快速石蜡切片在小块活检组织中的应用

周永梅陈明城 赖续文 张福田

(广州军区广州总医院病理科,广东 510010)

快速石蜡切片在小块活检组织中的应用

周永梅＊陈明城 赖续文 张福田

(广州军区广州总医院病理科,广东 510010)

快速石蜡切片; 小块活检组织

目前,病理科普遍开展的常规石蜡技术,制片程序时间较长,三个工作日才能发出病理诊断报告;而有时在某些特殊情况下,送检组织已固定,不能行冰冻切片检查时,就必须在很短的时间内制好片。目前冰冻切片作为一种最快速制片方法,广泛用于术中病理诊断,但由于冰冻切片容易出现冰晶、细胞肿胀变形等现象,常导致诊断困难。为此我科开展了小组织快速石蜡切片技术,程序只需要3个半小时就能制出较好的切片,切片 HE染色核质分明,免疫组化质量近似于常规石蜡切片,现介绍如下。

材料和方法

1 材料

1.1 组织来源于我院手术的活检标本,涉及的组织部位有肺、胃、肠等组织,组织直径为0.1cm-0.5cm。

1.2 仪器和设备:德国Leica Peloris快速组织脱水机,国产塑料包埋盒,不锈钢脱水篮。

2 方法 新鲜组织取材后,分为常规石蜡处理组(对照组)和快速石蜡处理组(实验组),两组标本及组织块大小基本一致。对照组:运行时间为10个小时,处理过程:(1)10%福尔马林固定150分钟,35℃;(2)70%乙醇80分钟,常温;(3)80%乙醇 60分钟,常温;(4)95%乙醇 Ⅰ50分钟,常温;(5)95%乙醇Ⅱ40分钟,常温;(6)95%乙醇Ⅲ40分钟,常温;(7)无水乙醇Ⅰ30分钟,常温;(8)无水乙醇Ⅱ30分钟,常温;(9)二甲苯Ⅰ30分钟,常温;(10)二甲苯Ⅱ30分钟,常温;(11)石蜡 Ⅰ30分钟,62℃;(2)石蜡Ⅱ30分钟,62℃;(3)石蜡Ⅲ30分钟,62℃。

实验组:运行时间为3小时27分,处理过程:(1)10%福尔马林固定15分钟,55℃;(2)70%乙醇8分钟,55℃;(3)80%乙醇8分钟,55℃;(4)95%乙醇Ⅰ15分钟,65℃;(5)95%乙醇Ⅱ15分钟,65℃;(6)95%乙醇Ⅲ15分钟,65℃;(7)无水乙醇Ⅰ15分钟,60℃;(8)无水乙醇Ⅱ15分钟,60℃;(9)二甲苯Ⅰ15分钟,65℃;(10)二甲苯Ⅱ15分钟,65℃;(11)石蜡Ⅰ15分钟,70℃;(2)石蜡Ⅱ15分钟,70℃;(3)石蜡Ⅲ15分钟,70℃。两组组织均进行石蜡包埋和切片,两种方法所做切片同时进行 HE染色和免疫组化染色。

结 果

两组 HE染色结果:实验组切片组织完整,组织细胞结构清晰,细胞核与细胞浆对比染色好(如图1)。对照组制片均达到优良标准,组织结构清晰,细胞收缩少,无皱纹(如图2)。两组免疫组化染色结果均无脱片现象,阳性与阴性对比明显,阳性物质定位准确,背景干净清晰,无非特异性着色,染色结果稳定可靠(如图3,4)。完全达到诊断要求,大大提高了工作效率。

讨 论

1 我们对临床常送检的小块活检组织用上述的实验方法处理,时间明显缩短,组织脱水、透明、和浸蜡效果良好,标本处理适当,组织结构完整,细胞轮廓清晰且境界清楚,更接近常规石蜡 HE切片,可避免冰冻切片造成的组织学假象而误诊[1]。提高了工作效率,提供了准确的病理诊断依据,快速石蜡切片不失为一种简便、快捷的好方法。

2 脱水机的程序设定与制片质量的优劣密切相关,不仅涉及常规切片的制作和诊断,对于免疫组化及分子生物学技术等几乎所有与之相关的病理学项目均产生重要的影响。磁力搅拌器是由电机带动磁钢利用电磁产生的旋力磁场而使烧杯内的铁质搅拌子转动,并依照转速大小在溶液中形成一种龙卷风样震波,组织在高温和经强化转动的高浓度脱水液作用下,内部产生震波来加速分子间的热运动,兼之离心效果组织内的水分在比重与渗透压等因素的影响下,较快地被置换和析出而达到脱水之目的。

我们使用Leica Peloris脱水机设定的快速石蜡程序,充分利用了磁力搅拌器的先进技术,在适宜的温度和压力条件下,加速溶液分子运动,以促进脱水溶液与组织内水分交换及透明时对组织的渗透力,缩短透明浸蜡时间,加强组织的处理效果,从而使组织达到加速固定、脱水、透明浸蜡作用[2],有利于制作切片。

[1]孟奎,李博,石群立,等.提高快速石蜡切片质量的广法和经验体会.临床与实验病理学杂志,2001,17(4):362-363

[2]泮黎明.介绍小组织活检标本快速石蜡切片方法.诊断病理学杂志,1998,5(2):109

图 版 说 明

图1 同一直肠癌组织,快速石蜡制片显示切片组织细胞结构清晰,细胞核与细胞浆染色对比好。×200

图2 常规法处理的直肠癌组织。×200

图3 同一食管癌组织,快速石蜡切片后免疫组化染色染色结果与常规处理组织无明显差异,Ki67阳性定位准确、背景清晰。EnVision法。×100

图4 常规法处理的食管癌组织,Ki-67阳性表达于细胞核。EnVision法。×100

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 The same rectal cancer tissue treated by rapid paraffin methed shows clear structure and obvious contrast of nuclei to cytoplasm.×200

Fig.2 Rectal cancer tissue treated by routine method ×200

Fig.3 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of the same esophageal carcinoma tissue treated by rapid paraffin methed.There is no obvious difference of stain result compared with the routine method.×100

Fig.4 Ki-67 positively expressed in cell nuclei of esophageal carcinoma tissue treated by routine method.×100

R466

A

10.3870/zgzzhx.2011.02.022

2010-10-10

2010-11-01

周永梅,女(1978年),汉族,技师

＊通讯作者(To whom correspondence should be addressed)