肾活检用Schiff试剂的配制及保存

孙 璟，杨剑辉

肾活检全称为肾穿刺活体组织检查法，目前临床常用的方法是在B超引导下，利用穿刺枪从肾脏获取微量肾脏标本后，在显微镜下观察肾组织学变化。它能对许多肾脏病的诊断、治疗以及预后评估提供重要的依据，其价值是其它血、尿检验所不能替代的，现已成为肾内科常做的一项重要检查。过碘酸-Schiff（PAS）特殊染色在肾穿刺活检病理中主要用于显示肾小球系膜区的范围和基膜的厚度，也可显示肾小球内某些渗出性蛋白、节段性硬化和结节性病灶。因此在该病理诊断中起着非常重要的作用，但是由于PAS染色常常受到各种因素的影响，在实际工作中常存在Schiff试剂难以配制且配制好后保存易失效的问题。通过反复实践，笔者总结了一些经验体会，取得了较好的染色效果，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 新鲜肾穿刺组织，用10%的中性甲醛液固定，特殊脱水处理，经石蜡包埋，切片厚2～3 μm，做过碘酸雪夫（PAS）染色。

1.2 试剂配制 ①0.5%高碘酸液的配制：高碘酸0.5 g，蒸馏水100 ml；此液溶解后保存于冰箱中待用；②Schiff液配制：先将100 ml蒸馏水煮沸，加入0.5 g碱性复红，再煮沸1 min，使其彻底溶解，此时溶液呈深红色，待其冷却到50℃时过滤加入10 ml的1 mol/L盐酸，待25℃，加入0.5～1 g偏重亚硫酸钠，塞住瓶口，摇动容器以充分混合，在室温、暗处至少静置24 h，加入0.7 g活性炭，轻摇数分钟，静置1～2 h后，用滤纸过滤至棕色瓶内，此时溶液为无色透明液体，封口，注意一定放入4℃冰箱避光保存。

1.3 方法 ①切片常规脱蜡至水；②0.5%高碘酸氧化10 min；③流水冲洗2 min；④入Schiff液于暗处加盖染色10～20 min；⑤流水冲洗5 min；⑥用Harri明矾苏木素液染核2～3 min，0.5%盐酸乙醇分化，自来水洗后细胞核变蓝为止；⑦无水乙醇脱水、风干、透明、封片。

2 结 果

在显微镜下，结果显示肾小球系膜基质、胶原纤维及包浆均呈红色，细胞核呈蓝色。

3 讨 论

试剂配制和浓度确定是有效染色的重要因素，PAS染色中，过碘酸是一种氧化剂，它可把多糖的葡萄糖分子的两个相邻的带有羟基的-C-C-键打开，而生成醛基再与染色剂结合。高碘酸液浓度一般为0.5%～1%，pH值为3～5。对组织进行单一化学染色时，高碘酸液浓度可适当降低，如肾穿刺活检组织以0.5%为宜；进行免疫组化和组织化学重复染色时，因染色过程组织受到一定程度破坏，高碘酸液浓度可适当提高，以1%为宜。另外，染色时若环境温度较高且高碘酸作用时间长，可使某些物质成分发生非特异反应，使结果出现假阳性。因此，环境温度较高时，可适当缩短反应时间。

Schiff试剂中主要染料是碱性品红，经亚硫酸和二氧化硫的作用，醌式结构的双键被破坏而消失，已成为无色复红，再经过氧化后的醛基与无色复红液进行结合呈紫红色[1]。因此Schiff试剂质量如何，主要取决于所用试剂碱性品红的质量、与配制方法、所用器皿的清洁程度及保存是否妥当有关。配制Schiff试剂时，尽量使用高质量的碱性品红与偏重亚硫酸钠等试剂，配制过程中必须使用洁净的器皿，因如和碱性物质接触也可使无色品红立即变红而无效，要避免污染。配制后的Schiff试剂可以小瓶分装，置于冷冻箱内保存，临用前取出一小瓶恢复至室温后使用即可[2]。室温在15℃以下时可用40℃温水稍加温进行反应。染色时，根据Schiff试剂配制的时间与环境温度，可适当调节作用时间，注意一定要避光染色。染色过程中不可用自来水冲洗太久，防止返红，另外染色过程中不能接触伊红，否则会造成颜色误差。

判别Schiff试剂是否失效，主要看储存Schiff液是否变为橘红色或粉红色，打开盖，气味偏淡或无强烈的刺激性气味，则证明Schiff试剂已变质并失效。解决方法是：重新添加偏重亚硫酸钠（Na2SO3）补充H2SO3，取偏重亚硫酸钠加入到无色品红失效液中，加入量为每10 ml无色品红失效液加大约0.05～0.07 g偏重亚硫酸钠，可恢复其染色力，用上述纠正后的试剂染色，结果均为红到紫红色。这时失效的Schiff试剂颜色恢复至无色并带有强烈的刺激性气味。通过反复实践操作发现[3]，用失效的Schiff试剂及纠正后的Schiff试剂分别对肾组织染色。肾穿组织经过处理后Schiff液染色后基底膜呈红色，见图1、2，效果非常好。

图1 失效的Schiff试剂PAS染色

图2 纠正后的Schiff试剂PAS染色

综上所述，在肾穿刺活检病理PAS染色过程中，应该注意固定液的选择，试剂配制质量、试剂保存方法，染色作用时间等细节问题，PAS染色将会取得满意的效果，这对肾脏病理诊断具有重要意义，也可为临床提供治疗依据。

[1]王伯沄，李玉松，黄高昇，等.病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2001.150.

[2]沈洪武，王建彪，苏海燕.PAS染色试剂的保存方法[J].临床与实验病理学杂志，2004，20（2）：235.

[3]刘 涛，王 珏，张 健，等.介绍一种PAS染色中无色品红液失效后的解决方法[J].临床与实验病理学杂志，2007，23（2）：230.