不同产地大花红景天有效成分的含量测定研究

黎代余，黄丽凤，陈鸿平，向楚兵，刘友平，*

（1.成都中医药大学药学院，四川成都611137；2.中药材标准化教育部重点实验室，四川成都611137）

不同产地大花红景天有效成分的含量测定研究

黎代余1，2，黄丽凤1，2，陈鸿平1，2，向楚兵1，2，刘友平1，2，*

（1.成都中医药大学药学院，四川成都611137；2.中药材标准化教育部重点实验室，四川成都611137）

目的：通过测定西藏、四川、云南三省大花红景天药材中红景天苷、多糖、多酚的含量，为合理开发利用大花红景天资源及建立大花红景天GAP基地提供理论依据。方法：采用HPLC测定红景天苷含量，硫酸-苯酚法测定多糖含量，三氯化铁-铁氰化钾法测定多酚含量。结果：西藏产大花红景天药材中红景天苷、多糖、多酚平均含量分别为：1.39%、4.83%、5.71%；四川产大花红景天药材中红景天苷、多糖、多酚平均含量分别为：1.32%、4.78%、5.56%；云南产大花红景天药材中红景天苷、多糖、多酚平均含量分别为：1.27%、4.76%、5.51%。结论：西藏产大花红景天药材质量最优，西藏最适宜大花红景天生长。

大花红景天，红景天苷，多糖，多酚，不同产地

大花红景天［Rhodiolcrenulata（Hook.f.et Thomx.）H.Ohba］来源于景天科（Crassulaceae）景天属（Rhodiola）植物，其具有悠久的药用历史，主要用于滋补元气，被誉为“高原人参”［1］。现代药理学研究表明，红景天中所含的红景天苷、多糖、多酚类成分具有抗疲劳、耐缺氧［2］、防放射［3-4］、抗病毒［5］、双向调节［6］、免疫调节［7］以及抗氧化等多种药理作用。我国大花红景天植物资源丰富，蕴藏量大［8-9］，主要分布于西藏、四川、云南等广大的西部地区，具有很强的开发利用价值。本研究收集了西藏、四川、云南三省的大花红景天药材，并分别采用HPLC法、硫酸-苯酚法、三氯化铁-铁氰化钾法对红景天苷、多糖、多酚进行了含量测定，目的是为了合理开发利用我国的大花红景天资源，为我国大花红景天药材GAP基地建设及其相关医药工业生产提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

大花红景天药材 经四川大学王署教授鉴定为大花红景天［Rhodiol crenulata（Hook.f.et Thomx.）H.Ohba］的根和根茎；红景天苷对照品 批号：110818-200404，中国药品生物制品检定所；葡萄糖分析纯，成都化学试剂厂；乙腈 色谱纯，美国Fisher公司；磷酸 分析纯，成都金山化学试剂有限公司；浓盐酸、浓硫酸、苯酚、三氯化铁、铁氰化钾分析纯，成都科龙化工试剂厂；水 为蒸馏水；其他试剂 均为分析纯。

高效液相色谱仪（Shimadzu SPD-10aVP紫外检测仪）、CLASS-VP工作站 日本岛津；BP211D电子分析天平（十万分之一）、BP121S电子分析天平（万分之一） 德国Sartorius公司；BUG25-12超声仪上海必能信超声波有限公司；1100型分光光度计上海天美科学仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 红景天苷的含量测定

1.2.1.1 色谱条件 色谱柱：HypersiL ODS（4.6mm× 200mm，5μm）；流动相：乙腈∶水（8∶92）；流速：1.0mL/ min；检测波长：275nm；柱温：30℃。

1.2.1.2 对照品溶液的配制 精密称取红景天苷对照品适量，加甲醇配制成含红景天苷0.545mg/mL的溶液，即得。

1.2.1.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

1.2.2 多糖的含量测定

1.2.2.1 5%苯酚试剂的配制 取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，蒸馏，收集182℃馏分，称取7.5g，加水150mL溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

1.2.2.2 对照品溶液制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品，加水配制成葡萄糖102.32μg/mL的溶液，即得。

