活血舒筋贴膏剂的质量标准研究Δ

张丽芬，刘志承，索 娟，刘纪青，李曙光（深圳市中医院，深圳市 518033）

活血舒筋贴膏剂的质量标准研究Δ

张丽芬＊，刘志承，索 娟，刘纪青，李曙光（深圳市中医院，深圳市 518033）

目的：建立活血舒筋贴膏剂的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对没药挥发油进行鉴别；采用高效液相色谱法对制剂中紫丁香苷进行含量测定。结果：TLC斑点清晰，分离度好；紫丁香苷进样量在0.138～0.690 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.9999），平均回收率为98.50%，RSD＝3.04%（n＝6）。结论：所建标准可用于活血舒筋贴膏剂的质量控制。

活血舒筋贴膏剂；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

活血舒筋贴膏剂系根据我院的传统验方活血舒筋熏洗剂剂型改革而成，该方具有活血散瘀、舒筋通络、消肿止痛的功效，临床用于治疗跌打损伤、积瘀肿痛、伤筋骨折、局部肿痛等证。笔者将其剂型改为巴布贴膏剂。因其质量标准欠完善，不利于控制该产品的质量，故笔者通过薄层色谱（TLC）法对方中没药所含挥发油进行鉴别，根据文献[1，2]采用高效液相色谱（HPLC）法测定方中主药救必应的主要成分紫丁香苷的含量，为活血舒筋贴膏剂的质量标准建立提供参考。

1 仪器与试药

KQ2200DE医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；LC-10AD HPLC仪，包括Shim-pack CLC-ODS色谱柱、C-R4A数据处理器（日本岛津公司）。

紫丁香苷对照品（批号：11574-200701，供含量测定用）、没药对照药材（批号：967-200202）均购自中国药品生物制品检定所；活血舒筋贴膏剂（本院自制，批号：20100301、20100302、20100303）；没药、救必应、乳香、三棱、莪术、艾叶、花椒、桂枝等药材均购自广州康美药业股份有限公司，经深圳市中医院药学部刘纪青主任中药师鉴定符合药典规定；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 活血舒筋贴膏的制备

按处方比例称取没药、乳香、三棱、莪术、艾叶、花椒、桂枝等，水蒸气蒸馏法提取挥发油，β-环糊精包合得挥发油包合物，药渣与救必应、制草乌、制川乌、透骨草、威灵仙、海桐皮药材粗粉，加6倍量90%乙醇加热回流提取2次，合并提取液，滤过，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.05～1.15（20～30℃）的浸膏。挥发油β-环糊精包合物加入浸膏混匀于贴膏基质（聚丙烯酸钠（PANA）∶甘油∶柠檬酸∶氢氧化铝＝1.25∶2.5∶0.26∶0.12）中，涂于背衬材料上，制得活血舒筋贴膏剂。

2.2 没药挥发油的TLC鉴别

取活血舒筋贴膏1片，剪碎，置锥形瓶中，加入环己烷20 mL溶解，密闭，超声提取30 min，滤过，滤液浓缩至1 mL，作为供试品溶液；取没药对照药材10 g，粉碎，水蒸气蒸馏法提取挥发油，加入环己烷10 mL，制得没药对照药材溶液；按处方比例称取缺没药的其他药材，按制备工艺制备阴性样品，照上法方法制备缺没药的阴性对照溶液。照TLC法[3]试验，分别吸取上述溶液各10 μL点于同一块硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。没药的TLC见图1。

图1 没药的TLCFig 1 TCL of Myrrha

2.3 紫丁香苷的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Shimpack CLC-ODS（150 mm×6.0 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（1∶9）；流速：1.0 mL· min-1；检测波长：265 nm；柱温：常温；进样量：20 μL。理论板数按紫丁香苷峰计算不低于3000。色谱见图2。

图2 高效液相色谱图Fig 2 HPLC chromatograms

2.3.2 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的紫丁香苷对照品适量，加水溶解，制成每1 mL含69 μg的溶液，备用。

