性回归方程为:A=0.0114C +0.0373，相关系数r=0.9992，对照品在10～60 μg/mL范围内呈良好线性关系。可按标准曲线法进行定量分析。

2 实验结果

2.1 方法精密度实验

根据前面确定的测试条件，按1.4.1提取方法制备5个不同浓度的样品溶液，在510 nm波长下测定吸光度9次，计算出浓度和平均值，求得其标准偏差及变异系数，结果列于表1。

2.2 加样回收率实验

称取三份马兰叶样品，在样品中分别加入芦丁标准品5 mg，再将样品和标准品的混合物按1.4.1方法进行提取，结果见表2。

表2 方法回收率Table 2 Recovery of the method

2.3 稳定性实验

用于绘制吸收曲线相同的方法配制样品进行稳定性实验，结果表明:样品放置1 h，其吸光度值不变。

2.4 样品分析

按1.4.1和1.4.2的实验步骤，分别提取马兰叶中的黄酮，按1.5方法显色，在510 nm测吸光度，通过线性回归方程计算，得马兰叶中黄酮类化合物的含量为17.14 mg/g和14.44 mg/g。

3 结论与讨论

本实验以测得马兰叶中的总黄酮为指标，采用纤维素酶辅助热浸提法和热浸提两种方法提取马兰叶中的总黄酮，利用紫外分光光度法检测，测得黄酮含量分别为17.14 mg/g和14.44 mg/g，从结果可以看出，用纤维素酶处理后，黄酮的提取率提高了近20%。主要是利用酶反应所具有的高度专一性等特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分的目的［3］。

本实验按1.4.1提取方法，做了加样回收率实验和仪器精密度实验，回收率为 91.09% ～ 100.99%，相对标准偏差为5.56%，仪器精密度实验的相对标准偏差小于0.76%。

1 Lin BB(林彬彬)，Wang g(王刚)，liu JS(刘劲松)，et al.Studies on the chemical vonstituents of Kalimeris indica (L.)Sch-Bip.J Anhui Trad Chin Med Coll(安徽中医学院学报)，2008，27(6):48-49.

2Hou DY(侯冬岩)，Hui RH(回瑞华)，Yang M(杨梅)，et al.Determination of total flavonoids and the antioxidation effect in NanguoPear.Food Sci(食品科学)，2005，26:193-196.

3 Wang Y(王邕)，Li HB(黎海彬)，Bai XF(白先放)，et al.Study on enzyme-solvent extraction process for flavonoid from grosvenor momordica.Food Sci＆Technol(食品科技)，2006，31(7):125-127.

Extraction of Total Flavonoids from Kalimeris indica Leaves

JIANG Xian-guang*，HOU Dong-yan，HUI Rui-hua，DIAO Quan-ping
Department of Chemistry，Anshan Normal University，Anshan，114005，China

To extract the total flavonoids in the Kalimeris indica leaves，the solvent extraction with cellulose enzyme as auxiliary agent and the traditional solvent extraction were compared.In the two extracts，contents of total flavonoids were 17.14 mg/g and 14.44 mg/g respectively by ultraviolet spectrophotometry.The average recovery of solvent extraction with cellulose enzyme as auxiliary agent was 94.60%，with RSD=5.56%.

Kalimeris indica;flavonoids;hot water extraction;cellulose enzyme;UV

1001-6880(2011)05-0967-03

2010-06-08 接受日期:2010-10-12

*通讯作者 E-mail:happyjxg@tom.com

TS201.2

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