两种广藿香精油的抗菌作用研究

莫小路，蔡岳文，袁亮，陈瑜珍，严振*

（广东省中药研究所，广东 广州 510 520）

两种广藿香精油的抗菌作用研究

莫小路，蔡岳文，袁亮，陈瑜珍，严振*

（广东省中药研究所，广东 广州 510 520）

目的：为广藿香的质量评价提供药理学实验基础。方法：以金黄色葡萄球菌等7种细菌和产黄青霉等3种真菌为供试微生物，用琼脂平板打孔法测定石牌广藿香和海南广藿香精油的抑菌圈大小，用固体二倍稀释法测定精油的最小抑菌浓度 （MIC）。结果：石牌广藿香精油对7种供试细菌的抑制效果与海南广藿香相近，而对3种供试真菌的抑菌作用显著高于海南广藿香精油。结论：石牌广藿香是栽培广藿香中的优质品种，其抗真菌作用显著强于海南广藿香。

广藿香；精油；抗菌作用

广藿香Pogoste monca blin（Blanco）Benth.为唇形科刺蕊草属植物，原产于菲律宾、马来西亚、印度等国。我国在宋代已有引种栽培，而广东地区栽培供药用的历史悠久，故名“广藿香”。广藿香是广东省主要道地药材之一，是“藿香正气丸 （水）”、“藿胆丸”及“抗病毒口服液”等中成药的重要配方药，主要功效为芳香化浊、开胃止呕、发表解暑［1］，此外还对多种人体致病菌和皮肤真菌有抑制作用［2］。

广藿香主产于广东省的石牌、高要、湛江地区及海南省的万宁地区，因产地的自然环境条件、种植习惯、栽培管理、采收加工等的不同，其产品形态、气味、质量差异较大［3-4］，因而存在有关广藿香品种分类方面的争议，有研究根据广藿香蛋白电泳分析及形态学方面的差异，认为广藿香应分为3个栽培品种［5］，也有报道将广藿香按其挥发油的组分划分为“石牌”和“海南”两个化学型［6］。

药材生产传统上认为产于广州石牌地区的广藿香 （俗称“牌香”）品质最好，产于海南万宁地区的广藿香 （俗称“南香”）药效最差，而原产于广州石牌的广藿香由于城市发展等原因目前已濒临灭绝，目前医药生产上使用的原料均为海南和湛江地区产的“南香”精油，有关石牌广藿香的药理学研究少有报道。广藿香的药理作用主要是调节胃肠功能和抗病原微生物两方面，本文利用广东省中药研究所药用植物标本园内保存的“牌香”资源，进行体外抗菌研究，并与“南香”比较，旨在为广藿香化学成分与药理作用的相关性及其作用机制的研究奠定基础，为广藿香不同品种间的质量评价提供实验依据。

1 材料和仪器

1.1 材料

1.1.1 供试药材 实验用广藿香材料均采自本所药用植物标本园，经本所南药研究室蔡岳文教授鉴定均为广藿香Pogoste mon cablin（Blanco）Benth.，是分属于原产石牌和海南的两个栽培品种Pogoste mon cablin（Blanco）Benthcv.shipaiensis、Pogost emon cablin（Blanco）Benthcv.hainanensis.。上述实验材料的全草经自然干燥48h后，切成1～2cm的小段，备用。

1.1.2 供试菌种 供试细菌菌种大肠杆菌（Escherichiacoli），枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），普通变形杆菌（Proteusvu lgaris），金黄色葡萄球菌（Staphylo coccusaureus），表皮葡萄球菌（Staphylococ cusepidermidis），粪肠球菌（Enterococcusfaecalis），绿脓杆菌（Pseudo monasaeruginosa）及供试真菌白色念珠菌（Candida albicans）购自广东省微生物菌种保藏中心。供试真菌产黄青霉（Pencicilliu mchrysogenum）和黑曲霉（As pergillusniger）为本实验室保藏菌种。

