偏正颗粒的提取工艺优选及其急性毒性试验

王 华，王 莉，马金秋

(山东省秦皇岛市第一医院，山东 秦皇岛 066000)

偏正颗粒的提取工艺优选及其急性毒性试验

王 华，王 莉，马金秋

(山东省秦皇岛市第一医院，山东 秦皇岛 066000)

目的 优选偏正颗粒的提取工艺并考察其醇沉工艺，观察偏正颗粒的急性毒性反应。方法 以欧前胡素含量为指标，采用正交试验法优选偏正颗粒的提取工艺;通过对小鼠灌胃给药，观察偏正颗粒对小鼠的毒性反应。结果 优化的提取工艺为加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h，并选用50%的乙醇沉淀;将因偏正颗粒的毒性反应出现死亡的动物解剖，未见明显病理改变。结论 优选的工艺合理、可行。偏正颗粒在规定剂量下使用安全。

偏正颗粒;正交试验;欧前胡素;急性毒性试验

偏正颗粒是医院自制的中药制剂，批准文号为秦药剂字[2001]普－01－020号，处方系我院临床应用多年的协定处方，由白芷、川芎、细辛、苍耳子、元胡、罂粟壳、天麻、菊花等药材组方，具有除湿散寒、行气活血的作用，用于治疗风湿或寒湿所致的偏头痛及头痛，效果比较理想。笔者对偏正颗粒的提取和醇沉工艺进行了考察，以方中君药白芷有效成分欧前胡素含量为指标进行L9(34)试验[1]，筛选了偏正颗粒的最佳提取纯化工艺;又因方中制草乌为药典中收录的毒性药材，故对其进行了急性毒性试验。现报道如下。

1 仪器、试药与动物

Agilent高效液相色谱仪;23200型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);124型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。欧前胡素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为826－9904);甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯;偏正颗粒(秦皇岛市第一医院制剂中心提供，规格为8 g/包)。昆明种小白鼠(河北省实验动物中心提供，合格证号为DK0412－0115)，实验室温度为(22±2)℃，相对湿度60±2)%，试验观察期间饲以该中心提供的固体饲料，自由饮水。

2 方法与结果

2.1 水提取工艺优选

2.1.1 因素水平

为有效提取药材，经过初步考察，选取了对提取物收率影响较大的浸泡时间(因素A)、加水量(因素B)、提取时间(因素C)、提取次数(因素D)作为考察因素，药材适当粉碎，以欧前胡素含量为考察指标，按表1水平以L9(34)表进行试验。

表1 水提取工艺正交试验因素水平表

2.1.2 正交试验

提取液制备按处方比例称取所有药材111 g，共9份，适当碎段，按正交试验设计方案，加水煎煮提取，提取液浓缩至约80 mL，移至100 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。

欧前胡素含量测定:精密吸取上述提取液10 mL，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液;取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含15 μg的溶液，即得对照品溶液。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－水(62∶38)为流动相，检测波长为310 nm，理论板数按欧前胡素峰计算不低于1 000。吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μL，分别用高效液相色谱仪，测定峰面积，按外标法计算欧前胡素含量。

正交试验结果:见表2及见表3。可见，以欧前胡素含量为考察指标，因素影响大小依次为提取次数、加水量、提取时间、浸泡时间，最佳工艺为A2B2C2D1，即加入6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。

表2 水提取工艺正交试验结果

2.1.3 验证试验

按处方称取药材3份，分别按选定的最佳工艺进行提取，结果欧前胡素含量分别为 12.81，12.78，12.76 mg/g。可见，按照最佳水提取工艺进行提取，欧前胡素的含量最高。