2.3.3 供试品溶液的制备 取样品1片，除去盖衬，精密称定，置具塞锥形瓶中，加50%甲醇150 mL，密塞，超声处理30 min，滤过，滤液转移至200 mL量瓶中，残渣加50%甲醇洗涤2次，每次20 mL，洗涤液滤过，加50%甲醇至刻度，摇匀，取适量过0.45 μL滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3.4 救必应药材溶液的制备 称取适量救必应药材，按“2.3.3”项下方法制备，即得。

2.3.5 缺救必应阴性对照溶液的制备 按处方比例称取缺救必应的其他药材，照制备工艺制备阴性样品，按“2.3.3”项下方法制备缺救必应的阴性对照溶液。

2.3.6 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取上述对照品溶液各20 μL，分别注入色谱仪中，依法测定。以紫丁香苷的进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝871901X+739（r＝0.9999）。结果表明，紫丁香苷的进样量在0.138～0.690 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.7 精密度试验 取对照品溶液，按上述色谱条件连续测定6次。结果，平均峰面积为359831，RSD＝0.66%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.3.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、30、60、120、180、240 min依法测定。结果，平均含量为6.94 mg·g-1，RSD＝0.6%（n＝6），表明供试品溶液在240 min内基本稳定。

2.3.9 重复性试验 取同批号样品6份，分别按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，紫丁香苷平均含量为6.84 mg·g-1，RSD＝3.3%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.3.10 加样回收率试验 精密称取已测定紫丁香苷含量的同批样品约0.50 g共6份，分别精密加入紫丁香苷对照品溶液10 mL（精密称取已干燥至恒重的紫丁香苷对照品适量，加水溶解，制成0.305 mg·mL-1的溶液），按“2.3.3”项下方法制成供试品溶液，并测定含量，计算加样回收率，结果见表1。

2.3.11 样品含量测定 取不同批次活血舒筋贴膏样品，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，并测定贴膏中紫丁香苷含量。结果，3批（批号：20100301、20100302、20100303）样品含量分别为6.84、6.81、6.86 mg·g-1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

3 讨论

活血舒筋贴膏在保持该品种原有疗效的前提下，将薰洗剂改进为巴布贴膏剂，克服了原制剂的缺点。为更好地控制该制剂质量，保证临床疗效，本研究制定了没药挥发油的TLC鉴别法，方法简便、可行；并对主药救必应中的有效成分紫丁香苷的含量采用HPLC法测定，方法简便、专属性强、重复性好，可有效地控制活血舒筋贴膏剂的质量。

[1] 罗集鹏，毕培曦.救必应的形态组织学与高效液相色谱法鉴别[J].中药材，1992，15（12）：24.

[2] 林 彤，梁广华.高效液相色谱法测定救必应及其制剂中紫丁香苷的含量[J].中国中药杂志，2000，25（11）：671.

[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录31.

Quality Standard of Huoxue Shujin Plaster

ZHANG Li-fen，LIU Zhi-cheng，SUO Juan，LIU Ji-qing，LI Shu-guang（Shenzhen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Shenzhen 518033，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Huoxue shujin plaster.METHODS：The volatile oil of Commiphora Myrrha was identified by TLC and the content syringin was determined by HPLC.RESULTS：The TLC spots were clear and well-separated.The linear range of syringin in Huoxue shujin plaster was 0.138-0.690 μg（r＝0.9999）with an average recovery of 98.50%（RSD＝3.04%，n＝6）.CONCLUSION：The method was reproducible for the quality control of Huoxue shujin plaster.

Huoxue shujin plaster；Quality standard；TLC；HPLC

R284.2；R283.621

A

1001-0408（2011）11-1012-03

＊副主任药师，硕士。研究方向：中药材和中药制剂的质量标准。电话：027-85332366。E-mail：linshihe1974@tom.com

2010-11-03

2011-01-28）