1.2.2.3 样品溶液的制备 取大花红景天粉末2.5g（过3号筛），精密称定，置于圆底瓶中，加80%乙醇100mL回流提取1.5h，趁热过滤，药渣挥干，加蒸馏水100mL，回流1h，趁热过滤，用15mL热水洗涤烧瓶和药渣3次，待冷却后移入250mL容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即得样品溶液。

1.2.2.4 最大吸收波长的选择 分别精密吸取对照品溶液0.8mL、供试品溶液0.6mL置于具塞试管中，加水至1.0mL，再分别加入5%苯酚溶液1.6mL，摇匀，然后加浓 H2SO47.0mL，充分摇匀，室温放置25min。另取1.0mL水作同上平行操作，作为空白对照，在400～650nm之间扫描。

1.2.2.5 测定方法 红景天多糖的精制：取大花红景天药材粉末100g，依次用250mL石油醚（60～90℃）、乙醚回流1.5h，取过滤后的残渣，挥干溶剂；加入250mL 80%的乙醇回流1.5h，取过滤后的残渣，挥干溶剂；加5倍量蒸馏水回流提取2次，每次1.5h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至一定体积，浓缩液加入等量的Sevag试剂除蛋白，反复进行5次；取上层液加无水乙醇使其含醇量达到80%，置于4℃冰箱中静置过夜，再离心分离（4000r/min，10min），沉淀依次用无水乙醇、丙酮反复洗涤5次，于50℃减压干燥至恒重，即得精制红景天多糖。

换算因素的测定：精密称取60℃干燥至恒重的大花红景天多糖21.03mg置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即可。精密吸取0.6mL，按照“1.2.2.4”项操作，在所选定的最大波长处测定吸光度。按照下面公式计算换算因素f：

式中：W-称取多糖的重量，μg；C-溶液中多糖液中葡萄糖单糖的重量，μg；D-多糖的稀释倍数。计算得f=2.14。

样品测定：精密吸取样品溶液 0.6mL，按照“1.2.2.4”中方法在所选定的最大波长处测定吸光度。按照下面公式计算样品中红景天多糖的含量：

式中：C-样品提取液中按标准曲线计算出的葡萄糖的量，μg；D-多糖的稀释倍数；f-换算因素；W-样品重量，g。

1.2.3 多酚的含量测定

1.2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品，加入丙酮∶水（1∶1）配制成没食子酸50μg/mL的溶液，即得。

1.2.3.2 供试品溶液的制备 取大花红景天粉末0.5g，精密称量，加入80mL丙酮∶水（1∶1），置水浴中微沸浸提30min后，趁热抽滤，冷却后定容至100mL。

1.2.3.3 最大吸收波长的选择 分别精密吸取没食子酸对照品溶液0.5mL、供试品溶液0.6mL置于25mL量瓶中，依次加入0.100mol/L三氯化铁溶液0.5mL、0.008mol/L铁氰化钾溶液0.5mL和0.10mol/L盐酸溶液0.5mL，定容，同时在25mL量瓶中加入0.100mol/L三氯化铁溶液0.5mL、0.008mol/L铁氰化钾溶液0.5mL和0.10mol/L盐酸溶液0.5mL，定容后得到空白溶液，在600～900nm之间扫描。

2 结果与讨论

2.1 红景天苷测定结果

2.1.1 线性关系的考察 分别精密量取对照品溶液2.5、5、10、12.5、15μL注入液相色谱仪，按前述色谱条件分别测定其峰面积。以对照品含量（C）为横坐标，峰面积积分值（A）为纵坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程和相关系数见表1。

表1 红景天苷、多糖、多酚的回归方程

2.1.2 精密度实验 精密吸取红景天苷对照品溶液10μL，重复进样测定3次，结果红景天苷平均峰面积分别为 1160245、1159862、1200973，RSD分别为0.43%、0.98%、0.64%。

2.1.3 稳定性实验 取红景天苷标准溶液2mL放置，分别在0、1、2、4、8、16h测定峰面积，进样量10μL。测得峰面积的平均值为 1156785，RSD为0.67%。