表3 方差分析结果表

2.2 醇沉工艺考察

通过查阅资料并结合工作中的实际经验，发现全方水提浸膏容易吸潮，且不容易制粒，必须加辅料以降低黏性和吸湿性，但会导致服用药量较多，故应对水提液进行醇沉。按处方比例称取所有药材共412 g，酌情碎断，按最佳水提工艺加水煎煮提取，提取液浓缩至相对密度1.04～1.05(70℃)，分成4等份，其中3份分别加95%乙醇至醇体积分数40%，50%，60%，充分搅拌，置4℃以下冰箱中24 h，过滤，浓缩至约450 mL，用水定容至500 mL量瓶中。按2.1.2项下欧前胡素测定含量。结果乙醇体积分数为0，40%，50%，60% 时欧前胡素含量分别为 9.62，9.60，9.58，8.26 mg/g。可见，醇沉对欧前胡素的含量有影响，但影响不是很大，当乙醇体积分数为50%时欧前胡素含量降低较少，且溶液较澄清。故选用50%的乙醇沉淀，即于水提取液中加入2倍量95%乙醇。

2.3 急性毒性试验[2]

采用灌胃针给小鼠喂药，给药后立即计时，详细观察动物给药后反应，记录症状出现或死亡时间和出现反应的动物数量。

取小鼠5只。取偏正颗粒35 g，加水研磨至50 mL，配成70%的混悬液，按每10 g体重0.4 mL给小鼠灌胃，间隔2 h再给药1次，共给药2次。第2次给药后约40 min，有2只小鼠死亡，尸检仅见胃肠充盈，余未见异常。观察7 d，未再有小鼠死亡。给药量为56 g/kg，约为人临床剂量的207倍。

取小鼠20只，雌雄各半，体重18～22 g。取70%的偏正颗粒混悬液45 mL，加水稀释至53 mL，配成59%混悬液，按每10 g体重0.4 mL给小鼠灌胃，间隔2 h再给药1次，共给药2次，观察7 d。结果除见小鼠活动减少外，小鼠饮食、大小便、行为活动等未见异常，未见死亡发生。给药前雄性小鼠体重(20.9±1.3)g，7 d后(28.1±1.7)g;给药前雌性小鼠体重(19.7±1.2)g，7 d 后体重(26.9 ±2.0)g。给药量为 47 g/kg，约为人临床剂量的 174 倍。

3 讨论

正交试验结果表明，偏正颗粒的最佳提取工艺为白芷、川芎、细辛等8味药材加6倍量水，浸泡1 h，煎煮2次，每次1 h。并对其水溶液选用50%的乙醇进行沉淀后过滤。验证试验也表明，该工艺条件合理、有效成分含量较高，稳定可行。

偏正颗粒的临床给药剂量为2次/d、每次8 g，即0.32 g/kg体重。小鼠急性毒性试验表明，小鼠的最大耐受量为47 g/kg，约为人临床剂量的174倍。提示偏正颗粒在规定剂量下服用安全。

[1]杨宏建，肖美凤，袁 丽，等.正交实验优选三棵针中小檗碱的提取工艺[J].中国药师，2005，8(12):673－675.

[2]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南[M].北京:人民卫生出版社，1993:203.

Study on Extraction Technology of Pianzheng Granules and Acute Toxicity Test

Wang Hua， Wang Li， Ma Jinqiu
(No.1 Hospital of Qinhuangdao City， Qinhuangdao， Hebei， China 066000)

Objective To optimize the extraction process and condition of Pianzheng Granules and to investigate the alcohol precipitation echnology and the acute toxic reactions of Pianzheng Granules.Methods The extracting technology for Pianzheng Granules was optimized by orthogonal design with the imperatorin content as index.Mice were given the drug by gavage and their acute toxic reactions were observed.Results The optimum extraction conditions were adding 6 times amount of water，soaking for 1 h and decocting twice，1 h for each ime and selecting 50% ethanol for precipitation.The obvious pathologic changes were not observed in the dead animal.Conclusion The optimized extracting technology of Pianzheng Granules is rational and feasible.Pianzheng Granules is safe and reliable in regulated doses.

Pianzheng Granules;orthogonal design;imperatorin;acute toxicity

TQ461;R285.5

A

1006－4931(2011)04－0045－02

2010－03－11;

2010－08－13)

王华，女，主管药师，主要从事医院药学工作，(电话)0335－5908035(电子信箱)yyyf6285@sina.com。