广东地区2007～2009年禽源大肠杆菌的耐药性演变

朱恒乾,陈朝喜,廖晓萍

(1.华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室,广东广州510642;2.西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都610041)

大肠杆菌是禽类肉食品的主要污染源之一,对禽类肉制品的质量有着十分重要的影响。近年来,对于抗生素在食用动物上的使用所导致的耐药性的研究逐渐增加,并且这种耐药性可以通过食物链传给人体内的微生物群[1],因此,禽源大肠杆菌耐药性的产生可能导致严重的公共卫生问题。国外对食品源大肠杆菌已有较完善的监测系统,其中,德国[2]、日本[3]、西班牙[4]、美国[5],法国[6]及欧盟[7]都有细菌监测结果的报道,而国内虽有大量的畜禽病原菌耐药性的研究报道[8],但我国对食品源病原菌耐药性监测仍处于初级阶段。随着细菌耐药性的产生和发展,结合抗菌药物的高使用频率和用量加大,导致细菌耐药性问题越来越突出[9]。研究证明,细菌耐药性的体外试验对确定药物的日允许摄入量(ADI)是很有必要的[10]。本研究针对广东省10多个地市多家禽类养殖场2007年至2009年分离得到的378株大肠杆菌进行耐药性研究,以分析目前禽类养殖业临床用药情况及耐药性变迁的发展趋势,为临床合理使用抗生素提供参考,并对我国食品源细菌耐药性提供一定的监测依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源与质控菌株 2007～2009年从广东10多个地市多家禽类养殖场分离到378株大肠杆菌。E.coli 25922为药物敏感性测定质控菌。

1.2 药品、试剂及培养基 肠杆菌科细菌生化编码鉴定管购自杭州天和微生物试剂有限公司。盐酸恩诺沙星、环丙沙星、左氟沙星购自广州威佳科技有限公司;链霉素、卡那霉素、安普霉素、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考、头孢曲松钠购自中国兽医药品监察所;头孢噻呋钠、四环素、磺胺甲恶唑购自杭州天和微生物试剂有限公司。LB肉汤、MH肉汤、MH琼脂和麦康凯琼脂购自广东环凯微生物科技公司。

1.3 细菌的分离鉴定 将样品增菌后接种于麦康凯琼脂培养,挑取红色不透明中等大小可疑菌落进行纯化培养,并用肠杆菌科细菌生化编码鉴定管进行鉴定。

1.4 药物敏感性检测 根据临床与试验标准协会(CLSI)所推荐的药物稀释范围稀释药液,采用琼脂稀释法进行药物敏感性检测。参照CLSI标准进行细菌对药物的敏感性判定。

2 试验结果

2.1 细菌分离鉴定结果 从514个样本中分离鉴定得到378株大肠杆菌,分离率为73.54%。

2.2 数据统计 378株临床分离株对15种被测药物的耐药率见表1;多重耐药情况见表2;半数抑菌浓度(MIC)和有效抑菌浓度(MIC)见表3。

表1 378株临床分离大肠杆菌对15种抗生素的耐药率统计

表2 378株受试菌对15种抗菌药物的多重耐药

表3 15种抗生素对受试菌的MIC50、MIC90统计 (μg/m L)

3 讨论

本试验对广东地区多个禽类养殖场进行禽源大肠杆菌的耐药性调查,数据表明耐药性变化情况较明显。

3.1 临床分离株对15种抗生素的耐药变化情况综合药敏数据可以得出,细菌对所选用抗生素的耐药率变化情况可以分为三种：(1)耐药率逐年上升。属于这种情况的药物有恩诺沙星、左氧氟沙星、链霉素、氟苯尼考和磺胺甲恶唑,其中增幅最高的为链霉素(18.08%)。(2)耐药率逐年下降。有这种变化趋势的药物有环丙沙星、头孢曲松、头孢噻呋和四环素,降幅最大的为头孢噻呋(8.75%)。(3)耐药率表现为2008年最高,2009年次之,2007年最低,这些药物包括阿米卡星、安普霉素、庆大霉素和多西环素。

3.2 受试菌株对15种抗生素多重耐药情况 由多重耐药数据统计结果可以看出,细菌的耐药性较严重,耐药谱主要集中在5耐至12耐。从耐药谱可知,2007年多重耐药率为49.17%,2008年为52.02%,而2009年已达到67.50%。统计数字说明,临床分离的禽源大肠杆菌多重耐药率在逐年上升。细菌对各种抗生素均有一定的耐药性,表现为多重耐药,这提示我们临床用药已不能仅仅使用单一药物来治疗细菌感染。由实地调查得出,养殖场中用药情况复杂,复杂的用药情况一方面有利于疾病的治疗,但同时,受试菌的多重耐药性的产生与临床上复杂的用药情况有密切的关系,用药情况越复杂越容易导致多重耐药性的产生。