2.1.4 重现性实验 取大花红景天样品5份，每份0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液后测定，进样量10μL，测得红景天苷的平均含量为1.34%，RSD为0.60%。

2.1.5 加样回收实验 取已知红景天苷含量的大花红景天样品5份，每份0.25g，精密称定后，精密加入红景天苷对照品溶液4mg，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液后测定，进样量10μL，计算得回收率为101.4%，RSD为2.27%。

2.1.6 药材含量测定 称取大花红景天样品10份，每份0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算红景天苷含量。10批大花红景天药材红景天苷含量见表2，图1。

表2 10批大花红景天药材红景天苷、多糖、多酚含量结果（%，n=3）

图1 HPLC色谱图

2.2 红景天多糖的测定结果

2.2.1 最大吸收波长的选择 结果表明，对照品溶液和供试品溶液在486nm处有最大吸收峰，故选择486nm作为测定波长。

2.2.2 标准曲线的制备 精密移取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别置具塞试管中，按“1.2.2.4”项下操作，在486nm处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程和相关系数见表1。

2.2.3 精密度实验 取葡萄糖对照品溶液0.6mL，按“1.2.2.4”项下操作，在486nm处测定吸光度，重复测定5次。结果吸光度分别为 0.481、0.479、0.486、0.479、0.483，RSD为0.30%。

2.2.4 稳定性实验 取葡萄糖标准溶液0.6mL，按“1.2.2.4”项下操作，在486nm处测定吸光度。在0、 10、30、60、120、240min测定，其吸光度分别为：0.477、0.481、0.479、0.474、0.485、0.480，RSD为0.37%。

2.2.5 重复性实验 取大花红景天同一样品5份，每份2.5g，分别精密称定，按照“1.2.2.4”项下操作，在486nm处测定吸光度。结果所测样品平均含量为4.83%，RSD为1.44%。

2.2.6 加样回收实验 取已知多糖含量的药材5份，每份约0.25g，精密称定，分别精密加入红景天多糖12mg，按照样品溶液制备方法制备样品，按照“1.2.2.4”项下方法，在486nm处测定吸光度，并以葡萄糖对照品溶液作对比测定。测得平均回收率为98.6%，RSD为1.15%。

2.2.7 药材样品测定 取各大花红景天药材样品粉末各2.5g，精密称定，加水至1.0mL，再分别加入5%苯酚溶液1.6mL，摇匀，然后加浓H2SO47.0mL，充分摇匀，室温放置25min，以相应试剂为空白，在486nm处测定吸收度，并计算其含量，测定结果见表2。

2.3 多酚的含量测定结果

2.3.1 最大吸收波长的选择 结果表明，对照品溶液和供试品溶液在738nm处有最大吸收峰，故选择738nm作为测定波长。

2.3.2 标准曲线的制备 精密移取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL分别置于25mL容量瓶中，按照“1.2.3.3”项下方法，在738nm处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程和相关系数见表1。

2.3.3 精密度实验 取同一份没食子酸对照品溶液，按照“1.2.3.3”项下方法，在738nm处测定吸光度，重复测定6次。吸光度分别为：0.561、0.562、0.561、0.559、0.564、0.562，RSD为0.17%。

2.3.4 稳定性实验 取没食子酸标准溶液0.5mL，按“1.2.3.3”操作显色，在 738nm处测定吸光度，每30min测定一次吸光度。吸光度分别为：0.567、0.561、0.565、0.558、0.560、0.566，RSD为0.37%。表明在3h内吸光度基本保持恒定，稳定性良好。

2.3.5 重复性实验 取大花红景天同一样品5份，每份0.5g，分别精密称定，按照“1.2.3.3”方法操作测定，在738nm处测定吸光度。所测样品平均含量为5.55%，RSD为1.44%，表明供试品重复性良好。

2.3.6 加样回收实验 取已知多酚含量的药材5份，每份约0.1g，精密称定，分别精密加入没食子酸5.6mg，按照样品溶液制备方法制备样品，按照“1.2.3.3”项下方法，在486nm处测定吸光度，并以葡萄糖对照品溶液作对比测定。测得平均回收率为96.1%，RSD为3.81%。

