高效液相色谱法测定功劳木溶液中盐酸小檗碱的含量

广西桂林食品药品检验所（541002）蒋玲

广西中医学院（530001）曾榕榕

功劳木溶液是由功劳木药材经提取加工制成的溶液型医院制剂，具有清热解毒，消毒杀菌之功效，临床上用于冲洗伤口或湿敷患处。该医院制剂现行质量标准中无含量测定项目[1]。功劳木中主含盐酸小檗碱[2]。本研究采用高效液相色谱法测定制剂中盐酸小檗碱的含量，结果满意。

1 仪器与试药

美国Waters公司515HPLC泵，Waters2487检测器，Waters717自动进样器，Easy3000色谱工作站。

盐酸小檗碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（含量98.1%，批号：110713-200609），功劳木溶液由桂林市中医院提供（批号：20080103、20070321、20060926、20060216），乙腈、磷酸为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：phenomenex C18色谱柱，（5µm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.1%十二烷基硫酸钠-磷酸（480：520：1）；流速：1.0ml•min-1；检测波长：265nm；柱温：30℃；进样量：10µl。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱10.10mg，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为储备液。取储备液1ml，置20ml量瓶中，加甲醇至刻度（含盐酸小檗碱9.9081µg•ml-1）摇匀，微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密吸取供试品2ml，置25ml容量瓶中，加盐酸－甲醇（1∶100）溶液至刻度，摇匀；精密吸取2ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定波长选择 取盐酸小檗碱对照品加甲醇制成每1ml含10µg的溶液，在200～400µm范围内进行紫外扫描，结果在265nm处有最大吸收，故选择265nm为测定波长。

2.5 空白试验 本品为单一药材制成的制剂，以溶剂作为空白溶液，再取上述对照品溶液和供试品溶液，照色谱条件测定，结果表明溶剂对测定无干扰，见附图。

附图 HPLC色谱图

2.6 线性范围考察 取盐酸小檗碱对照品储备液2ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。微孔滤膜滤过，取续滤液，分别进样1µl、2µl、5µl、10µl、15µl、20µl、25µl、30µl进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归，盐酸小檗碱回归方程为：Y=4882966X－2419，r＝0.99996，表明盐酸小檗碱在0.03964µg～1.18897µg范围内线性关系良好。

2.7 稳定性试验 对同一供试品溶液（批号：20080103），分别在0h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、18 h测定。结果，盐酸小檗碱峰面积积分平均值为661549，RSD为 1.3%，说明供试液在18小时内稳定。

2.8 精密度试验 取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样5次，峰面积的RSD为0.7%，说明精密度良好。

2.9 重复性试验 精密量取同一供试品（批号：20080103）6份，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，按色谱条件测定。结果平均含量为2.087mg•ml-1，RSD＝0.8%。

2.10 回收率试验 精密量取已知含量的供试品（批号：20080103）1ml，精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定并计算回收率。结果，盐酸小檗碱平均回收率为 100.4%，RSD＝1.3%（n＝6），见附表1。

附表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果

附表2 样品含量测定结果

2.11 样品测定 取样品，分别按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，测定，结果见附表2。

3 讨论

3.1 考察了乙腈-磷酸二氢钾缓冲液（用磷酸调至pH3.0）、乙腈-十二烷基磺酸钠-磷酸和乙腈-十二烷基硫酸钠-磷酸等流动相系统，同时还考察了以不同浓度的十二烷基硫酸钠作为水相时对峰形、分离度、理论塔板数、保留时间等的影响，最后确定以乙腈-0.1%十二烷基硫酸钠-磷酸（480：520：1）为流动相，在此条件下，理论塔板数高、峰形较好、分离效果最佳。值得借鉴使用。

3.2 对柱温20℃、25℃、30℃、35℃、40℃进行比较，以25℃～30℃效果最佳。

3.3 供试品溶液制备方法的选择。比较了供试品2ml，先加盐酸-甲醇（1∶100）至25ml，再取2ml加甲醇至25ml，两步均用甲醇稀释的方法，结果以前者为佳。