HPLC测定女贞子及其制剂益肾灵颗粒中红景天苷的含量

李辉 张艳 徐汉斌 邵晓霞

中药女贞子为木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)的干燥成熟果实，是我国传统的扶正固本药物，含多种活性成分，其中红景天苷亦为其成分之一［1］。红景天苷具有扩张阻力血管、抗心肌缺血［2］、抗纤维化等多种药理作用［3］。但由于红景天药材资源匮乏，价格昂贵。女贞子药材主产于江苏、河南、山西、甘肃等地，极易得到，且价格便宜。如能对女贞子中的红景天苷进行有效利用，其开发价值不言而喻。益肾灵颗粒为《中国药典》2010版一部品种［4］，含有栀子、女贞子等多味药材。其中红景天苷的TLC鉴别作为该品种录入《中国药典》2010版时的质量标准中新增的鉴别项目，由此可以看出女贞子中红景天苷的成分正在逐渐被认可。为此，我们对女贞子药材和益肾灵颗粒中所含的红景天苷进行含量测定。

1 仪器、试剂与样品

1.1 仪器 756-MC型分光光度计，KQ-50B型超声波振荡仪，FW80微型高速万能粉碎机，岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，检测器SPD-M10AVP。

1.2 试剂与样品 红景天苷对照品:购自中国药品生物制品检定所(编号110810-200404，供含量测定用);女贞子药材、益肾灵颗粒样品:南京中山制药有限公司提供。试药:均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-水(15∶85);流速:1.0 ml/min;进样量:10 μl;检测波长:275 nm。

1.2 女贞子药材供试品溶液的制备 取女贞子药材粉成细粉，粉末过3号筛。精密称取药材粉末约2 g，加甲醇50 ml，超声处理30 min，过滤，滤液蒸干后，残渣用流动相使溶解，移至10 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为药材供试品溶液。

1.3 益肾灵颗粒供试品溶液的制备 取本品粉成细粉，精密称取粉末约20 g，按照“女贞子药材供试品溶液的制备”方法制备，作为制剂供试品溶液。

1.4 对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品适量，加流动相制成1 ml含有0.1344 ml的红景天苷的溶液，作为对照品溶液。见色谱图1～3。

1.5 标准曲线的制备 分别精密吸取红景天苷上述对照品溶液1、3、5、6、7、9 ml至 10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度。按上述色谱条件分析，每次进样10 μl，以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为Y=295594X-20771，R2=0.9994(n=7)，红景天苷在0.134～1.344 g范围内呈良好线性关系。

1.6 精密度实验 精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，测定峰面积积分值，其RSD为1.7%。

1.7 重复性试验 取女贞子药材样品6份，分别按药材供试品溶液的制备方法制备、测定，结果红景天苷的含量分别为:0.424、0.426、0.432、0.441、0.431、0.444 mg/g，平均为0.432 mg/g，RSD为1.9%，证明该方法重现性良好。

1.8 稳定性试验 取同一药材供试液，按上述色谱条件测试5次，每次间隔2 h，测得峰面积积分值，其RSD为1.7%。证明该供试液8 h内稳定。

1.9 回收率测定 精密称取已知红景天苷含量的女贞子药材5份，分别加入一定量的红景天苷对照品，照2.2项下方法进行供试品溶液的制备并如法测定，计算加样回收率，测得红景天苷的平均回收率为96.3%，RSD为1.5%。结果见表1。

图1 红景天苷对照品HPLC图谱

图2 女贞子药材HPLC图谱

图3 益肾灵颗粒HPLC图谱

表1 加样回收率实验结果

1.10 女贞子药材及益肾灵颗粒含量测定 分别取两个产地的药材样品和3个批号的益肾灵颗粒样品，按上述方法进行含量测定，测定结果见表2。

表2 样品含量测定结果

2 结果和讨论

3.1 经紫外分光光度计扫描，红景天苷在275 nm处有最大吸收。

3.2 采用HPLC测定红景天苷含量的方法在《中国药典》2010年版已有收载［6］，但采用流动相溶解样品不但可以保证样品含量的有效转移，而且也有效地去除脂溶性的杂质。不仅保证了样品的分离效果，同时也有效地保护了色谱柱。

3.3 通过阴性试验，益肾灵颗粒样品无干扰。

3.4 由于女贞子药材样品量较少，而且未能和益肾灵颗粒样品进行一一对应，需要在后续的试验中不断积累数据，以便确认红景天苷在益肾灵颗粒生产过程中的转移率。

该法测定女贞子药材和益肾灵颗粒中红景天苷的含量，操作简便，专属性强，重复性好，结果准确，可用于女贞子药材和益肾灵颗粒的质量控制。

［1］ 赵继宵，杨瑾，董根玲，等.女贞子研究进展.中华医学写作杂志，2004，11(18):1599-1601.

［2］ 胡敏.红景天苷对心血管系统作用的研究.国外医学心血管疾病分册，2003，30(5):298-300.

［3］ 王晓东，刘永忠，刘永刚.红景天苷体外抗肝纤维化的实验研究.时珍国医国药，2004，15(3):138-139.

［4］ 《中国药典》一部.2010，1027-1028.