2.3.7 药材样品测定 取各大花红景天药材样品粉末各0.5g，精密称定，按照“1.2.3.3”方法操作，测定，以相应试剂为空白，在738nm处测定吸收度，并计算其含量，测定结果见表2。

3 讨论

大花红景天植物在我国集中地分布在西南和西北地区，其中，以西藏地区产量最大［8］，根据文献记载，红景天易受地形、地貌、土壤、气候等各种自然条件影响，其分布与海拔高度有密切关系，多数种红景天都分布在海拔2500～5000m之间，有些种分布高度达5000m以上，1700m以下几乎没有红景天分布。从实验结果看，三省的大花红景天药材红景天苷含量均高于《中国药典》2005年版一部中规定的红景天苷含量（≥0.5%），但是，西藏所产的大花红景天药材中红景天苷、多糖、多酚类成分的含量较四川、云南的高，而且成分稳定，这可能与西藏地区海拔高度密切相关。而四川大花红景天产地与西藏海拔高度、气候条件相似，其大花红景天药材中的红景天苷、多糖、多酚类成分的含量与西藏大花红景天中的含量相近。由此可见，西藏是大花红景天药材最适宜的生长区。

［1］江林波.高原人参红景天［J］.餐饮世界，2005（9）.

［2］佟力，席军.红景天苷的药理作用研究进展［J］.中外医疗，2008，27：135-137.

［3］骆传环，高月，王作华，等.红景天多糖的抗放实验研究［J］.中国放射医学与防护杂志，1994，14（5）：340-341.

［4］骆传环，舒融，高月.高山植物红景天抗疲劳抗辐射的实验研究［J］.现代应用药学，1996，13（4）：5-7.

［5］孙非，王秀清，许守民，等.高山红景天多糖对小鼠抗柯萨奇B6病毒感染能力的研究［J］.中华实验和临床病毒杂志，1995，9（4）：361-363.

［6］李西林，南艺蕾.红景天多糖的化学药理研究进展［J］.中国中医药信息杂志，2006，13（3）：109-111.

［7］张汝学.红景天多糖对小鼠体内脾淋巴细胞转化反应及NK细胞活性的影响［J］.中国药理学通报，1993，9（4）：278-280.

［8］熊先荣.西藏红景天资源调查［J］.华西药学杂志，1995，10（3）：187-188.

［9］贺俊生，白马群增，康中林.藏东地区大花红景天资源调查［J］.西藏医药杂志，1995，16（4）：45-46.

Determination of the active ingredient content of Rhodiola crenulata in different origins

LI Dai-yu1，2，HUANG Li-feng1，2，CHEN Hong-ping1，2，XIANG Chu-bing1，2，LIU You-ping1，2，*
（1.College of Chinese Materia Medica，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine and Chinese Materia Medica，Chengdu 611137，China；2.Chinese Medicinal Standardization Lab，Chengdu 611137，China）

Objective：To provide a basis for development and to establish GAP base of Rhodiola crenulata resources，the contents of salidroside，polysaccharide，polyphenol of Rhodiola crenulata in Tibet，Sichuan and Yunnan provinces were determined.Methods：The content of salidroside，polysaccharide and polyphenol were determined by HPLC，sulfuric acid-phenol method and ferric chloride-potassium ferricyanide method，respectively.Results：The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Tibet were：1.39%，4.83%，5.71%.The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Sichuan province were：1.32%，4.78%，5.56%.The average concentrations of glycosides，polysaccharides and polyphenols of Rhodiola crenulata in Yunnan province were：1.27%，4.76%，5.51%.Conclusions：The best quality ingredient was the Rhodiola crenulata in Tibet，and the most suitable place for the growth of Rhodiola crenulata was Tibet.

Rhodiola crenulata；glycosides；polysaccharides；polyphenols；different origins

TS207.3

A

1002-0306（2011）02-0347-04

2009-11-09 *通讯联系人

黎代余（1983-），男，在读研究生，研究方向：中药化学成分与质量标准化研究。

“十一五”国家科技支撑计划项目（2006BAI06A14-10）；质检公益项目（2007GYB215）。