HPLC法测定维生素B12片的含量

北京市海淀区药品检验所（100083）张静 刘志杰 李东辉

维生素B12片现行标准为《化学药品地方标准上升国家标准》第十一册，含量测定采用紫外分光光度法。维生素B12光学稳定性差，一般采用包糖衣这种剂型。糖衣对紫外吸收有影响，这就要求在避光条件下剥去糖衣。此法费时且对人员操作要求高，结果重现性差。笔者采用高效液相色谱法，排除了糖衣包衣对含量测定的影响，省去了剥去糖衣的繁琐步骤，从而解决了重现性差的问题。

附图 维生素B12 HPLC色谱图

1 仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-20AT，岛津SPD20A检测器，LCsolution色谱工作站；电子天平：sartorius BP211D（d=0.01mg）。维生素B12对照品（中国药品生物制品检定所，批号： 100248-200201）；乙腈（色谱纯），磷酸二氢钾（分析纯）；维生素B12片3批（批号为C 090102；C 090302；C 080703）及空白辅料（由山西云鹏制药有限公司提供）。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 参考文献[1～3]中选用色谱柱：SymmetryC18（150mm×4.6mm，5μm）（Waters），流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾（用磷酸调节pH值至3.0）（13∶87），检测波长为237nm，室温，流速：1.0ml·min-1，进样量10μl，理论板数按维生素B12峰计算不低于2000，空白辅料无干扰。见附图。

2.2 溶液的制备 （避光操作）

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取维生素B12对照品10.20mg，置200ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取维生素B12片（25μg）50片，置25ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取厂家提供的空白辅料同法制备。

2.3 线性关系试验 分别取上述对照品溶液5μl，8μl，10μl，12μl，15μl注入液相色谱仪，每个进样梯度连续进样3次，取平均值，以进样量X（μg）为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标进行线性回归，方程为Y=1.162×106X+6.920×103，线性范围为0.255～0.765μg/ml。

2.4 精密度试验 取上述对照品溶液10μl，连续进样6次，维生素B12峰面积相对标准偏差（RSD）为0.27%。

2.5 稳定性试验 取上述供试品溶液，分别于0，2，4，8小时进样测定，维生素B12峰面积基本保持不变，RSD为0.87%。

2.6 回收率试验 取对照品溶液12.5ml，维生素B12片（25μg）25片，置同一25ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。根据峰面积计算其回收率（n=3）为98.5%，RSD为0.08%。

2.7 最低检测限 将对照品溶液逐步稀释，以信噪比为3作指标，测得维生素B12的最低检测限分别为 2ng。

2.8 样品测定 按上述色谱条件进样10μl分析，根据标准曲线，3批样品含量依次为102.5%（n=3，RSD=0.2%）、103.3%（n=3，RSD=0.1%）、102.8%（n=3，RSD=0.2%）。

3 讨论

本文采用HPLC法测定维生素B12片含量。本法省去剥糖衣步骤，直接加样溶于容量瓶中，过滤后测定，减少了避光操作带来的不便。此法操作方便，快速，重现性好，可用做测定维生素B12含量的方法。