1.1.3 主要试剂 营养肉汤、营养琼脂和沙堡氏培养基 （广东环凯微生物科技有限公司）。

1.2 主要仪器

旋转蒸发仪 （RE-52A型，上海亚荣生化仪器厂），超净工作台 （美国T hermo公司），霉菌培养箱（MJP-250型，广东环凯微生物科技有限公司），高压灭菌器（MLS-3750型，SANYO公司），微量移液器（Finnpipette）及漩涡混合器（XW-80 A型，上海琪特分析仪器公司）等。

2 方法

2.1 精油提取及测定方法

按 《中国药典》（2010版）附录ⅩD操作，精油得率：石牌广藿香为1.4%，海南广藿香为3.2%。

2.2 供试菌液的制备

2.2.1 供试细菌菌液的制备 挑取在新鲜斜面培养基上培养24h的供试菌种，接种至营养肉汤培养基中，摇匀后于37℃培养20h，菌液浓度约为108C FU·m L－1（用平板稀释菌落计数法测定），将此菌液用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至1.5×105CFU·m L－1，备用。

2.2.2 供试真菌菌液的制备 供试真菌在沙堡氏琼脂（Sabourau d’sagar）斜面培养基上28℃培养5d左右，待孢子长出后，用2m L0.9%无菌氯化钠溶液将孢子洗下，将此真菌孢子液稀释到1.5×105C FU·m L－1，备用。

2.3 体外抑菌试验方法及最小抑菌浓度（MI C）的测定

参照中国生物药品检验法操作［7］，采用平板打孔法进行抑菌实验。孔的直径为5mm，每孔加浓度为10μ L·m L－1（用含1%聚山梨酯－80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释）的广藿香精油20μL，阴性对照加含1%聚山梨酯－80的0.9%无菌氯化钠溶液20μ L，37℃培养24h后观察、测定抑菌圈大小，根据抑菌圈的大小判断抑菌活性，抑菌圈大小与抑菌活性、敏感程度的关系见表1。每个浓度处理6次重复，测定结果取平均值。广藿香精油的最小抑菌浓度 （MIC）用固体二倍稀释法［7］测定，取50μ L·m L－1的广藿香精油做倍比稀释，测定M I C。

表1 抑菌圈大小与抑菌活性、敏感程度的关系

3 结果与分析

3.1 石牌广藿香和海南广藿香精油对细菌的抑制作用

本试验以10μ L·m L－1的石牌广藿香和海南广藿香精油对7株供试细菌菌株进行抑菌试验。由表2抑菌圈测定结果可见，在该浓度下两种精油对革兰氏阴性细菌均无抑制作用，石牌广藿香对7种供试菌的抑制作用与海南广藿香无显著差异，仅是对表皮葡萄球菌的抑菌效果强于海南广藿香。

从表2精油最低抑菌浓度 （MIC）的测定结果看，石牌广藿香对同种细菌的抑制作用稍强于海南广藿香。

表2 不同广藿香精油对供试细菌的抑制作用

3.2 石牌广藿香和海南广藿香精油对真菌的抑制作用

由表3不同广藿香精油对供试真菌的抑制结果可见，石牌广藿香对皮肤致病菌 （白色念珠菌）和条件致病真菌 （产黄青霉和黑曲霉）的抑制作用都显著强于海南广藿香，海南广藿香精油对白色念珠菌几乎没有抑制；M I C的测定结果显示石牌广藿香精油对白色念珠菌具有较强抗菌作用。

表3 不同广藿香精油对供试真菌的抑制作用

4 讨论

精油是广藿香的主要药用成分，广藿香精油的药理作用之一就是抗菌作用，而精油组分在广藿香的不同品种间存在较大差异，导致了广藿香不同栽培品种间的药效差异。在有关广藿香精油成分与抗菌效果的研究中，杨得坡等［2］认为广藿香醇、异愈创木烯和广藿香烯是广藿香油抗真菌作用的关键所在，而张广文等［8］认为广藿香精油抗菌主要成分之一是广藿香酮，而α-愈创木烯的抗菌活性较差。从本研究的结果看，石牌广藿香的抗菌效果与海南广藿香没有显著差异，但在抗真菌方面的药效显著优于海南广藿香，这可能与石牌广藿香的广藿香酮含量较高有关［9-10］，即广藿香酮是其抗真菌的有效成分，与文献［8］的观点相同，也与传统药材市场上认为石牌的药效较高的观点相一致。

