盘叶忍冬花蕾与金银花相似度的研究

李丽，毛崇武，许永全，何福江

（1.甘肃省中医学校，甘肃兰州730050；2.甘肃省医学科学研究院，甘肃兰州730050）

盘叶忍冬花蕾与金银花相似度的研究

李丽1，毛崇武1，许永全1，何福江2

（1.甘肃省中医学校，甘肃兰州730050；2.甘肃省医学科学研究院，甘肃兰州730050）

目的应用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对8个产地的金银花药材和甘肃省境内5个地产的盘叶忍冬花蕾与金银花标准品进行相似度研究。方法色谱柱为Diamensil（钻石）C18（150mm×4.6mm，5μm），梯度洗脱，流动相A为0.5%的磷酸水溶液-乙腈（100∶15），B为甲醇，流速为1.0ml·min-1，检测波长为340nm。结果各样品图谱与标准品图谱基本一致，但不同产地的样品各成分含量的相对比值有较大差别。结论采用RP-HPLC图谱分析方法进行样品之间或样品与对照品（或对照药材）间的对比，有利于鉴别药材真伪，保证药材质量。

盘叶忍冬花蕾；金银花；相似度

金银花为常用中药，具有清热解毒，凉风散热之功效[1]，其主要成分为有机酸类、黄酮类和挥发油类化合物[2]。中国药典只收载忍冬科忍冬（Lonicera japonica Thunb.）植物的干燥花蕾或带初开的花[3]，其质量控制限于绿原酸和木犀草苷成分。本文采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对几种金银花商品药材与盘叶忍冬花蕾进行了化学成分相似度比对。

1 仪器试剂与对照品

1.1 仪器

Agilent 1100系列，四元泵G1311A，含在线真空脱气机，紫外检测器G13651，Agilent Chemistation化学工作站。

1.2 试剂

甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯。色谱柱：Diamensil C18柱（150mm×4.6mm，5μm）。

1.3 样品与对照品

各个产地金银花药材样品均取于甘肃省黄河药市。经甘肃省药检所鉴定1～8号为忍冬（Lonicera japonica Thunb），9～13号为盘叶忍冬（L.tragophylla Hemsl.）。药材产地详见表1。对照品：绿原酸、咖啡酸、芦丁（中国药品生物制品鉴定所）。对照药材：金银花对照药材（中国药品生物制品鉴定所）。

表1 样品来源

2 方法与结果

2.1 实验条件的选择

（1）供试品溶液的制备。①对照品溶液的制备：精密称取绿原酸、咖啡酸与芦丁对照品适量，用甲醇溶解制成混合对照品溶液，使浓度分别为：绿原酸（0.3mg·ml-1），咖啡酸（0.08 mg· ml-1）与芦丁（0.6 mg·ml-1）。②样品供试液的制备：精密称取金银花药材粉末（过40目筛）0.5g，置锥形瓶中，加石油醚（60～90℃）20ml，超声处理（50Hz，250W）20min，静置10min,弃去石油醚液，待样品中残存的石油醚全部挥发后，加甲醇定容10ml，超声处理20min，滤过，滤液转移至10ml容量瓶中，以甲醇少许，分次洗涤容器及残留物，洗涤液并入同一量瓶中，以甲醇定容，制得供试液。

（2）不同流动相系统及检测波长的选择。吸取上述样品溶液10μl进样，分别以0.1%甲酸和甲醇，0.5%磷酸和甲醇，0.5%磷酸-乙腈（100∶15）和甲醇，甲醇和乙腈作为流动相梯度洗脱，记录254、330、340与360nm 4个波长的色谱图。结果表明，用0.5%磷酸-乙腈（100∶15）和甲醇梯度洗脱，波长340nm的条件为最佳。梯度洗脱条件见表2。对照品、对照药材的与2号金银花样品的RP-HPLC图谱见图1。

表2 流动相梯度条件

图1 对照品A、对照药材B、2号金银花样品C RP-HPLC图谱

2.2 RP-HPLC图谱的建立

（1）RP-HPLC图谱的制备。分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，按前述色谱条件操作记录60min，结果认为40min即可出完峰。

（2）共有峰的确定。通过13个样品RP-HPLC图谱测定，比较其色谱图，确定共有峰为7个。以绿原酸为参照物（对照品）测定各峰的保留时间和面积，换算成相对保留时间和相对面积，结果见表3和表4，其各峰相对保留时间的RSD（相对标准偏差）＜4.5%，共有峰的面积之和大于90%。

表4 各地产样品RP-HPLC图谱共有峰相对面积

（3）共有峰的归属。各取绿原酸、咖啡酸与芦丁混合对照品溶液10μl，在上述色谱条件下进样，对比保留时间，可知S、2、4号峰分别为绿原酸、咖啡酸与芦丁。

（4）方法学考察。①稳定性。以2号金银花为供试品，分别在0、2、8、12、24h进样，按上述条件测定，结果表明，各色谱峰相对保留时间RSD不超过2.0%，相对峰面积的RSD不超过3.7%，说明供试品溶液在24h内稳定。②精密度。以2号金银花为供试品，连续进样5次，结果表明，各色谱峰相对保留时间RSD不超过0.34%，相对峰面积的RSD不超过2.0%。③重现性。取2号金银花药材各5份为供试品，检测RP-HPLC图谱，结果表明，各色谱峰相对保留时间RSD不超过0.8%，相对峰面积的RSD不超过4.5%。

2.3 RP-HPLC图谱相似度评价[4]

采用Excel 2005软件，以1～8号产地的金银花和9～13号盘叶忍冬的RP-HPLC图谱中所有峰的峰面积与对照品药材为模板的峰面积值或以1～13号样品所有峰的峰面积与其均值为模板进行整体相似性计算。结果见表5。13批金银花与盘叶忍冬药材与对照药材的RP-HPLC图谱有较好的一致性。本方法可用于综合评价盘叶忍冬与金银花的质量。

表5 各地产样品RP-HPLC图谱相似度

3 讨论

（1）比较了0.5%磷酸溶液-乙腈的梯度洗脱，发现得到较少的色谱峰，改用0.5%磷酸溶液-乙腈（90∶15）和甲醇梯度洗脱，色谱峰出现较多。实验表明，样品保留时间、重现性、分离度较好。

（2）对13个产地样品的RP-HPLC图谱中主要峰群的整体图谱与对照药材RP-HPLC图谱基本一致，但各成分含量的相对比值有较大差别。相似度计算结果表明，1～8号、11、12号样品达到0.900以上，10号与13号样品相似度分别为0.880和0.630。其中13号样品是委托甘肃华亭县医院采收的，花大多已盛开，且因晾晒方法不当，颜色暗黄，相似度差异的原因可能与样品采集的时节、晾晒方法不当有关。

（3）鉴于金银花中所含成分的复杂性，采用药材RP-HPLC图谱分析方法，进行样品之间或样品与对照品（或对照药材）之间的RP-HPLC图谱比对，有利于鉴别药材真伪，保证药材质量。

[1]黄西峰.金银花的研究概况及展望[J].中国中药杂志，1997，22（4）：247～249.

[2]黄丽瑛，吕桂桢，李继彪.中药金银花化学成分的研究[J].中草药，1996，27（11）：645～647.

[3]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005.

[4]苗爱东，孙殿甲.Excel 2002在中药指纹图谱相似度计算中的应用[J].药学进展，2003，27（1）：51～54.

R282.5

B

1671-1246（2011）03-0099-02

注：本文为2005年甘肃省中医管理局立项项目，2008年经甘肃省科技厅组织鉴定为“国内同类研究领先水平”（甘科鉴字[2008]第292号）