3.3 MIC50与MIC90数据分析 由表3可知,15种抗生素的MIC50数值变化幅度较小,多数表现为逐年2倍的增长趋势,而MIC90多表现为逐年4倍的增长趋势。抑菌浓度的逐年提高可以说明细菌对多数抗生素的耐药水平有一定程度的提高。

3.4 与其他同类耐药性研究的比较 日本食用动物源大肠杆菌耐药性的监测报告指出,细菌对磺胺间二甲氧苄啶、土霉素、链霉素、氨苄西林和卡那霉素耐药率高,雏鸡源大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药率达10%。近年的细菌的耐药呈下降趋势,但雏鸡源大肠杆菌耐药性仍有所提高。

近年来,国内也有大量的食品动物源细菌耐药性调查试验。宋立等[8]对国内不同地区禽源大肠杆菌的耐药性试验分析发现,细菌对氟喹诺酮类药物的耐药率为57.1%至66.7%,高于本试验数据。本试验中细菌对其的耐药率约为10%,属低水平耐药。本试验中的数据与其他试验不同的原因可能是所调查的地区所使用的饲料和饲养条件有一定的差异,具体原因有待进一步调查研究。

4 结语

目前,控制耐药性产生的主要手段就是规范用药和减少抗生素的用量[12]。本试验首次对广东省10个地市进行禽源大肠杆菌耐药性变迁进行报道,所研究地区的大肠杆菌耐药性率虽低于其他相关报道,但可以说明,该地区禽源大肠杆菌的耐药水平也已达到较为严重的程度,提示我们应加强食品源细菌耐药性监测,并对药物的临床应用进行监管,以避免药物的滥用和无指征用药。

[1] Dallal M M S,Mohammad M P,Rezadehbashi M,et al.Prevalence and antimicrobial resistance profiles of Salmonella serotypes,Campylobacter and Yersinia spp.isolated from retail chicken and beef,Tehran,Iran[J].Food Control,2010,21(4)：388-392.

[2] Wallmann,Juergen,Schroeter,et al.National antibiotic resistance monitoring in veterinary pathogens from sick foodproducing animals：The German programme and results from the 2001 pilot study[J].International Journal of Antimicrobial Agents,2003,22(4)：420-428.

[3] Kijima-Tanaka M,Ishihara K,Morioka A,et al.A national surveillance of antimicrobial resistance in Escherichia coli isolated from food-producing animals in Japan[J].Journal of Antimicrobial Chemotherapy,2003,51(2)：447-451.

[4] Cuevas O,Cercenado E,Goyanes M,et al.Present situation of antimicrobial resistance of Staphy lococcus in Spain：Six th Nationwide Prevalence Study and the in vitro activity of new antimicrobial agents[J].International Journal of Antimicrobial Agents,2007,29(Suppl.2)：521-521.

[5] Ray K A,Warnick L D,Mitchell R M,et al.Prevalence of antimicrobial resistance among Salmonella on midwest and northeast USA dairy farms[J].Preventive Veterinary Medicine,2007,79(2-4)：204-223.

[6] Payot S,Dridi S,Laroche M,et al.Prevalenceand antimicrobial resistance of Campylobacter coli isolated from fattening pigs in France[J].Veterinary Microbiology,2004,101(2)：91-99.

[7] Hend rik sen RS,Mevius D J,Schroeter A,et al.Prevalence of antimicrobial resistance among bacterial pathogens isolated from cattle in different European countries：2002-2004[J].Acta Veterinaria Sandinavica,2008,50：28.

[8] 宋立,宁宜宝,张秀英,等.中国不同地区家禽大肠杆菌血清型分布和耐药性比较研究[J].中国农业科学,2005,38(7)：1 466-1 473.

[9] 付欣艳,王亮,邱刚.抗生素在兽医临床上的合理应用[J].中国兽医杂志,2007,43(6)：109-114.

[10]Wagner R D,Johnson S J,Cerniglia C E.In vitro model of colonization resistanceby the enteric microbiota：Effects of antimicrobial agents used in food-producing animals[J].Antimicrobial Agents and Chemotherapy,2008,52(4)：1230-1237.

[11]Kojima A,Asai T,Ishihara K,et al.National Monitoring for Antimicrobial Resistance among Indicator Bacteria Isolated from Food-Producing Animals in Japan[J].Journal of Veterinary Medical Science,2009,71(10)：1301-1308.

[12] Grugel C,Wallmann J.Antimicrobial resistance in bacteria from food-producing animals：Risk management tools and strategies[J].Journal of Veterinary Medicine Series B-Infectious Diseases and Veterinary Public Health,2004,51(8-9)：419-421.