本研究结果表明，石牌广藿香是广藿香中的优良种质，但目前该种质资源已濒临灭绝，规模化种植已不存在，仅在广东省中药研究所内有活体保存。导致石牌广藿香濒临灭绝的一个重要原因是其农艺性状不优：植株分枝较少、生长较慢，即鲜药产量不高，并且药材的含油量低于广藿香等栽培品种，药农的种植积极性不高。鉴于石牌广藿香特殊的地位，对其加以保护并借助现代生物技术加以改良，提高生物产量和含油量，将是今后广藿香研究的一个重要方向。

［1］广东中药志编委会.广东中药志［M］.第一卷.广州：广东科技出版社，1994：13-16.

［2］杨得坡，Chau montJP，MilletJ，等.藿香和广藿香挥发油对皮肤癣菌和条件致病真菌的抑制作用［J］.中国药学杂志，2000，35（1）：9-11.

［3］罗集鹏，曾梅华.广藿香的形态组织学鉴别研究［J］.中药材，20 0 2，25（3）：166-171.

［4］李微，潘超美，徐良，等.不同产地广藿香特征的观察和比较［J］.中药材，20 0 2，25（7）：463-465.

［5］徐颂军，王晓峰，徐祥浩，等.药用植物广藿香的品种分类探讨［J］.华南师范大学学报（自然科学版），20 0 3，（1）：82-86.

［6］罗集鹏，刘玉萍，冯毅凡，等.广藿香的两个化学型及场地与收期对其挥发油成分的影响［J］.药学学报，20 0 3，38（4）：30 7-310.

［7］马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册［M］.北京：科学出版社，20 0 1：211-212.

［8］张广文，蓝文健，苏镜娱，等.广藿香精油化学成分分析及其抗菌活性Ⅱ［J］.中草药，20 0 2，33（3）：210-212.

［9］汪小根，莫小路，蔡岳文，等.组培广藿香与扦插广藿香中百秋里醇和广藿香酮的含量对比分析［J］.药物分析杂志，2009，29（1）：96-99.

［10］罗集鹏，冯毅凡，郭晓玲，等.石牌藿香的挥发油成分分析［J］.中草药，2001，32（4）：299-30 2.

Antimicrobial and Antifungal Effects of Essential Oil from Shipai Cultivar of Pogostemon cablin

MOX iao-lu，CAI Yue-wen，YUAN Liang，CHENYu-zhen，YAN zhen
（Guangdong Research Institute of Tcm，Guangzhou 510520，China）

Objective：To provide research data in basic pharmacology to the qualitye valuation of Shipai culti-var of P．cablin，the essential oil from Shipai cultivar of P．cablin were investigated of antibacterial and antifungal effect in vitro.MethodsEssential oil diffusion through the holes in nutrient agar plate；the minimal inhabitation concentra-tion（MIC）were determined by agar dilution method，in comparison to the essential oil from Hainan cultivar of P．cab-lin.ResultsThe antibacterial activity of essential oil from Shipai cultivar is similar with Hainan cultivar，butt he anti-fungal effect of Shipai cultivar is markedly stronger than Hainan cultivar.ConclusionAs a P．cablin cultivar with high quality，Shipai has higher anti fungal activity than Hainan cultivar.

Pogostemon cablin；Essential oil；Antimicrobial effect

广东省科技厅粤港关键领域重点突破项目（2009A030901011），广州市科技计划基础研究项目（2009J1-C201）

*严振，Tel：（020）22854883，E-mail：yanz＠gdyzy.edu.cn

2011-0 6-02）